| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5页 |
| 第一章 文献综述 | 第11-23页 |
| 1.1 引言 | 第11页 |
| 1.2 反式脂肪酸 | 第11-15页 |
| 1.2.1 反式脂肪酸的来源 | 第11-12页 |
| 1.2.1.1 油脂的氢化 | 第11-12页 |
| 1.2.1.2 油脂的精炼及高温加热处理 | 第12页 |
| 1.2.1.3 反刍动物脂肪及其乳制品 | 第12页 |
| 1.2.2 反式脂肪酸的危害 | 第12-14页 |
| 1.2.2.1 反式脂肪酸与心血管疾病 | 第12-13页 |
| 1.2.2.2 反式脂肪酸与糖尿病 | 第13页 |
| 1.2.2.3 反式脂肪酸与婴幼儿及青少年的健康 | 第13页 |
| 1.2.2.4 反式脂肪酸与生殖 | 第13页 |
| 1.2.2.5 反式脂肪酸的其它危害 | 第13-14页 |
| 1.2.3 反式脂肪酸的作用机制 | 第14-15页 |
| 1.2.3.1 反式脂肪酸与血脂 | 第14页 |
| 1.2.3.2 反式脂肪酸与内皮细胞功能 | 第14页 |
| 1.2.3.3 反式脂肪酸与炎症因子 | 第14-15页 |
| 1.2.3.4 反式脂肪酸与胰岛素抵抗 | 第15页 |
| 1.3 细胞迁移 | 第15-19页 |
| 1.3.1 细胞迁移的过程 | 第15-16页 |
| 1.3.1.1 极化 | 第16页 |
| 1.3.1.2 化学趋向性 | 第16页 |
| 1.3.1.3 细胞外基质的降解 | 第16页 |
| 1.3.2 细胞迁移相关调控因子 | 第16-18页 |
| 1.3.2.1 Wnt/β-catenin信号转导通路 | 第17页 |
| 1.3.2.2 基质金属蛋白酶 | 第17-18页 |
| 1.3.3 细胞迁移的检测方法 | 第18-19页 |
| 1.3.3.1 划痕实验 | 第18-19页 |
| 1.3.3.2 Transwell实验 | 第19页 |
| 1.3.3.3 其它检测方法 | 第19页 |
| 1.4 滋养层细胞与迁移 | 第19-21页 |
| 1.4.1 滋养层细胞 | 第19-20页 |
| 1.4.2 植块培养 | 第20页 |
| 1.4.3 酶联合消化法 | 第20页 |
| 1.4.4 绒毛外滋养层细胞的培养 | 第20-21页 |
| 1.4.5 滋养层细胞的迁移 | 第21页 |
| 1.5 选题意义 | 第21-22页 |
| 1.6 研究内容 | 第22-23页 |
| 第二章 实验材料与方法 | 第23-37页 |
| 2.1 实验材料 | 第23-26页 |
| 2.1.1 滋养层组织 | 第23页 |
| 2.1.2 材料 | 第23-25页 |
| 2.1.3 仪器设备 | 第25-26页 |
| 2.2 试剂配制 | 第26-29页 |
| 2.2.1 药物配制 | 第26页 |
| 2.2.2 磷酸盐缓冲溶液(PBS) | 第26页 |
| 2.2.2.1 10×PBS | 第26页 |
| 2.2.2.2 1×PBS | 第26页 |
| 2.2.3 DMEM/F12培养基 | 第26页 |
| 2.2.4 胰蛋白酶 | 第26-27页 |
| 2.2.5 Ⅰ型胶原酶 | 第27页 |
| 2.2.6 SDS-PAGE凝胶电泳 | 第27页 |
| 2.2.6.1 30%聚丙烯酰胺凝胶 | 第27页 |
| 2.2.6.2 20%十二烷基磺酸钠(SDS) | 第27页 |
| 2.2.6.3 浓缩胶缓冲液 | 第27页 |
| 2.2.6.4 分离胶缓冲液 | 第27页 |
| 2.2.6.5 10×电泳缓冲液 | 第27页 |
| 2.2.6.6 10×过硫酸胺(APS) | 第27页 |
| 2.2.7 蛋白免疫印记(Western blot) | 第27-28页 |
| 2.2.7.1 10×running buffer | 第27-28页 |
| 2.2.7.2 10×transfer buffer | 第28页 |
| 2.2.7.3 转移平衡液 | 第28页 |
| 2.2.7.4 PBST缓冲液 | 第28页 |
| 2.2.7.5 封闭剂(5%脱脂奶粉) | 第28页 |
| 2.2.7.6 显影液 | 第28页 |
| 2.2.7.7 定影液 | 第28页 |
| 2.2.8 Transwell所用试剂 | 第28-29页 |
| 2.2.8.1 Giemsa原液 | 第28页 |
| 2.2.8.2 Sorensen缓冲液 | 第28页 |
| 2.2.8.3 Giemsa染色液 | 第28-29页 |
| 2.2.9 明胶酶谱法所用试剂 | 第29页 |
| 2.2.9.1 10×电泳缓冲液 | 第29页 |
| 2.2.9.2 25×上样缓冲液 | 第29页 |
| 2.2.9.3 洗涤溶液 | 第29页 |
| 2.2.9.4 Tris/HCl缓冲液 | 第29页 |
| 2.2.9.5 反应液 | 第29页 |
| 2.2.9.6 染色液 | 第29页 |
| 2.2.9.7 脱色液 | 第29页 |
| 2.3 实验方法 | 第29-37页 |
| 2.3.1 滋养层组织块培养 | 第29-30页 |
| 2.3.2 绒毛外滋养层细胞的培养 | 第30页 |
| 2.3.3 细胞的传代 | 第30页 |
| 2.3.4 滋养层细胞的鉴定(免疫细胞化学染色法) | 第30-31页 |
| 2.3.5 划痕实验 | 第31页 |
| 2.3.6 Transwell实验 | 第31-32页 |
| 2.3.7 BCA法检测蛋白浓度 | 第32-33页 |
| 2.3.8 明胶酶谱实验 | 第33页 |
| 2.3.9 Western blot蛋白免疫印迹 | 第33-36页 |
| 2.3.9.1 细胞总蛋白提取 | 第33-34页 |
| 2.3.9.2 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第34页 |
| 2.3.9.3 转膜 | 第34-35页 |
| 2.3.9.4 封闭 | 第35页 |
| 2.3.9.5 一抗孵育 | 第35页 |
| 2.3.9.6 洗去一抗 | 第35页 |
| 2.3.9.7 二抗孵育 | 第35页 |
| 2.3.9.8 洗去二抗 | 第35页 |
| 2.3.9.9 ECL显影 | 第35-36页 |
| 2.3.10 统计分析 | 第36-37页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第37-53页 |
| 3.1 滋养层组织及细胞的体外培养 | 第37-39页 |
| 3.1.1 滋养层组织块体外培养 | 第37页 |
| 3.1.2 绒毛外滋养层细胞的培养 | 第37-38页 |
| 3.1.3 滋养层细胞的鉴定 | 第38-39页 |
| 3.2 反油酸和反亚油酸对滋养层细胞迁移的影响 | 第39-44页 |
| 3.2.1 组织块体外培养法分析反式脂肪酸对滋养层细胞迁移的影响 | 第39-40页 |
| 3.2.2 划痕实验分析反式脂肪酸对滋养层细胞迁移的影响 | 第40-42页 |
| 3.2.3 Transwell实验分析反式脂肪酸对滋养层细胞迁移的影响 | 第42-44页 |
| 3.3 反式脂肪酸影响滋养层细胞迁移的机制探讨 | 第44-51页 |
| 3.3.1 反式脂肪酸对滋养层细胞β-catenin蛋白表达的影响 | 第44页 |
| 3.3.2 反式脂肪酸对滋养层细胞基质金属蛋白酶-2活性的影响 | 第44-45页 |
| 3.3.3 β-catenin激活剂拮抗反式脂肪酸对滋养层细胞迁移能力的影响 | 第45-50页 |
| 3.3.3.1 β-catenin激活剂锂离子浓度筛选 | 第45-46页 |
| 3.3.3.2 组织块体外培养法分析Li~+拮抗反式脂肪酸对滋养层细胞迁移的抑制作用 | 第46-47页 |
| 3.3.3.3 划痕实验分析Li~+拮抗反式脂肪酸对滋养层细胞迁移的抑制作用 | 第47-49页 |
| 3.3.3.4 Transwell实验分析Li~+拮抗反式脂肪酸对滋养层细胞迁移的抑制作用 | 第49-50页 |
| 3.3.4 β-catenin激活剂LiCl抑制反式脂肪酸对滋养层细胞β-catenin蛋白表达的下调作用 | 第50页 |
| 3.3.5 β-catenin激活剂LiCl拮抗反式脂肪酸对滋养层细胞MMP-2分泌的抑制 | 第50-51页 |
| 3.4 讨论 | 第51-53页 |
| 第四章 结论 | 第53-54页 |
| 参考文献 | 第54-57页 |
| 致谢 | 第57页 |
