| 摘要 | 第4-5页 |
| ABSTRACT | 第5-6页 |
| 1 前言 | 第10-21页 |
| 1.1 葡萄酒概述 | 第10-11页 |
| 1.2 葡萄酒中的氨基甲酸乙酯 | 第11-16页 |
| 1.2.1 氨基甲酸乙酯的理化性质 | 第11页 |
| 1.2.2 氨基甲酸乙酯的危害 | 第11-12页 |
| 1.2.3 氨基甲酸乙酯的检测 | 第12-14页 |
| 1.2.4 氨基甲酸乙酯的形成 | 第14-15页 |
| 1.2.5 氨基甲酸乙酯的控制 | 第15-16页 |
| 1.3 低产尿素葡萄酒酵母菌种的选育 | 第16-19页 |
| 1.3.1 尿素的代谢途径 | 第16-17页 |
| 1.3.2 低产尿素葡萄酒酵母菌种的选育 | 第17-19页 |
| 1.4 本论文的立题依据及研究内容 | 第19-21页 |
| 1.4.1 立题依据 | 第19-20页 |
| 1.4.2 研究内容 | 第20-21页 |
| 2 材料与方法 | 第21-45页 |
| 2.1 实验材料与仪器 | 第21-28页 |
| 2.1.1 菌株与质粒 | 第21-22页 |
| 2.1.2 主要仪器 | 第22页 |
| 2.1.3 主要试剂 | 第22-25页 |
| 2.1.4 主要培养基 | 第25页 |
| 2.1.5 主要溶液 | 第25-28页 |
| 2.2 实验方法 | 第28-40页 |
| 2.2.1 引物设计 | 第28-30页 |
| 2.2.2 目的片段的获取及纯化 | 第30-33页 |
| 2.2.3 重组质粒的构建 | 第33-36页 |
| 2.2.4 酵母转化 | 第36-37页 |
| 2.2.5 KanMX筛选标记的去除 | 第37页 |
| 2.2.6 实时荧光定量PCR | 第37-40页 |
| 2.2.7 生长曲线的测定 | 第40页 |
| 2.2.8 葡萄酒发酵工艺 | 第40页 |
| 2.3 分析方法 | 第40-45页 |
| 2.3.1 发酵速度的测定 | 第40页 |
| 2.3.2 酒精度测定 | 第40页 |
| 2.3.3 残余还原糖测定 | 第40-41页 |
| 2.3.4 总酸测定 | 第41-42页 |
| 2.3.5 pH测定 | 第42页 |
| 2.3.6 尿素测定 | 第42-43页 |
| 2.3.7 EC测定 | 第43页 |
| 2.3.8 氨基酸测定 | 第43-44页 |
| 2.3.9 挥发性酸、酯、醇测定 | 第44-45页 |
| 3 结果与讨论 | 第45-82页 |
| 3.1 CAR1基因敲除酿酒酵母菌株的构建 | 第45-59页 |
| 3.1.1 CAR1基因的第一个等位基因的敲除 | 第45-50页 |
| 3.1.2 CAR1基因的第二个等位基因的敲除 | 第50-55页 |
| 3.1.3 突变株与亲本菌株生长性能的比较 | 第55页 |
| 3.1.4 葡萄酒发酵 | 第55-58页 |
| 3.1.5 CAR1基因基因表达水平的测定 | 第58-59页 |
| 3.1.6 小结 | 第59页 |
| 3.2 DUR1,2、DUR3基因游离过表达对酿酒酵母菌尿素代谢的影响 | 第59-65页 |
| 3.2.1 Yep-PD_(1,2)K和Yep-PD_3K质粒的构建和验证 | 第59-61页 |
| 3.2.2 转化子WY-DUR1,2和WY-DUR3的筛选及验证 | 第61页 |
| 3.2.3 转化子与亲本菌株生长性能的比较 | 第61-62页 |
| 3.2.4 葡萄酒发酵 | 第62-65页 |
| 3.2.5 小结 | 第65页 |
| 3.3 敲除CAR1基因兼过表达DUR1,2基因酿酒酵母菌株的构建 | 第65-73页 |
| 3.3.1 重组质粒Yep-APD_(1,2)KB的构建 | 第65-67页 |
| 3.3.2 敲除CAR1兼过表达DUR1,2基因酿酒酵母突变株的获得 | 第67-68页 |
| 3.3.3 突变株与亲本菌株生长性能的比较 | 第68-69页 |
| 3.3.4 葡萄酒发酵 | 第69-72页 |
| 3.3.5 基因表达水平的测定 | 第72页 |
| 3.3.6 小结 | 第72-73页 |
| 3.4 敲除CAR1基因兼过表达DUR3基因酿酒酵母菌株的构建 | 第73-82页 |
| 3.4.1 重组质粒Yep-APD_3KB的构建 | 第73-75页 |
| 3.4.2 敲除CAR1兼过表达DUR3基因酿酒酵母突变株的获得 | 第75-76页 |
| 3.4.3 突变株与亲本菌株生长性能的比较 | 第76-77页 |
| 3.4.4 葡萄酒发酵 | 第77-80页 |
| 3.4.5 基因表达水平的测定 | 第80页 |
| 3.4.6 小结 | 第80-82页 |
| 4 结论 | 第82-84页 |
| 5 展望 | 第84-85页 |
| 6 参考文献 | 第85-92页 |
| 7 攻读硕士学位期间发表论文 | 第92-93页 |
| 8 致谢 | 第93页 |
