| 摘要 | 第1-10页 |
| Abstract | 第10-12页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-28页 |
| 1 红曲菌 | 第12-21页 |
| ·红曲菌的生物学特征 | 第12-13页 |
| ·红曲菌的分类 | 第13-14页 |
| ·红曲菌代谢的产物 | 第14-21页 |
| ·红曲色素 | 第14-16页 |
| ·莫纳可林类物质 | 第16-18页 |
| ·γ-氨基丁酸 | 第18-19页 |
| ·抗菌活性物质 | 第19-20页 |
| ·酶类活性物质 | 第20-21页 |
| ·其他代谢产物 | 第21页 |
| 2 红曲中的桔霉素 | 第21-27页 |
| ·桔霉素的理化性质 | 第22页 |
| ·桔霉素的毒性 | 第22-23页 |
| ·红曲菌中桔霉素的部分代谢途径 | 第23-24页 |
| ·桔霉素的检测 | 第24-27页 |
| ·比色法 | 第24页 |
| ·薄层层析法(TLC) | 第24-25页 |
| ·高效液相色谱(HPLC) | 第25页 |
| ·气相色谱/质谱联用法(GC-MS) | 第25-26页 |
| ·酶联免疫吸附法(ELISA) | 第26-27页 |
| 3 研究目的和意义 | 第27-28页 |
| 第二章 桔霉素完全抗原的构建与鉴定 | 第28-36页 |
| 1 材料 | 第28-29页 |
| ·主要仪器 | 第28-29页 |
| ·主要试剂 | 第29页 |
| 2 方法 | 第29-31页 |
| ·桔霉素与 BSA的偶联 | 第29页 |
| ·桔霉素与 OVA的偶联 | 第29-30页 |
| ·人工抗原的光谱分析 | 第30-31页 |
| ·人工抗原的红外光谱分析 | 第30页 |
| ·人工抗原的紫外-可见光谱及其摩尔比分析 | 第30-31页 |
| 3 结果与分析 | 第31-34页 |
| ·CIT-BSA(OVA)制备 | 第31页 |
| ·人工抗原的红外光谱分析 | 第31-32页 |
| ·人工抗原的紫外-可见光谱及其摩尔比分析 | 第32-34页 |
| 4 小结与讨论 | 第34-36页 |
| ·小结 | 第34页 |
| ·讨论 | 第34-36页 |
| 第三章 抗桔霉素单克隆抗体的制备及性质分析 | 第36-63页 |
| 1 材料 | 第36-41页 |
| ·主要仪器 | 第36-37页 |
| ·主要试剂和材料 | 第37-38页 |
| ·主要试剂 | 第37页 |
| ·主要材料 | 第37-38页 |
| ·主要试剂与培养液的配制 | 第38-41页 |
| ·ELISA相关试剂的配制 | 第38页 |
| ·培养液及相关试剂的配制 | 第38-39页 |
| ·染色体制备相关试剂的配制 | 第39-40页 |
| ·佐剂的制备 | 第40页 |
| ·融合剂的制备 | 第40-41页 |
| 2 方法 | 第41-50页 |
| ·抗桔霉素单克隆抗体的制备 | 第41-46页 |
| ·技术路线 | 第41页 |
| ·脾细胞的制备 | 第41-42页 |
| ·骨髓瘤细胞的制备 | 第42-43页 |
| ·饲养层细胞的制备 | 第43-44页 |
| ·细胞融合 | 第44页 |
| ·融合细胞的培养及筛选 | 第44页 |
| ·有限稀释法亚克隆 | 第44-45页 |
| ·杂交瘤细胞的冻存与复苏 | 第45页 |
| ·杂交瘤细胞的染色体分析 | 第45-46页 |
| ·细胞株稳定性试验 | 第46页 |
| ·抗桔霉素单克隆抗体的性质研究 | 第46-50页 |
| ·单克隆抗体的扩增 | 第46-47页 |
| ·饱和硫酸铵二次盐析法初步纯化单克隆抗体 | 第47页 |
| ·间接非竞争ELISA测抗体效价 | 第47-48页 |
| ·抗原和抗体工作浓度的确定 | 第48页 |
| ·间接竞争ELISA分析抗体的灵敏度 | 第48-49页 |
| ·间接竞争ELISA分析抗体的特异性 | 第49页 |
| ·单克隆抗体识别抗原位点分析 | 第49-50页 |
| 3 结果与分析 | 第50-59页 |
| ·抗桔霉素单克隆抗体的制备 | 第50-54页 |
| ·克隆的形成过程 | 第50-52页 |
| ·杂交瘤细胞株的建立 | 第52-53页 |
| ·杂交瘤细胞株分泌抗体的稳定性分析 | 第53页 |
| ·杂交瘤细胞的染色体分析 | 第53-54页 |
| ·单克隆抗体的性质研究 | 第54-59页 |
| ·单克隆抗体的扩增及纯化 | 第54-55页 |
| ·单克隆抗体和包被抗原工作浓度的确定 | 第55-56页 |
| ·桔霉素间接竞争ELISA的竞争抑制曲线 | 第56页 |
| ·单克隆抗体的特异性分析 | 第56-58页 |
| ·抗体识别表位分析 | 第58-59页 |
| 4 小结与讨论 | 第59-63页 |
| ·小结 | 第59页 |
| ·讨论 | 第59-63页 |
| ·细胞污染及处理方法 | 第60页 |
| ·饲养层细胞的作用 | 第60-61页 |
| ·培养液的注意事项 | 第61页 |
| ·免疫动物抗原及免疫方法的注意事项 | 第61-62页 |
| ·ELISA实验条件的优化 | 第62-63页 |
| 第四章 红曲中桔霉素的间接竞争 ELISA检测 | 第63-73页 |
| 1 材料 | 第63-65页 |
| ·主要试剂 | 第63页 |
| ·主要仪器 | 第63-64页 |
| ·红曲菌种 | 第64-65页 |
| 2 方法 | 第65-67页 |
| ·红曲米的制备及桔霉素的提取方法 | 第65页 |
| ·工作条件的选择 | 第65页 |
| ·ELISA检测 | 第65页 |
| ·高效液相色谱检测系统 | 第65页 |
| ·标准曲线的建立 | 第65-66页 |
| ·ELISA分析方法 | 第65-66页 |
| ·HPLC分析方法 | 第66页 |
| ·添加回收率的测定 | 第66-67页 |
| ·间接竞争 ELISA和 HPLC测定红曲样品中桔霉素含量 | 第67页 |
| 3 结果与分析 | 第67-72页 |
| ·标准曲线 | 第67-68页 |
| ·加标回收样品中桔霉素的检测 | 第68-69页 |
| ·间接竞争ELISA检测红曲样品中桔霉素 | 第69页 |
| ·HPLC与ELISA测定结果的比较 | 第69-72页 |
| 4 小结与讨论 | 第72-73页 |
| 第五章 总结与讨论 | 第73-76页 |
| 1 总结 | 第73-75页 |
| ·桔霉素人工抗原的合成 | 第73页 |
| ·抗桔霉素单克隆抗体的制备 | 第73-74页 |
| ·抗桔霉素单克隆抗体的性质研究 | 第74页 |
| ·间接竞争 ELISA检测红曲中桔霉素 | 第74-75页 |
| 2 讨论 | 第75-76页 |
| ·桔霉素人工抗原的合成 | 第75页 |
| ·桔霉素单克隆抗体的种类 | 第75页 |
| ·红曲中桔霉素的提取方法 | 第75-76页 |
| 参考文献 | 第76-82页 |
| 致谢 | 第82-83页 |
| 附录 | 第83页 |