| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 第一章 绪论 | 第10-20页 |
| 1.1 啤酒酵母研究现状 | 第10-11页 |
| 1.1.1 啤酒酵母概述 | 第10页 |
| 1.1.2 啤酒酵母单倍体研究进展 | 第10-11页 |
| 1.2 自溶概述与研究进展 | 第11-15页 |
| 1.2.1 自溶概述 | 第11页 |
| 1.2.2 酵母自溶的影响 | 第11-12页 |
| 1.2.3 自溶评价的研究现状 | 第12-13页 |
| 1.2.4 自溶成因及机制的研究现状 | 第13-14页 |
| 1.2.5 酵母自溶性能改良的研究现状 | 第14-15页 |
| 1.3 啤酒酵母组学研究进展 | 第15-17页 |
| 1.3.1 啤酒酵母转录组学研究进展 | 第15-16页 |
| 1.3.2 啤酒酵母蛋白组学研究进展 | 第16-17页 |
| 1.4 本论文的立题依据及主要研究内容 | 第17-20页 |
| 1.4.1 立题依据与研究意义 | 第17-18页 |
| 1.4.2 主要研究内容 | 第18-20页 |
| 第二章 啤酒酵母自溶评价指标的探索与建立 | 第20-30页 |
| 2.1 前言 | 第20页 |
| 2.2 材料与方法 | 第20-22页 |
| 2.2.1 菌株和材料 | 第20页 |
| 2.2.2 试剂和仪器 | 第20-21页 |
| 2.2.3 培养基及溶液 | 第21页 |
| 2.2.4 模拟自溶及各指标的测定 | 第21-22页 |
| 2.3 结果与讨论 | 第22-28页 |
| 2.3.1 酵母扫描电镜结果 | 第22-23页 |
| 2.3.2 酵母细胞死亡率的测定 | 第23页 |
| 2.3.3 非α-氨基氮/ α-氨基氮与自溶时间的关系曲线的构建 | 第23-25页 |
| 2.3.4 酵母自溶对不同分子量蛋白质含量的影响 | 第25-26页 |
| 2.3.5 液液萃取-气相色谱法测定游离长链脂肪酸含量 | 第26页 |
| 2.3.6 紫外吸收法测定 A260与 A280 | 第26-28页 |
| 2.4 本章小结 | 第28-30页 |
| 第三章 酵母自溶过程的转录组学分析 | 第30-44页 |
| 3.1 前言 | 第30页 |
| 3.2 材料与方法 | 第30-32页 |
| 3.2.1 菌株和材料 | 第30页 |
| 3.2.2 试剂和仪器 | 第30-31页 |
| 3.2.3 培养基 | 第31页 |
| 3.2.4 酵母样品制备与 RNA 提取 | 第31页 |
| 3.2.5 基因芯片实验 | 第31页 |
| 3.2.6 实时定量 PCR(qRT-PCR) | 第31-32页 |
| 3.3 结果与讨论 | 第32-43页 |
| 3.3.1 自溶过程中基因转录情况概述 | 第32-33页 |
| 3.3.2 青 2 和 5-2 自溶过程中有相同调控类型的基因 | 第33-38页 |
| 3.3.3 青 2 和 5-2 自溶过程中有相反调控类型的基因 | 第38-40页 |
| 3.3.4 qRT-PCR 验证基因芯片结果 | 第40-43页 |
| 3.4 本章小结 | 第43-44页 |
| 第四章 酵母自溶过程的蛋白组学分析 | 第44-59页 |
| 4.1 前言 | 第44页 |
| 4.2 材料与方法 | 第44-46页 |
| 4.2.1 菌株和材料 | 第44页 |
| 4.2.2 试剂和仪器 | 第44-45页 |
| 4.2.3 培养基 | 第45页 |
| 4.2.4 酵母样品制备 | 第45页 |
| 4.2.5 蛋白样品制备 | 第45页 |
| 4.2.6 2DE 实验 | 第45页 |
| 4.2.7 目的蛋白的 MALDI-TOF/TOF 质谱鉴定 | 第45-46页 |
| 4.2.8 目的蛋白的调控类型 | 第46页 |
| 4.3 结果与讨论 | 第46-57页 |
| 4.3.1 2DE 体系的优化 | 第46-49页 |
| 4.3.2 自溶过程中啤酒酵母蛋白表达谱差异分析 | 第49-57页 |
| 4.4 本章小结 | 第57-59页 |
| 第五章 啤酒酵母单倍体菌株的选育 | 第59-71页 |
| 5.1 前言 | 第59页 |
| 5.2 材料与方法 | 第59-63页 |
| 5.2.1 菌株和质粒 | 第59页 |
| 5.2.2 试剂和仪器 | 第59-60页 |
| 5.2.3 培养基 | 第60页 |
| 5.2.4 子囊孢子染色试剂的配制 | 第60页 |
| 5.2.5 诱导产孢条件的确定 | 第60-61页 |
| 5.2.6 孢子富集与单倍体获得 | 第61-62页 |
| 5.2.7 单倍体菌株 HO 基因的敲除 | 第62-63页 |
| 5.2.8 单倍体菌株显微学形态 | 第63页 |
| 5.3 结果与讨论 | 第63-69页 |
| 5.3.1 诱导产孢条件的确定 | 第63-65页 |
| 5.3.2 单倍体菌株的分离和鉴定 | 第65-67页 |
| 5.3.3 单倍体菌株 HO 基因的敲除 | 第67-69页 |
| 5.3.4 单倍体菌株显微学形态 | 第69页 |
| 5.4 本章小结 | 第69-71页 |
| 第六章 RLM1 和 UBC4 基因敲除与过表达对酵母自溶性能的影响 | 第71-88页 |
| 6.1 前言 | 第71-72页 |
| 6.2 材料与方法 | 第72-76页 |
| 6.2.1 菌株和质粒 | 第72页 |
| 6.2.2 试剂和仪器 | 第72页 |
| 6.2.3 培养基 | 第72页 |
| 6.2.4 分子生物学操作 | 第72-75页 |
| 6.2.5 高拷贝数过表达菌株的筛选 | 第75页 |
| 6.2.6 过表达蛋白的 SDS-PAGE 分离和质谱验证 | 第75-76页 |
| 6.2.7 重组菌自溶性能测定 | 第76页 |
| 6.2.8 重组菌胁迫耐受性分析 | 第76页 |
| 6.3 结果与讨论 | 第76-86页 |
| 6.3.1 RLM1 基因的敲除 | 第76-77页 |
| 6.3.2 RLM1 基因的过表达 | 第77-79页 |
| 6.3.3 H-rlm1Δ，H/rlm1 与 H5 自溶性能的比较 | 第79-80页 |
| 6.3.4 H-rlm1Δ，H/rlm1 与 H5 胁迫耐受性分析 | 第80-81页 |
| 6.3.5 UBC4 基因的敲除 | 第81-82页 |
| 6.3.6 UBC4 基因的过表达 | 第82-84页 |
| 6.3.7 H-ubc4Δ，H/ubc4 与 H5 自溶性能的比较 | 第84-85页 |
| 6.3.8 H-ubc4Δ，H/ubc4 与 H5 胁迫耐受性分析 | 第85-86页 |
| 6.4 本章小结 | 第86-88页 |
| 主要结论与展望 | 第88-90页 |
| 主要结论 | 第88-89页 |
| 展望 | 第89-90页 |
| 创新点 | 第90-91页 |
| 致谢 | 第91-93页 |
| 参考文献 | 第93-101页 |
| 附录：作者在攻读博士学位期间发表的论文 | 第101-102页 |
| 附录：附表 | 第102-108页 |
