| 中文摘要 | 第3-4页 |
| ABSTRACT | 第4-5页 |
| 第一章 文献综述 | 第8-22页 |
| 1.1 前言 | 第8-10页 |
| 1.2 木质纤维素乙醇 | 第10-15页 |
| 1.2.1 木质纤维素 | 第10-11页 |
| 1.2.2 纤维素酶简介 | 第11-13页 |
| 1.2.3 CBP（consolidated bioprocessing）工艺及其进展 | 第13-15页 |
| 1.2.4 产醇微生物 | 第15页 |
| 1.3 酿酒酵母 | 第15-20页 |
| 1.3.1 酿酒酵母的基因组 | 第15-16页 |
| 1.3.2 酿酒酵母简介 | 第16页 |
| 1.3.3 质粒载体 | 第16-17页 |
| 1.3.4 酿酒酵母的染色体整合 | 第17-19页 |
| 1.3.5 基于δ-整合的表达纤维素酶的酿酒酵母工程菌株 | 第19-20页 |
| 1.4 本课题的研究目的、内容和技术路线 | 第20-22页 |
| 1.4.1 研究目的 | 第20页 |
| 1.4.2 研究内容 | 第20-21页 |
| 1.4.3 技术路线 | 第21-22页 |
| 第二章 实验材料与方法 | 第22-41页 |
| 2.1 实验材料 | 第22-29页 |
| 2.1.1 质粒与菌株 | 第22-23页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第23页 |
| 2.1.3 主要仪器设备 | 第23-24页 |
| 2.1.4 溶液的配制 | 第24-27页 |
| 2.1.5 培养基的配制 | 第27-28页 |
| 2.1.6 PCR 反应引物 | 第28-29页 |
| 2.2 实验方法 | 第29-41页 |
| 2.2.1 不同微生物的培养 | 第29-30页 |
| 2.2.2 大肠杆菌质粒的提取 | 第30-31页 |
| 2.2.3 大肠杆菌感受态细胞的转化 | 第31-32页 |
| 2.2.4 染色体 DNA 提取 | 第32-33页 |
| 2.2.5 酿酒酵母的转化 | 第33页 |
| 2.2.6 琼脂糖凝胶电泳 | 第33-34页 |
| 2.2.7 PCR 反应 | 第34-35页 |
| 2.2.8 DNA 片段纯化回收 | 第35-36页 |
| 2.2.9 DNA 连接反应 | 第36页 |
| 2.2.10 DNA 的限制酶消化 | 第36-37页 |
| 2.2.11 核酸的乙醇沉淀纯化 | 第37页 |
| 2.2.12 脱磷反应 | 第37-38页 |
| 2.2.13 DNA 片段末端平滑化 | 第38页 |
| 2.2.14 酶活测定 | 第38-39页 |
| 2.2.15 S. cerevisiae 工程菌株的生长、发酵评价 | 第39页 |
| 2.2.16 HPLC 测定发酵液中各组分 | 第39-41页 |
| 第三章 实验结果与讨论 | 第41-59页 |
| 3.1 棘孢曲霉 CBHI 基因克隆及基因表达盒的构建 | 第41-43页 |
| 3.1.1 棘孢曲霉 CBHI 基因克隆 | 第41-42页 |
| 3.1.2 棘孢曲霉 CBHI 基因表达盒的构建 | 第42-43页 |
| 3.2 瑞氏木霉 CBHI、CBHII 基因表达盒的构建 | 第43-45页 |
| 3.2.1 瑞氏木霉 CBHI 基因表达盒的构建 | 第43-44页 |
| 3.2.2 瑞氏木霉 CBHII 基因表达盒的构建 | 第44-45页 |
| 3.3 基因整合平台的构建及评价 | 第45-49页 |
| 3.3.1 δ-整合基本质粒的构建 | 第45页 |
| 3.3.2 δ-整合平台的构建 | 第45-46页 |
| 3.3.3 δ-整合平台的评价工作 | 第46-49页 |
| 3.4 外切酶基因整合载体的构建 | 第49-51页 |
| 3.4.1 棘孢曲霉 CBHI 基因整合载体的构建 | 第49-50页 |
| 3.4.2 瑞氏木霉 CBHI 和 CBHII 基因整合载体的构建 | 第50-51页 |
| 3.5 酿酒酵母工程菌株的构建及评价 | 第51-58页 |
| 3.5.1 第一轮整合与菌株评价 | 第51页 |
| 3.5.2 第二轮整合与菌株评价 | 第51-53页 |
| 3.5.3 第三轮整合与菌株评价 | 第53-58页 |
| 3.6 小结 | 第58-59页 |
| 第四章 结论与展望 | 第59-61页 |
| 4.1 结论 | 第59-60页 |
| 4.2 展望 | 第60-61页 |
| 参考文献 | 第61-65页 |
| 发表论文和参加科研情况说明 | 第65-66页 |
| 附录一 棘孢曲霉 CBHI 测序结果比对情况 | 第66-70页 |
| 附录二 棘孢曲霉 CBHI ORF 序列 | 第70-72页 |
| 附录三 文章所用到的质粒图谱 | 第72-82页 |
| 致谢 | 第82页 |
