| 摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-7页 |
| 第一章 绪论 | 第7-14页 |
| ·胆固醇氧化酶研究进展简介 | 第7-9页 |
| ·COD的特性及稳定性现状 | 第7-8页 |
| ·COD的分子改造及稳定性研究 | 第8-9页 |
| ·影响蛋白质热稳定的因素 | 第9-11页 |
| ·分子内相互作用 | 第9-10页 |
| ·构象因素 | 第10-11页 |
| ·应用生物信息学辅助设计蛋白质稳定性改造的策略 | 第11-12页 |
| ·同源比对的改造策略 | 第11页 |
| ·结合蛋白质解折叠自由能的改造策略 | 第11-12页 |
| ·结合温度因子的改造策略 | 第12页 |
| ·设计二硫键的改造策略 | 第12页 |
| ·优化表面电荷的策略 | 第12页 |
| ·本课题研究的主要内容 | 第12-14页 |
| 第二章 材料与方法 | 第14-23页 |
| ·实验材料 | 第14-17页 |
| ·菌株 | 第14页 |
| ·质粒 | 第14页 |
| ·引物 | 第14-15页 |
| ·主要试剂 | 第15-16页 |
| ·主要仪器 | 第16页 |
| ·培养基 | 第16页 |
| ·常用溶液配方 | 第16-17页 |
| ·实验方法 | 第17-23页 |
| ·质粒DNA的提取 | 第17页 |
| ·突变株的构建 | 第17-18页 |
| ·粗酶液的制备及纯化 | 第18-20页 |
| ·酶活及酶学性质的测定 | 第20-21页 |
| ·圆二色谱检测蛋白二级结构的变化及Tm值的确定 | 第21页 |
| ·序列比对 | 第21页 |
| ·同源模拟CODr及突变株三维结构 | 第21-22页 |
| ·采用Rosetta进行突变位点预测 | 第22-23页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第23-41页 |
| ·CODr关键部位lid区域的理性改造 | 第23-27页 |
| ·CODr lid区域同源比对及待突变位点的确定 | 第23-24页 |
| ·lid区域的分子改造 | 第24-25页 |
| ·突变酶的热稳定性及底物特异性 | 第25-27页 |
| ·基于解折叠自由能的计算，设计并筛选热稳定性提高的正突变株 | 第27-36页 |
| ·解折叠自由能的解读及CODr突变位点的理性取代 | 第27-31页 |
| ·定点突变和组合突变提高CODr热稳定性 | 第31-34页 |
| ·突变酶酶学性质研究 | 第34-36页 |
| ·突变酶的结构分析并诠释热稳定性提高的分子机理 | 第36-41页 |
| ·圆二色谱（CD）检测突变酶的二级结构变化 | 第36-37页 |
| ·N86 位点的突变酶结构解析 | 第37-38页 |
| ·其他正向突变酶相关位点的结构分析 | 第38-41页 |
| 主要结论及展望 | 第41-43页 |
| 致谢 | 第43-44页 |
| 参考文献 | 第44-49页 |
| 附录：作者在攻读硕士学位期间发表的论文 | 第49页 |