| 摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-20页 |
| 第一章绪论 | 第20-41页 |
| ·概述 | 第20页 |
| ·胶原 | 第20-21页 |
| ·胶原的概念 | 第20页 |
| ·胶原的分布及分类 | 第20-21页 |
| ·Ⅱ型胶原 | 第21-25页 |
| ·Ⅱ型胶原的分布 | 第21页 |
| ·软骨的基本组成 | 第21-22页 |
| ·Ⅱ型胶原的结构 | 第22-24页 |
| ·Ⅱ型胶原的一级结构 | 第22页 |
| ·Ⅱ型胶原的二级结构 | 第22-23页 |
| ·Ⅱ型胶原的三级结构 | 第23页 |
| ·Ⅱ型胶原的四级结构 | 第23-24页 |
| ·Ⅱ型胶原的定量 | 第24-25页 |
| ·总蛋白质的测定 | 第24页 |
| ·特异性氨基酸的测定 | 第24-25页 |
| ·免疫学检测法 | 第25页 |
| ·高效液相色谱法 | 第25页 |
| ·胶原的提取 | 第25-28页 |
| ·Ⅱ型胶原的提取原料 | 第25-26页 |
| ·提取方法 | 第26-28页 |
| ·酸法 | 第26页 |
| ·碱法 | 第26页 |
| ·酶法 | 第26-27页 |
| ·中性盐法 | 第27-28页 |
| ·盐析 | 第28页 |
| ·Ⅱ型胶原的性质 | 第28-29页 |
| ·Ⅱ型胶原的应用 | 第29-33页 |
| ·胶原在食品领域中的应用 | 第29-31页 |
| ·胶原在传统食品工业中的应用 | 第29-30页 |
| ·胶原在保健品领域的应用 | 第30-31页 |
| ·胶原在医学领域的应用 | 第31-32页 |
| ·胶原在组织工程化软骨组织构建中的作用 | 第31-32页 |
| ·胶原在其它医疗领域中的作用 | 第32页 |
| ·胶原在美容业中的应用 | 第32-33页 |
| ·国内外对Ⅱ型胶原制品的研究进展与存在问题 | 第33-34页 |
| ·国外对Ⅱ型胶原制品的研究与开发现状 | 第33页 |
| ·国内Ⅱ型胶原制品的研究与开发现状 | 第33-34页 |
| ·存在问题 | 第34页 |
| ·本课题的立题背景和意义 | 第34页 |
| ·本课题的主要研究内容 | 第34-35页 |
| 参考文献 | 第35-41页 |
| 第二章 Ⅱ型胶原测定方法的建立 | 第41-50页 |
| ·前言 | 第41-42页 |
| ·材料与设备 | 第42页 |
| ·材料与试剂 | 第42页 |
| ·实验设备 | 第42页 |
| ·实验方法 | 第42-43页 |
| ·WOESSNER 法测定羟脯氨酸含量 | 第42-43页 |
| ·胶原水解液的制备 | 第42页 |
| ·试剂的配制 | 第42-43页 |
| ·测定方法 | 第43页 |
| ·结果计算 | 第43页 |
| ·反相高效液相色谱法测定Ⅱ型胶原含量 | 第43页 |
| ·样品前处理 | 第43页 |
| ·色谱柱条件 | 第43页 |
| ·标准曲线的制作及线性范围 | 第43页 |
| ·回收率试验 | 第43页 |
| ·精密度试验 | 第43页 |
| ·结果与讨论 | 第43-48页 |
| ·羟脯氨酸测定标准曲线 | 第43-44页 |
| ·高效液相色谱法测定Ⅱ型胶原的含量 | 第44-47页 |
| ·检测波长的选择 | 第44页 |
| ·不同乙腈浓度对Ⅱ型胶原测定结果的影响 | 第44-46页 |
| ·Ⅱ型胶原标准曲线的绘制 | 第46页 |
| ·高效液相色谱法精密度试验 | 第46-47页 |
| ·高效液相色谱法回收率试验 | 第47页 |
| ·RP-HPLC 法与WOESSNER 法的相关性 | 第47-48页 |
| ·本章小结 | 第48页 |
| 参考文献 | 第48-50页 |
| 第三章 Ⅱ型胶原提取工艺的研究 | 第50-73页 |
| ·前言 | 第50-51页 |
| ·材料和仪器 | 第51页 |
| ·实验材料与主要试剂 | 第51页 |
| ·主要仪器 | 第51页 |
| ·实验方法 | 第51-53页 |
| ·常规成分分析 | 第51页 |
| ·Ⅱ型胶原粗制品提取工艺流程 | 第51页 |
| ·原料预处理 | 第51-52页 |
| ·软骨超微结构的测定 | 第52页 |
| ·软骨脱脂 | 第52页 |
| ·软骨中杂蛋白的去除 | 第52页 |
| ·胃蛋白酶酶解工艺 | 第52页 |
| ·盐析 | 第52页 |
| ·脱盐 | 第52-53页 |
| ·结果与讨论 | 第53-70页 |
| ·原料预处理及基本组成 | 第53页 |
| ·鸡胸软骨的超微结构 | 第53-54页 |
| ·软骨脱脂 | 第54页 |
| ·脱脂软骨中杂蛋白的去除 | 第54-55页 |
| ·酶法提取Ⅱ型胶原的最佳工艺条件 | 第55-63页 |
| ·酶解温度对Ⅱ型胶原提取率及二级结构的影响 | 第55-57页 |
| ·酶解时间对Ⅱ型胶原提取率及二级结构的影响 | 第57-59页 |
| ·胃蛋白酶浓度对提取率及二级结构的影响 | 第59-60页 |
| ·最佳酶解条件的确定 | 第60-63页 |
| ·盐析的最佳工艺条件 | 第63-68页 |
| ·温度对胶原回收率的影响 | 第63-64页 |
| ·盐析时间对胶原回收率的影响 | 第64-65页 |
| ·NaCl 浓度对胶原回收率的影响 | 第65页 |
| ·盐析工艺的响应面分析 | 第65-68页 |
| ·Ⅱ型胶原的超滤脱盐 | 第68-69页 |
| ·Ⅱ型胶原粗制品的组成 | 第69-70页 |
| ·本章小节 | 第70页 |
| 参考文献 | 第70-73页 |
| 第四章 Ⅱ型胶原的纯化及结构研究 | 第73-93页 |
| ·前言 | 第73页 |
| ·材料和设备 | 第73-74页 |
| ·实验材料 | 第73-74页 |
| ·实验设备 | 第74页 |
| ·实验方法 | 第74-76页 |
| ·Ⅱ型胶原的纯化 | 第74页 |
| ·Ⅱ型胶原的离子交换色谱柱纯化 | 第74-75页 |
| ·Ⅱ型胶原纯度的鉴定 | 第75页 |
| ·SDS-PAGE 电泳 | 第75页 |
| ·RP-HPLC 色谱 | 第75页 |
| ·Ⅱ型胶原的结构 | 第75-76页 |
| ·Ⅱ型胶原的理化性质测定 | 第76页 |
| ·变性温度的测定 | 第76页 |
| ·紫外分光光度计测定 | 第76页 |
| ·Ⅱ型胶原溶解度的测定 | 第76页 |
| ·结果和讨论 | 第76-89页 |
| ·Ⅱ型胶原的纯化 | 第77页 |
| ·Ⅱ型胶原的表面结构 | 第77-78页 |
| ·Ⅱ型胶原的纯度 | 第78-79页 |
| ·Ⅱ型胶原的组成和结构 | 第79-85页 |
| ·Ⅱ型胶原的氨基酸组成 | 第79-80页 |
| ·Ⅱ型胶原的红外光谱 | 第80-81页 |
| ·Ⅱ型胶原的二级结构 | 第81-82页 |
| ·Ⅱ型胶原的晶体结构 | 第82-83页 |
| ·Ⅱ型胶原的超微结构 | 第83页 |
| ·Ⅱ型胶原的微观结构 | 第83-85页 |
| ·Ⅱ型胶原的理化性质 | 第85-89页 |
| ·Ⅱ型胶原的变性温度 | 第85-86页 |
| ·Ⅱ型胶原的紫外吸收光谱 | 第86-87页 |
| ·Ⅱ型胶原的溶解性 | 第87-89页 |
| ·本章小节 | 第89页 |
| 参考文献 | 第89-93页 |
| 第五章 Ⅱ型胶原修复软骨损伤的研究 | 第93-114页 |
| ·前言 | 第93页 |
| ·材料与设备 | 第93-94页 |
| ·实验材料与主要试剂 | 第93-94页 |
| ·主要仪器 | 第94页 |
| ·实验方法 | 第94-97页 |
| ·Ⅱ型胶原-硫酸软骨素复合支架的制备 | 第94页 |
| ·Ⅱ型胶原支架性质的测定 | 第94-95页 |
| ·变性温度的测定 | 第94-95页 |
| ·游离氨基含量的测定 | 第95页 |
| ·硫酸软骨素的交联量 | 第95页 |
| ·Ⅱ型胶原酶对支架的降解 | 第95页 |
| ·Ⅱ型胶原支架的超微结构 | 第95页 |
| ·软骨细胞的分离培养 | 第95-96页 |
| ·兔关节软骨细胞的分离培养 | 第95页 |
| ·兔关节软骨细胞的鉴定 | 第95-96页 |
| ·支架处理 | 第96页 |
| ·细胞接种和分组 | 第96页 |
| ·细胞培养指标的测定 | 第96-97页 |
| ·DNA 及GAG 的测定 | 第96页 |
| ·Ⅱ型胶原的测定 | 第96页 |
| ·组织形态学切片的制备 | 第96-97页 |
| ·扫描电镜观察软骨细胞形态 | 第97页 |
| ·结果和讨论 | 第97-110页 |
| ·EDC 对Ⅱ型胶原支架的性质的影响 | 第97-102页 |
| ·EDC 浓度对Ⅱ型胶原-硫酸软骨素支架热稳定性的影响 | 第98-99页 |
| ·EDC 浓度对Ⅱ型胶原-硫酸软骨素支架游离氨基含量的影响 | 第99-100页 |
| ·EDC浓度对Ⅱ型胶原-硫酸软骨素支架硫酸软骨素含量的影响 | 第100页 |
| ·EDC 浓度对Ⅱ型胶原-硫酸软骨素支架胶原酶抗性的影响 | 第100-101页 |
| ·EDC 浓度对Ⅱ型胶原-硫酸软骨素支架吸水率的影响 | 第101页 |
| ·Ⅱ型胶原-硫酸软骨素支架的表面结构 | 第101-102页 |
| ·Ⅱ型胶原-硫酸软骨素支架的超微结构 | 第102页 |
| ·软骨细胞的鉴定 | 第102-103页 |
| ·倒置显微镜观察 | 第102-103页 |
| ·软骨细胞表型鉴定 | 第103页 |
| ·软骨细胞在支架上的培养 | 第103-110页 |
| ·胶原支架对软骨细胞吸附力的观察 | 第104页 |
| ·不同支架材料对DNA 和糖胺聚糖(GAG)含量的影响 | 第104-105页 |
| ·不同支架材料的组织切片观察 | 第105-108页 |
| ·不同支架材料对软骨细胞Ⅱ型胶原分泌的影响 | 第108-109页 |
| ·不同支架上软骨细胞的超微结构 | 第109-110页 |
| ·本章小结 | 第110页 |
| 参考文献 | 第110-114页 |
| 第六章 Ⅱ型胶原对类风湿性关节炎的作用 | 第114-131页 |
| ·前言 | 第114页 |
| ·材料和仪器 | 第114-115页 |
| ·实验材料与主要试剂 | 第114-115页 |
| ·主要仪器 | 第115页 |
| ·实验方法 | 第115-120页 |
| ·主要试剂的配制 | 第115-116页 |
| ·PBS 的配制 | 第115页 |
| ·青、链霉素溶液的配制 | 第115页 |
| ·培养液的配制 | 第115-116页 |
| ·血清的灭活 | 第116页 |
| ·谷氨酰胺溶液 | 第116页 |
| ·红细胞裂解液（Tris-NH4Cl） | 第116页 |
| ·实验动物及分组 | 第116页 |
| ·CIA 模型的建立及分组 | 第116-117页 |
| ·关节炎的判断及观察方法 | 第117-118页 |
| ·踝关节及脚掌厚度测量 | 第117页 |
| ·关节炎指数 | 第117页 |
| ·组织切片 | 第117-118页 |
| ·淋巴细胞增殖反应 | 第118页 |
| ·DTH 反应（急性超敏反应） | 第118页 |
| ·细胞因子的测定 | 第118-120页 |
| ·白细胞介素I（IL-1）的诱生与检测 | 第118-119页 |
| ·白细胞介素Ⅱ(IL-2)的诱生与检测 | 第119页 |
| ·TNF-α的测定 | 第119-120页 |
| ·统计学处理 | 第120页 |
| ·结果和讨论 | 第120-128页 |
| ·大鼠类风湿性关节炎模型的建立 | 第120-122页 |
| ·Ⅱ型胶原对大鼠足掌厚度的影响 | 第122页 |
| ·Ⅱ型胶原对大鼠踝关节的影响 | 第122-123页 |
| ·Ⅱ型胶原对大鼠关节评分的影响 | 第123-124页 |
| ·Ⅱ型胶原对大鼠急性超敏反应的影响 | 第124页 |
| ·Ⅱ型胶原对大鼠淋巴细胞增殖的影响 | 第124-125页 |
| ·细胞因子 | 第125-128页 |
| ·Ⅱ型胶原对大鼠IL-1 分泌的影响 | 第125-127页 |
| ·Ⅱ型胶原对大鼠IL-2 分泌的影响 | 第127页 |
| ·Ⅱ型胶原对大鼠TNF-α分泌的影响 | 第127-128页 |
| ·本章小结 | 第128-129页 |
| 参考文献 | 第129-131页 |
| 主要结论 | 第131-133页 |
| 本论文主要创新点 | 第133-134页 |
| 攻读博士期间发表与本论文相关的文章 | 第134-135页 |
| 致谢 | 第135页 |
