| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-7页 |
| 缩写符号 | 第8-13页 |
| 第一章 绪论 | 第13-23页 |
| 1.1 淀粉水解工艺 | 第13页 |
| 1.2 淀粉酶的分类 | 第13-14页 |
| 1.3 高温α-淀粉酶的来源 | 第14-15页 |
| 1.4 高温α-淀粉酶的结构特征 | 第15-16页 |
| 1.5 高温α-淀粉酶的发酵生产 | 第16-17页 |
| 1.6 高温α-淀粉酶的应用 | 第17-19页 |
| 1.6.1 食品行业 | 第17-18页 |
| 1.6.2 洗涤行业 | 第18页 |
| 1.6.3 纺织行业 | 第18页 |
| 1.6.4 造纸行业 | 第18页 |
| 1.6.5 医药行业 | 第18-19页 |
| 1.7 高温α-淀粉酶的热稳定性改造 | 第19-20页 |
| 1.7.1 定点突变提高高温α-淀粉酶的稳定性 | 第19-20页 |
| 1.7.2 不同来源α-淀粉酶进行杂合提高α-淀粉酶的稳定性 | 第20页 |
| 1.8 钙离子对高温α-淀粉酶的作用 | 第20-21页 |
| 1.9 大肠杆菌表达系统 | 第21页 |
| 1.10 短小芽孢杆菌表达系统 | 第21页 |
| 1.11 立项依据及研究意义 | 第21-22页 |
| 1.12 主要研究内容 | 第22-23页 |
| 第二章 B.stearothermophilusα-淀粉酶在大肠杆菌中的重组表达及酶学性质研究 | 第23-41页 |
| 2.1 前言 | 第23页 |
| 2.2 材料和方法 | 第23-29页 |
| 2.2.1 菌株与质粒 | 第23页 |
| 2.2.2 试剂和仪器 | 第23-24页 |
| 2.2.3 培养基和培养条件 | 第24-25页 |
| 2.2.4 基因工程操作 | 第25-27页 |
| 2.2.5 重组酶的分离纯化 | 第27页 |
| 2.2.6 分析方法 | 第27-29页 |
| 2.3 结果与讨论 | 第29-39页 |
| 2.3.1 AmyMH基因的密码子优化和重组质粒的构建 | 第29-31页 |
| 2.3.2 重组菌E.coliBL21(DE3)/pET-24a-AmyMH的构建及摇瓶发酵 | 第31-32页 |
| 2.3.3 信号肽对大肠杆菌表达AmyMH的影响 | 第32-33页 |
| 2.3.4 AmyMH的表达对大肠杆菌细胞毒性的探究 | 第33-35页 |
| 2.3.5 AmyMH在E.coliC41(DE3)中的重组表达 | 第35-36页 |
| 2.3.6 重组AmyMH的分离纯化 | 第36-37页 |
| 2.3.7 重组AmyMH的酶学性质研究 | 第37-39页 |
| 2.4 小结 | 第39-41页 |
| 第三章 AmyMH在短小芽孢杆菌中的重组表达及发酵优化 | 第41-59页 |
| 3.1 前言 | 第41页 |
| 3.2 材料与方法 | 第41-44页 |
| 3.2.1 菌株和质粒 | 第41页 |
| 3.2.2 试剂和仪器 | 第41页 |
| 3.2.3 培养基和培养条件 | 第41页 |
| 3.2.4 基因工程操作 | 第41-43页 |
| 3.2.5 重组酶的分离纯化 | 第43页 |
| 3.2.6 分析方法 | 第43-44页 |
| 3.3 结果与讨论 | 第44-57页 |
| 3.3.1 重组质粒pNCMO2-AmyMH的构建 | 第44-45页 |
| 3.3.2 重组菌B.choshinensis/pNCMO2-AmyMH的构建及摇瓶发酵 | 第45-46页 |
| 3.3.3 重组菌B.choshinensis/pNCMO2-AmyMH种子生长曲线及种龄的确定 | 第46-47页 |
| 3.3.4 温度、pH及接种量对重组菌发酵产酶的影响 | 第47-49页 |
| 3.3.5 碳源对重组酶发酵产酶的影响 | 第49页 |
| 3.3.6 氮源对重组酶发酵产酶的影响 | 第49-50页 |
| 3.3.7 氨基酸对重组酶发酵产酶的影响 | 第50-51页 |
| 3.3.8 脯氨酸促进重组短小芽孢杆菌机制探究 | 第51-54页 |
| 3.3.9 响应面法优化发酵培养基 | 第54-57页 |
| 3.4 小结 | 第57-59页 |
| 第四章 结构域B中天冬酰胺的突变提高AmyMH热稳定性 | 第59-69页 |
| 4.1 前言 | 第59-60页 |
| 4.2 材料和方法 | 第60-61页 |
| 4.2.1 菌种和质粒 | 第60页 |
| 4.2.2 试剂和仪器 | 第60页 |
| 4.2.3 培养基与培养条件 | 第60页 |
| 4.2.4 基因工程操作 | 第60-61页 |
| 4.2.5 重组酶的分离纯化 | 第61页 |
| 4.2.6 分析方法 | 第61页 |
| 4.2.7 蛋白质氨基酸序列比对及晶体结构模拟 | 第61页 |
| 4.3 结果与讨论 | 第61-67页 |
| 4.3.1 突变位点的选择 | 第61-62页 |
| 4.3.2 AmyMH的定点突变、重组表达及蛋白纯化 | 第62-63页 |
| 4.3.3 温度和pH对AmyMH突变体酶活力的影响 | 第63-64页 |
| 4.3.4 AmyMH突变体动力学参数的测定 | 第64-65页 |
| 4.3.5 AmyMH突变体热稳定性的研究 | 第65页 |
| 4.3.6 蛋白质结构模拟及分析 | 第65-67页 |
| 4.4 小结 | 第67-69页 |
| 第五章 178-200位Loop的固定提高AmyMH热稳定性及机理研究 | 第69-87页 |
| 5.1 前言 | 第69页 |
| 5.2 材料和方法 | 第69-71页 |
| 5.2.1 菌种和质粒 | 第69页 |
| 5.2.2 试剂和仪器 | 第69-70页 |
| 5.2.3 培养基与培养条件 | 第70页 |
| 5.2.4 基因工程操作 | 第70页 |
| 5.2.5 重组酶的分离纯化 | 第70-71页 |
| 5.2.6 分析方法 | 第71页 |
| 5.2.7 蛋白质氨基酸序列比对及晶体结构模拟 | 第71页 |
| 5.3 结果与讨论 | 第71-86页 |
| 5.3.1 突变位点的选择 | 第71-73页 |
| 5.3.2 AmyMH的定点突变、重组表达与纯化 | 第73-75页 |
| 5.3.3 温度和pH对AmyMH突变体酶活力的影响 | 第75-76页 |
| 5.3.4 AmyMH突变体动力学参数的测定 | 第76页 |
| 5.3.5 EDTA对AmyMH突变体酶活力及稳定性的影响 | 第76-77页 |
| 5.3.6 AmyMH突变体热稳定性的研究 | 第77-79页 |
| 5.3.7 AmyMH突变体结构模拟及分析 | 第79-80页 |
| 5.3.8 相似Loop的固定对B.licheniformisα-淀粉酶稳定性的影响 | 第80-86页 |
| 5.4 小结 | 第86-87页 |
| 第六章 N端寡肽融合影响AmyMH性质研究 | 第87-97页 |
| 6.1 前言 | 第87页 |
| 6.2 材料和方法 | 第87-89页 |
| 6.2.1 菌种和质粒 | 第87页 |
| 6.2.2 试剂和仪器 | 第87页 |
| 6.2.3 培养基与培养条件 | 第87页 |
| 6.2.4 基因工程操作 | 第87-89页 |
| 6.2.5 重组酶的分离纯化 | 第89页 |
| 6.2.6 分析方法 | 第89页 |
| 6.3 结果与讨论 | 第89-96页 |
| 6.3.1 表达融合蛋白质粒的构建与融合蛋白的表达 | 第89-90页 |
| 6.3.2 融合蛋白的纯化 | 第90-91页 |
| 6.3.3 融合蛋白最适反应pH及最适反应温度 | 第91-92页 |
| 6.3.4 EDTA对融合蛋白活性及稳定性的影响 | 第92-93页 |
| 6.3.5 融合蛋白的热稳定性分析 | 第93-96页 |
| 6.4 小结 | 第96-97页 |
| 主要结论与展望 | 第97-100页 |
| 论文主要创新点 | 第100-101页 |
| 致谢 | 第101-102页 |
| 参考文献 | 第102-110页 |
| 附录：作者在攻读博士学位期间发表的论文 | 第110页 |
