| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5页 |
| 第一章 绪论 | 第8-18页 |
| 1.1 生物胺与食品安全 | 第8-13页 |
| 1.1.1 生物胺简介 | 第8-9页 |
| 1.1.2 生物胺的生理作用和毒性 | 第9-10页 |
| 1.1.3 生物胺的食品来源 | 第10-12页 |
| 1.1.4 生物胺的微生物来源 | 第12-13页 |
| 1.2 聚合酶链反应(PCR)技术在生物胺检测中的应用 | 第13-15页 |
| 1.3 高效液相色谱(HPLC)技术在生物胺检测中的应用 | 第15-16页 |
| 1.4 酪胺及酪氨酸脱羧酶的进展及展望 | 第16页 |
| 1.5 本课题研究的目的和意义 | 第16-17页 |
| 1.6 本课题研究的主要内容 | 第17-18页 |
| 第二章 屎肠球菌和粪肠球菌酪氨酸脱羧酶基因的测序分析 | 第18-26页 |
| 2.1 实验材料、试剂和仪器 | 第18页 |
| 2.1.1 实验材料 | 第18页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第18页 |
| 2.1.3 主要仪器设备 | 第18页 |
| 2.2 试验方法 | 第18-21页 |
| 2.2.1 两株产酪胺肠球菌的培养及细菌总DNA的提取 | 第18-19页 |
| 2.2.2 细菌16S rRNA V3可变区PCR扩增 | 第19-20页 |
| 2.2.3 屎肠球菌和粪肠球菌酪氨酸脱羧酶基因的PCR扩增 | 第20-21页 |
| 2.2.4 两个菌酪氨酸脱羧酶基因系统发育分析及生物信息学分析 | 第21页 |
| 2.3 结果与讨论 | 第21-23页 |
| 2.3.1 两株肠球菌16S rRNA测序结果 | 第21页 |
| 2.3.2 两株肠球菌酪氨酸脱羧酶基因(TDC)的扩增 | 第21-22页 |
| 2.3.3 两个酪氨酸脱羧酶氨基酸序列比对 | 第22-23页 |
| 2.4 小结 | 第23-26页 |
| 第三章 屎肠球菌和粪肠球菌酪氨酸脱羧酶的克隆表达、纯化及产物鉴定 | 第26-44页 |
| 3.1 实验材料、试剂和仪器 | 第26-27页 |
| 3.1.1 实验材料 | 第26页 |
| 3.1.2 主要试剂 | 第26页 |
| 3.1.3 主要仪器设备 | 第26-27页 |
| 3.2 试验方法 | 第27-32页 |
| 3.2.1 酪氨酸脱羧酶基因克隆载体和表达载体的构建 | 第27-29页 |
| 3.2.2 酪氨酸脱羧酶基因的诱导表达 | 第29-30页 |
| 3.2.3 表达蛋白的分离纯化 | 第30-31页 |
| 3.2.4 外源表达产物催化活性鉴定 | 第31-32页 |
| 3.3 结果与讨论 | 第32-42页 |
| 3.3.1 612TDC克隆载体的构建 | 第32-33页 |
| 3.3.2 612TDC克隆载体的双酶切验证 | 第33页 |
| 3.3.3 612TDC表达载体的构建 | 第33-34页 |
| 3.3.4 612TDC表达载体的双酶切验证 | 第34-35页 |
| 3.3.5 615TDC克隆载体的构建 | 第35-36页 |
| 3.3.6 615TDC克隆载体的双酶切验证 | 第36-37页 |
| 3.3.7 615TDC表达载体的构建 | 第37页 |
| 3.3.8 615TDC表达载体的双酶切验证 | 第37-38页 |
| 3.3.9 612TDC在大肠杆菌中的诱导表达 | 第38-39页 |
| 3.3.10 615TDC在大肠杆菌中的诱导表达 | 第39-40页 |
| 3.3.11 表达蛋白612TDC和615TDC的分离纯化 | 第40-41页 |
| 3.3.12 不同生物胺标准样品TLC检测结果 | 第41-42页 |
| 3.3.13 表达蛋白催化活性的TLC检测结果 | 第42页 |
| 3.4 小结 | 第42-44页 |
| 第四章 外源表达酪氨酸脱羧酶的酶学性质及动力学研究 | 第44-54页 |
| 4.1 实验材料、试剂和仪器 | 第44页 |
| 4.1.1 实验材料 | 第44页 |
| 4.1.2 主要试剂 | 第44页 |
| 4.1.3 主要仪器设备 | 第44页 |
| 4.2 试验方法 | 第44-46页 |
| 4.2.1 生物胺的HPLC测定方法 | 第44-45页 |
| 4.2.2 两株菌酪氨酸脱羧酶酶学性质研究 | 第45-46页 |
| 4.2.3 两株菌酪氨酸脱羧酶动力学研究 | 第46页 |
| 4.2.4 NaCl对酶活力的影响 | 第46页 |
| 4.3 结果与讨论 | 第46-53页 |
| 4.3.1 HPLC对生物胺标准样品的定性分析 | 第46-47页 |
| 4.3.2 生物胺标准样品的回归方程、相关系数及检测限 | 第47-48页 |
| 4.3.3 pH对外源表达酪氨酸脱羧酶活性的影响 | 第48-49页 |
| 4.3.4 温度对外源表达酪氨酸脱羧酶活性的影响 | 第49-50页 |
| 4.3.5 外源表达酪氨酸脱羧酶动力学常数的测定结果 | 第50-52页 |
| 4.3.6 NaCl浓度对外源表达酪氨酸脱羧酶活性的影响 | 第52-53页 |
| 4.4 小结 | 第53-54页 |
| 全文总结 | 第54-56页 |
| 附录1 | 第56-57页 |
| 附录2 | 第57-60页 |
| 参考文献 | 第60-72页 |
| 攻读硕士学位期间发表的论文 | 第72-74页 |
| 致谢 | 第74页 |
