| 摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 缩略词 | 第10-11页 |
| 1 前言 | 第11-19页 |
| 1.1 文献综述 | 第11-18页 |
| 1.1.1 肉类掺假问题的国内外现状 | 第11页 |
| 1.1.2 肉种类鉴别方法研究进展 | 第11-17页 |
| 1.1.3 猪骨骼肌肌钙蛋白Ⅰ研究进展 | 第17-18页 |
| 1.2 研究目的与意义 | 第18-19页 |
| 2 材料与方法 | 第19-29页 |
| 2.1 实验材料 | 第19-21页 |
| 2.1.1 载体及菌株 | 第19-20页 |
| 2.1.2 酶及主要试剂 | 第20页 |
| 2.1.3 主要仪器及器材 | 第20页 |
| 2.1.4 实验动物及细胞 | 第20-21页 |
| 2.1.5 肉样 | 第21页 |
| 2.2 实验方法 | 第21-29页 |
| 2.2.1 猪骨骼肌TnⅠ-fast基因的克隆与表达 | 第21-23页 |
| 2.2.2 兔抗猪快骨骼肌肌钙蛋白Ⅰ多克隆抗体的制备 | 第23-24页 |
| 2.2.3 抗猪快骨骼肌肌钙蛋白Ⅰ单克隆抗体的制备 | 第24-26页 |
| 2.2.4 检测熟肉制品中猪肉的夹心ELISA的建立 | 第26-28页 |
| 2.2.5 熟肉制品的符合实验 | 第28-29页 |
| 3 结果与分析 | 第29-43页 |
| 3.1 猪骨骼肌TnⅠ-fast基因的克隆与表达 | 第29-32页 |
| 3.1.1 TnⅠ-fast基因克隆 | 第29-30页 |
| 3.1.2 重组TnⅠ-fast蛋白的诱导表达 | 第30-32页 |
| 3.1.3 表达产物的Western blot鉴定 | 第32页 |
| 3.2 兔抗猪快骨骼肌肌钙蛋白Ⅰ多克隆抗体的制备 | 第32-33页 |
| 3.2.1 免疫血清效价测定 | 第32页 |
| 3.2.2 兔抗TnⅠ-fast IgG的纯化 | 第32-33页 |
| 3.3 抗猪快骨骼肌肌钙蛋白Ⅰ单克隆抗体的制备 | 第33-39页 |
| 3.3.1 抗原最佳包被浓度的确定 | 第33-35页 |
| 3.3.2 免疫小鼠血清效价的测定 | 第35-36页 |
| 3.3.3 阳性克隆的筛选与杂交瘤细胞株的建立 | 第36-37页 |
| 3.3.4 杂交瘤细胞染色体分析 | 第37页 |
| 3.3.5 腹水的制备及抗体效价测定 | 第37-38页 |
| 3.3.6 单抗5D7的纯化 | 第38页 |
| 3.3.7 单抗5D7亲和力测定 | 第38-39页 |
| 3.3.8 单抗5D7的特异性鉴定 | 第39页 |
| 3.4 检测熟肉制品中猪肉的夹心ELISA的建立 | 第39-42页 |
| 3.4.1 MAb和PAb最佳工作浓度的确定 | 第39-40页 |
| 3.4.2 特异性实验 | 第40页 |
| 3.4.3 灵敏性实验 | 第40-41页 |
| 3.4.4 重复性实验 | 第41页 |
| 3.4.5 对市售熟肉制品的测定 | 第41-42页 |
| 3.5 熟肉制品的符合实验 | 第42-43页 |
| 3.5.1 基因组DNA的提取 | 第42页 |
| 3.5.2 基因组PCR | 第42页 |
| 3.5.3 酶切PCR产物 | 第42-43页 |
| 3.5.4 结果判定 | 第43页 |
| 3.5.5 符合率 | 第43页 |
| 4 讨论 | 第43-45页 |
| 4.1 目的蛋白的选择 | 第43-44页 |
| 4.2 原核表达载体的选择 | 第44页 |
| 4.3 抗体的制备 | 第44页 |
| 4.4 夹心ELISA方法的建立 | 第44页 |
| 4.5 对市售熟肉制品的检测 | 第44-45页 |
| 5 结论 | 第45-46页 |
| 参考文献 | 第46-51页 |
| 致谢 | 第51页 |
