| 摘要 | 第7-9页 |
| Abstract | 第9-10页 |
| 缩略语表 | 第11-12页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-22页 |
| 1 EC及其危害 | 第12-13页 |
| 2 EC的形成机理 | 第13-16页 |
| 2.1 尿素与乙醇共反应生成EC | 第14-15页 |
| 2.2 以植物中氰苷水解物为前体合成EC | 第15页 |
| 2.3 食品添加剂引入的EC前体物 | 第15-16页 |
| 3 EC的检测方法 | 第16页 |
| 4 EC的控制 | 第16-17页 |
| 5 黄酒中的EC | 第17-18页 |
| 6 基因敲除技术在酵母工程菌构建中的应用 | 第18-20页 |
| 7 利用淀粉的酿酒酵母基因工程菌研究进展 | 第20-21页 |
| 8 本研究目的、内容与意义 | 第21-22页 |
| 第二章 酿酒酵母car1基因的敲除 | 第22-33页 |
| 1 材料与方法 | 第22-28页 |
| 1.1 材料 | 第22-24页 |
| 1.1.1 菌株和质粒 | 第22页 |
| 1.1.2 主要试剂及培养基 | 第22-23页 |
| 1.1.3 主要仪器 | 第23-24页 |
| 1.2 方法 | 第24-28页 |
| 1.2.1 敲除盒的构建 | 第24-25页 |
| 1.2.2 酿酒酵母精氨酸酶基因敲除 | 第25页 |
| 1.2.3 敲除子的筛选与鉴定 | 第25-26页 |
| 1.2.4 酿酒酵母基因组提取 | 第26-27页 |
| 1.2.5 酿酒酵母敲除子生长动力学及产精氨酸酶进程分析 | 第27-28页 |
| 2 结果与分析 | 第28-31页 |
| 2.1 car1敲除盒的构建 | 第28-29页 |
| 2.2 酿酒酵母AH109中car1基因的敲除 | 第29页 |
| 2.3 酿酒酵母敲除子PCR验证 | 第29-30页 |
| 2.4 敲除子SΔcar1生长曲线和产精氨酸酶进程分析 | 第30-31页 |
| 3 小结与讨论 | 第31-33页 |
| 3.1 小结 | 第31-32页 |
| 3.2 讨论 | 第32-33页 |
| 第三章 敲除子SΔcar1发酵黄酒特性研究 | 第33-42页 |
| 1 材料与方法 | 第33-35页 |
| 1.1 材料 | 第33页 |
| 1.1.1 菌株和质粒 | 第33页 |
| 1.1.2 主要试剂 | 第33页 |
| 1.1.3 主要仪器 | 第33页 |
| 1.2 方法 | 第33-35页 |
| 1.2.1 黄酒的制作 | 第33-34页 |
| 1.2.2 黄酒发酵过程理化指标分析 | 第34页 |
| 1.2.3 黄酒成品中氨基酸种类及含量分析 | 第34页 |
| 1.2.4 黄酒成品中EC含量测定 | 第34-35页 |
| 2 结果与分析 | 第35-40页 |
| 2.1 发酵过程中酒精度、总糖分析 | 第35-36页 |
| 2.2 发酵过程pH、酸度分析 | 第36-37页 |
| 2.3 成品黄酒中氨基酸种类及含量分析 | 第37-39页 |
| 2.4 成品中EC含量分析 | 第39-40页 |
| 3 小结与讨论 | 第40-42页 |
| 3.1 小结 | 第40-41页 |
| 3.2 讨论 | 第41-42页 |
| 第四章 高效淀粉酶表达盒的构建及酵母转化 | 第42-59页 |
| 1 材料与方法 | 第42-49页 |
| 1.1 材料 | 第42-44页 |
| 1.1.1 菌株和质粒 | 第42-43页 |
| 1.1.2 主要试剂 | 第43页 |
| 1.1.3 主要仪器 | 第43-44页 |
| 1.2 方法 | 第44-49页 |
| 1.2.1 引物设计 | 第44页 |
| 1.2.2 PCR体系及程序 | 第44页 |
| 1.2.3 质粒DNA的提取 | 第44-45页 |
| 1.2.4 大肠杆菌感受态的制备 | 第45页 |
| 1.2.5 转化大肠杆菌 | 第45页 |
| 1.2.6 pADH1/ALP1表达载体的构建 | 第45-46页 |
| 1.2.7 pADH2/ALP1表达载体的构建 | 第46页 |
| 1.2.8 表达载体转化酵母敲除子SΔcar1 | 第46页 |
| 1.2.9 转化子筛选、鉴定及对比分析 | 第46-49页 |
| 2 结果与分析 | 第49-57页 |
| 2.1 Saccharomycopsis fibuligera ALP1基因的克隆 | 第49页 |
| 2.2 pADH1/ALP1表达载体构建 | 第49-52页 |
| 2.2.1 MCS的克隆 | 第49-50页 |
| 2.2.2 pADH1表达载体构建 | 第50-51页 |
| 2.2.3 pADH1/ALP1表达载体构建 | 第51-52页 |
| 2.3 pADH2/ALP1表达载体构建 | 第52-53页 |
| 2.4 淀粉酶表达载体转化SΔcar1 | 第53-54页 |
| 2.5 转化子鉴定及对比分析 | 第54-57页 |
| 3 小结与讨论 | 第57-59页 |
| 3.1 小结 | 第57页 |
| 3.2 讨论 | 第57-59页 |
| 第五章 结论与展望 | 第59-61页 |
| 1 结论 | 第59-60页 |
| 2 展望 | 第60-61页 |
| 参考文献 | 第61-69页 |
| 致谢 | 第69页 |
