| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-7页 |
| 英文略词与译名 | 第7-9页 |
| 目录 | 第9-12页 |
| 第一章 绪论 | 第12-30页 |
| ·研究背景和进展 | 第12-27页 |
| ·L-天冬酰胺酶 | 第12-13页 |
| ·L-天冬酰胺酶的研究进展 | 第13-20页 |
| ·植物凝集素 | 第20-22页 |
| ·植物凝集素的研究进展 | 第22-25页 |
| ·黄芪中生物活性物质的研究进展 | 第25-27页 |
| ·研究目的、内容和技术路线 | 第27-30页 |
| ·研究目的 | 第27页 |
| ·研究内容 | 第27-28页 |
| ·研究技术路线 | 第28-30页 |
| 第二章 米黑根毛霉重组L-天冬酰胺酶的基因克隆和表达、纯化、性质及应用 | 第30-62页 |
| ·前言 | 第30页 |
| ·材料与方法 | 第30-40页 |
| ·主要仪器和试剂 | 第30-32页 |
| ·菌株与载体 | 第32页 |
| ·培养基及培养方法 | 第32页 |
| ·米黑根毛霉总DNA、总RNA的提取及mRNA纯化 | 第32-34页 |
| ·L-天冬酰胺酶基因的保守区片断PCR扩增 | 第34页 |
| ·L天冬酰胺酶全长cDNA的克隆 | 第34-35页 |
| ·L-天冬酰胺酶基因组DNA的PCR扩增 | 第35页 |
| ·L天冬酰胺酶cDNA序列和氨基酸序列分析 | 第35-36页 |
| ·L-天冬酰胺酶基因在大肠杆菌中的表达 | 第36页 |
| ·菌体密度、酶活力及蛋白含量测定 | 第36页 |
| ·重组L天冬酰胺酶的纯化 | 第36-37页 |
| ·重组L-天冬酰胺酶的分子量测定 | 第37页 |
| ·重组L-天冬酰胺酶的酶学性质测定 | 第37-38页 |
| ·L-天冬酰胺酶在烘焙食品中的应用 | 第38-39页 |
| ·L-天冬酰胺酶的抗肿瘤活性及其与膜荚黄芪凝集素的协同作用 | 第39-40页 |
| ·结果与讨论 | 第40-60页 |
| ·L-天冬酰胺酶基因(RmAsnase)全长扩增及序列分析 | 第40-43页 |
| ·L-天冬酰胺酶基因(RmAsnase)在大肠杆菌中的表达 | 第43页 |
| ·重组L-天冬酰胺酶的纯化及分子量测定 | 第43-44页 |
| ·空载体对照及重组酶表达验证 | 第44-47页 |
| ·重组L-天冬酰胺酶分子量测定 | 第47-48页 |
| ·重组L-天冬酰胺酶的酶学性质 | 第48-50页 |
| ·重组L-天冬酰胺酶底物特异性和动力学参数 | 第50-51页 |
| ·重组L-天冬酰胺酶在烘焙食品中的应用 | 第51-53页 |
| ·重组L天冬酰胺酶的抗肿瘤活性 | 第53-54页 |
| ·重组L-天冬酰胺酶与膜荚黄芪凝集素协同抑制肿瘤细胞增殖 | 第54-57页 |
| ·重组L-天冬酰胺酶与膜荚黄芪凝集素协同作用方式 | 第57-60页 |
| ·本章小结 | 第60-62页 |
| 第三章 膜荚黄芪凝集素抗肿瘤活性及其作用机理 | 第62-82页 |
| ·前言 | 第62页 |
| ·材料与方法 | 第62-67页 |
| ·主要仪器和试剂 | 第62-63页 |
| ·细胞培养 | 第63-64页 |
| ·膜荚黄芪凝集素的分离纯化 | 第64页 |
| ·血凝活性及蛋白含量的测定 | 第64页 |
| ·肿瘤细胞体外增殖抑制检测 | 第64-65页 |
| ·DAPI染色观察细胞凋亡细胞核形态学变化 | 第65页 |
| ·凋亡细胞片段化DNA的提取及凝胶电泳 | 第65-66页 |
| ·线粒体膜电位检测验证细胞线粒体途径凋亡 | 第66页 |
| ·流式细胞仪检测细胞凋亡率 | 第66页 |
| ·荧光标记AML观察细胞表面结合 | 第66页 |
| ·免疫印迹法分析细胞凋亡信号通道 | 第66-67页 |
| ·圆二色谱蛋白质二级结构分析 | 第67页 |
| ·结果与讨论 | 第67-81页 |
| ·膜荚黄芪凝集素的纯化及其生化性质 | 第67-68页 |
| ·膜荚黄芪凝集素抑制不同肿瘤细胞系的体外增殖 | 第68-69页 |
| ·荧光显微镜观察DAPI染色后凋亡细胞核形态变化 | 第69-70页 |
| ·葡聚糖凝胶电泳观察细胞凋亡DNA片段化 | 第70页 |
| ·线粒体膜电位检测验证细胞线粒体途径凋亡 | 第70-71页 |
| ·流式细胞仪检测细胞凋亡率 | 第71-73页 |
| ·凋亡抑制剂对AML诱导细胞凋亡的影响 | 第73-74页 |
| ·AML诱导的凋亡细胞的相关蛋白表达量的变化 | 第74-75页 |
| ·热变性方法研究AML凝血活性和抗肿瘤活性的相关性 | 第75-79页 |
| ·荧光标记法观察AML与细胞表面的结合 | 第79页 |
| ·游离糖对AML诱导的细胞增殖抑制和凋亡的影响 | 第79-81页 |
| ·本章小结 | 第81-82页 |
| 第四章 结论与建议 | 第82-84页 |
| ·结论 | 第82-83页 |
| ·论文创新点 | 第83页 |
| ·建议 | 第83-84页 |
| 参考文献 | 第84-95页 |
| 致谢 | 第95-96页 |
| 个人简介 | 第96页 |
