| 摘要 | 第9-11页 |
| Abstract | 第11-13页 |
| 第一章 文献综述 | 第15-30页 |
| 1 红曲菌概述 | 第15-16页 |
| 2 G-蛋白信号调节子的研究 | 第16-23页 |
| 2.1 G-蛋白信号调节子的结构 | 第17-18页 |
| 2.2 G-蛋白信号调节子的调节机制 | 第18页 |
| 2.3 真菌中的G-蛋白信号调节子 | 第18-21页 |
| 2.3.1 FlbA | 第19页 |
| 2.3.2 RgsA | 第19-20页 |
| 2.3.3 RgsB、RgsC、RgsD和GprK | 第20-21页 |
| 2.4 真菌中FlbA同源蛋白质的功能研究 | 第21-23页 |
| 2.4.1 对菌丝发育的调控 | 第21页 |
| 2.4.2 对有性与无性繁殖的调控 | 第21-22页 |
| 2.4.3 对次生代谢产物的调控 | 第22页 |
| 2.4.4 对致病力和应激反应的调控 | 第22-23页 |
| 3 真菌的自溶 | 第23-28页 |
| 3.1 自溶过程中形态的变化 | 第23-24页 |
| 3.2 自溶过程中几种水解酶 | 第24-25页 |
| 3.2.1 蛋白酶 | 第24页 |
| 3.2.2 葡聚糖酶 | 第24-25页 |
| 3.2.3 几丁质酶 | 第25页 |
| 3.3 自溶与氧化应激 | 第25-28页 |
| 3.3.1 活性氧物质的形成 | 第26-27页 |
| 3.3.2 主要的抗氧化剂及其生理功能 | 第27-28页 |
| 3.4 自溶的分子生物学研究 | 第28页 |
| 4 本研究的目的与意义 | 第28-30页 |
| 第二章 ΔmrfA突变株的构建 | 第30-46页 |
| 1 材料与方法 | 第30-37页 |
| 1.1 材料 | 第30-32页 |
| 1.1.1 菌株与质粒 | 第30-31页 |
| 1.1.2 主要试剂 | 第31页 |
| 1.1.3 实验试剂的配制 | 第31-32页 |
| 1.1.4 培养基 | 第32页 |
| 1.1.5 主要仪器设备 | 第32页 |
| 1.2 方法 | 第32-37页 |
| 1.2.1 敲除载体的构建 | 第32-35页 |
| 1.2.2 敲除载体转化根癌农杆菌的活化与筛选 | 第35页 |
| 1.2.3 根癌农杆菌介导的红曲菌转化 | 第35-36页 |
| 1.2.4 ΔmrfA突变株的验证 | 第36-37页 |
| 2 结果与分析 | 第37-43页 |
| 2.1 敲除盒的构建 | 第37-38页 |
| 2.2 敲除载体的构建与鉴定 | 第38-39页 |
| 2.3 含敲除载体的根癌农杆菌EHA105的鉴定 | 第39-40页 |
| 2.4 红色红曲菌M-7 mrfA基因缺失突变株的PCR验证 | 第40-42页 |
| 2.5 红色红曲菌M-7 mrfA基因缺失突变株的Southern blot分析 | 第42-43页 |
| 3 小结与讨论 | 第43-46页 |
| 3.1 小结 | 第43-44页 |
| 3.2 讨论 | 第44-46页 |
| 3.2.1 基因敲除载体的构建 | 第44页 |
| 3.2.2 根癌农杆菌介导的红曲菌转化 | 第44-46页 |
| 第三章 ΔmrfA突变株形态发育及色素与桔霉素产生能力的分析 | 第46-59页 |
| 1 材料与方法 | 第46-49页 |
| 1.1 材料 | 第46-47页 |
| 1.1.1 菌株 | 第46-47页 |
| 1.1.2 主要试剂 | 第47页 |
| 1.1.3 培养基 | 第47页 |
| 1.1.4 主要仪器设备 | 第47页 |
| 1.2 方法 | 第47-49页 |
| 1.2.1 红色红曲菌mrfA对生长发育的影响 | 第47-49页 |
| 1.2.2 红色红曲菌mrfA对色素和橘霉素合成的影响 | 第49页 |
| 2 结果与分析 | 第49-56页 |
| 2.1 红色红曲菌mrfA对生长发育的影响 | 第49-54页 |
| 2.1.1 菌落形态观察 | 第49-51页 |
| 2.1.2 菌落显微形态观察 | 第51页 |
| 2.1.3 菌落生长速率的比较 | 第51-52页 |
| 2.1.4 孢子数目的比较 | 第52-53页 |
| 2.1.5 分生孢子萌发速率的比较 | 第53-54页 |
| 2.2 红色红曲菌mrfA对色素和橘霉素合成的影响 | 第54-56页 |
| 2.2.1 发酵液红曲色素的分析 | 第54-55页 |
| 2.2.2 发酵液橘霉素的分析 | 第55-56页 |
| 3 小结与讨论 | 第56-59页 |
| 3.1 小结 | 第56-57页 |
| 3.2 讨论 | 第57-59页 |
| 3.2.1 红色红曲菌mrfA对分生孢子的调控 | 第57页 |
| 3.2.2 红色红曲菌mrfA对橘霉素和色素合成的调控 | 第57-59页 |
| 第四章 ΔmrfA突变株在发酵过程中水解酶和抗氧化酶活性的变化 | 第59-72页 |
| 1 材料与方法 | 第59-63页 |
| 1.1 材料 | 第59-61页 |
| 1.1.1 菌株 | 第59-60页 |
| 1.1.2 主要试剂 | 第60页 |
| 1.1.3 实验试剂的配制 | 第60-61页 |
| 1.1.4 培养基 | 第61页 |
| 1.1.5 主要仪器设备 | 第61页 |
| 1.2 方法 | 第61-63页 |
| 1.2.1 红曲菌液态发酵生物量的测定 | 第61页 |
| 1.2.2 红曲菌液态发酵残糖量的测定 | 第61页 |
| 1.2.3 红曲菌液态发酵蛋白酶活力的测定 | 第61-62页 |
| 1.2.4 红曲菌液态发酵pH的测定 | 第62页 |
| 1.2.5 红曲菌液态发酵几丁质酶活力的测定 | 第62页 |
| 1.2.6 红曲菌液态发酵CAT酶活力的测定 | 第62-63页 |
| 1.2.7 红曲菌液态发酵SOD酶活力测定 | 第63页 |
| 1.2.8 红曲菌液态发酵菌体蛋白质含量的测定 | 第63页 |
| 2 结果与分析 | 第63-70页 |
| 2.1 红曲菌液态发酵生物量的测定 | 第63-64页 |
| 2.2 红曲菌液态发酵残糖量的测定 | 第64-65页 |
| 2.2.1 葡萄糖标准曲线 | 第64页 |
| 2.2.2 红曲菌液态发酵残糖的含量 | 第64-65页 |
| 2.3 红曲菌液态发酵蛋白酶活力的测定 | 第65-66页 |
| 2.3.1 酪氨酸标准曲线 | 第65页 |
| 2.3.2 红曲菌液态发酵蛋白酶活力 | 第65-66页 |
| 2.4 发酵液pH的测定 | 第66-67页 |
| 2.5 红曲菌液态发酵几丁质酶活力的测定 | 第67-68页 |
| 2.5.1 N-乙酰-D-氨基葡萄糖标准曲线 | 第67页 |
| 2.5.2 红曲菌液态发酵几丁质酶活力 | 第67-68页 |
| 2.6 红曲菌液态发酵CAT酶活力的测定 | 第68-69页 |
| 2.7 红曲菌液态发酵SOD酶活力的测定 | 第69-70页 |
| 3 小结与讨论 | 第70-72页 |
| 3.1 小结 | 第70页 |
| 3.2 讨论 | 第70-72页 |
| 3.2.1 MrfA缺失对于红曲菌自溶的影响 | 第70-72页 |
| 第五章 红曲菌mrfA对生长发育及代谢相关基因的转录调控 | 第72-86页 |
| 1 材料与方法 | 第73-79页 |
| 1.1 材料 | 第73页 |
| 1.1.1 菌株 | 第73页 |
| 1.1.2 主要试剂 | 第73页 |
| 1.1.3 培养基 | 第73页 |
| 1.1.4 主要仪器设备 | 第73页 |
| 1.2 方法 | 第73-79页 |
| 1.2.1 红色红曲菌RNA的提取 | 第73-74页 |
| 1.2.2 RNA质量的检测 | 第74页 |
| 1.2.3 红曲菌mrfA基因和mga1基因cDNA全长的克隆 | 第74-77页 |
| 1.2.4 cDNA片段的拼接及序列分析 | 第77页 |
| 1.2.5 mrfA基因与mga1基因间的调节作用 | 第77-78页 |
| 1.2.6 mrfA基因对ctnA、pksCT、pksP及Chs在转录水平的调控作用 | 第78页 |
| 1.2.7 数据处理 | 第78-79页 |
| 2 结果与分析 | 第79-83页 |
| 2.1 红曲菌总RNA的提取与纯度检测 | 第79页 |
| 2.2 mrfA基因和mga1基因的3’RACE和5’RACE扩增 | 第79-80页 |
| 2.3 mrfA基因和mga1基因cDNA全长的拼接及序列分析 | 第80-81页 |
| 2.4 mrfA基因与mga1基因间的调节作用 | 第81-82页 |
| 2.5 mrfA基因对ctnA、pksCT、pksP及Chs在转录水平的调控作用 | 第82-83页 |
| 3 小结与讨论 | 第83-86页 |
| 3.1 小结 | 第83页 |
| 3.2 讨论 | 第83-86页 |
| 3.2.1 MrfA与Ga亚基Mga1在转录水平的调控作用 | 第83-84页 |
| 3.2.2 MrfA对色素、橘霉素合成相关基因表达的调控 | 第84-86页 |
| 第六章 结论与展望 | 第86-88页 |
| 1 结论 | 第86-87页 |
| 2 展望 | 第87页 |
| 3 论文创新点 | 第87-88页 |
| 参考文献 | 第88-102页 |
| 致谢 | 第102页 |
