| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 缩略语 | 第7-12页 |
| 第一章 引言 | 第12-24页 |
| 1.1 食物过敏 | 第12-14页 |
| 1.1.1 食物过敏反应的免疫学机制 | 第12-13页 |
| 1.1.2 食物过敏原 | 第13页 |
| 1.1.3 食物过敏的的诊断 | 第13页 |
| 1.1.4 高纯度食物过敏原蛋白的应用 | 第13-14页 |
| 1.2 花生过敏 | 第14-15页 |
| 1.2.1 花生过敏机理 | 第14页 |
| 1.2.2 花生主要过敏原蛋白 | 第14-15页 |
| 1.3 花生过敏原蛋白分离纯化方法研究进展 | 第15-22页 |
| 1.3.1 花生中主要过敏原蛋白的分离纯化 | 第16-21页 |
| 1.3.2 花生中非主要过敏原蛋白的分离纯化 | 第21-22页 |
| 1.4 立题背景与研究内容 | 第22-24页 |
| 1.4.1 立题背景 | 第22-23页 |
| 1.4.2 研究内容 | 第23-24页 |
| 第二章 花生过敏原蛋白Ara h 1纯化方法的研究 | 第24-50页 |
| 2.1 材料与设备 | 第24-26页 |
| 2.1.1 试剂与材料 | 第24-25页 |
| 2.1.2 设备 | 第25页 |
| 2.1.3 溶液配制 | 第25-26页 |
| 2.2 实验方法 | 第26-33页 |
| 2.2.1 花生脱脂 | 第26页 |
| 2.2.2 花生蛋白的浸提 | 第26-27页 |
| 2.2.3 硫酸铵分级沉淀花生蛋白浸提液 | 第27页 |
| 2.2.4 层析柱的装填 | 第27-28页 |
| 2.2.5 DEAE-Sepharose Fast Flow阴离子交换层析分离Ara h 1 | 第28-29页 |
| 2.2.6 Ara h 1样品的浓缩 | 第29页 |
| 2.2.7 Superdex 200 prep grade凝胶过滤层析分离Ara h 1 | 第29页 |
| 2.2.8 Sephadex G-75凝胶过滤层析分离Ara h 1 | 第29页 |
| 2.2.9 羟基磷灰石层析分离Ara h 1 | 第29-30页 |
| 2.2.10 三种层析纯化方案设计 | 第30页 |
| 2.2.11 SDS-PAGE电泳分析蛋白样品及其纯度 | 第30-31页 |
| 2.2.12 考马斯亮蓝法(Bradford法)测蛋白质浓度 | 第31-32页 |
| 2.2.13 质谱鉴定花生过敏原蛋白Ara h 1 | 第32-33页 |
| 2.3 结果与分析 | 第33-44页 |
| 2.3.1 花生蛋白浸提液电泳分析 | 第33-34页 |
| 2.3.2 硫酸铵分级沉淀花生蛋白浸提液 | 第34-36页 |
| 2.3.3 层析纯化方案一的结果 | 第36-38页 |
| 2.3.4 层析纯化方案二的结果 | 第38-39页 |
| 2.3.5 层析纯化方案三的结果 | 第39-41页 |
| 2.3.6 羟基磷灰石层析纯化Ara h 1的SDS-PAGE电泳分析 | 第41页 |
| 2.3.7 羟基磷灰石层析纯化得Ara h 1的质谱鉴定 | 第41-43页 |
| 2.3.8 纯化方案三的蛋白含量变化 | 第43-44页 |
| 2.4 讨论 | 第44-49页 |
| 2.4.1 硫酸铵分级沉淀花生蛋白浸提液 | 第44-45页 |
| 2.4.2 关于DEAE-Sepharose Fast Flow阴离子交换层析纯化Ara h 1 | 第45-46页 |
| 2.4.3 关于Superdex 200 prep grade凝胶过滤层析纯化Ara h 1 | 第46-47页 |
| 2.4.4 关于羟基磷灰石层析纯化Ara h 1 | 第47页 |
| 2.4.5 关于33kD的蛋白 | 第47-48页 |
| 2.4.6 三种层析纯化方案的比较 | 第48页 |
| 2.4.7 Ara h 1纯化中的问题 | 第48-49页 |
| 2.5 小结 | 第49-50页 |
| 第三章 花生过敏原蛋白Ara h 1小试规模放大纯化 | 第50-63页 |
| 3.1 材料与设备 | 第50-52页 |
| 3.1.1 试剂与材料 | 第50-51页 |
| 3.1.2 设备 | 第51页 |
| 3.1.3 溶液配制 | 第51-52页 |
| 3.2 实验方法 | 第52-54页 |
| 3.2.1 花生蛋白样品前处理 | 第52页 |
| 3.2.2 层析柱的装填 | 第52页 |
| 3.2.3 层析分离纯化花生过敏原蛋白Ara h 1 | 第52-53页 |
| 3.2.4 SDS-PAGE电泳分析蛋白样品及其纯度 | 第53页 |
| 3.2.5 蛋白浓度测定 | 第53页 |
| 3.2.6 Ara h 1结构分析 | 第53-54页 |
| 3.3 结果与分析 | 第54-60页 |
| 3.3.1 DEAE-Sepharose Fast Flow阴离子交换层析初步纯化Ara h 1 | 第54-56页 |
| 3.3.2 羟基磷灰石层析进一步分离纯化Ara h 1 | 第56-58页 |
| 3.3.3 层析纯化中蛋白质含量的变化 | 第58页 |
| 3.3.4 Ara h 1的二级结构分析 | 第58-59页 |
| 3.3.5 ANS荧光探针法分析Ara h 1表面疏水性 | 第59-60页 |
| 3.4 讨论 | 第60-62页 |
| 3.4.1 DEAE-Sepharose Fast Flow阴离子交换层析小试规模放大设计 | 第60-61页 |
| 3.4.2 羟基磷灰石层析小试规模放大设计 | 第61-62页 |
| 3.4.3 层析放大实验中的问题 | 第62页 |
| 3.5 小结 | 第62-63页 |
| 第四章 花生过敏原蛋白Ara h 1纯化中试工艺设计 | 第63-69页 |
| 4.1 Ara h 1制备工艺流程及说明 | 第63-65页 |
| 4.1.1 花生脱红衣处理 | 第63页 |
| 4.1.2 关于花生蛋白浸提液 | 第63-64页 |
| 4.1.3 中试设计中的物料变化 | 第64-65页 |
| 4.2 Ara h 1中试工艺设备说明 | 第65-68页 |
| 4.2.1 低温真空干燥箱的选择 | 第65-66页 |
| 4.2.2 花生脱红衣机的选择 | 第66页 |
| 4.2.3 液氮冷冻粉碎机的选择 | 第66页 |
| 4.2.4 搅拌罐及缓冲罐的选择 | 第66-67页 |
| 4.2.5 低温冷冻离心机的选择 | 第67页 |
| 4.2.6 中空纤维超滤设备的选择 | 第67页 |
| 4.2.7 层析系统的选择 | 第67-68页 |
| 4.2.8 真空冷冻干燥设备选择 | 第68页 |
| 4.3 Ara h 1制备工艺设备流程图 | 第68页 |
| 4.4 小结 | 第68-69页 |
| 第五章 结论与展望 | 第69-71页 |
| 5.1 结论 | 第69页 |
| 5.2 创新点 | 第69页 |
| 5.3 展望 | 第69-71页 |
| 致谢 | 第71-72页 |
| 参考文献 | 第72-75页 |
| 附录A | 第75-85页 |
| 附录B | 第85-86页 |
| 附录C | 第86页 |
