| 摘要 | 第4-5页 |
| abstract | 第5页 |
| 附录A 缩略词表 | 第9-10页 |
| 1 前言 | 第10-22页 |
| 1.1 L-色氨酸理化性质 | 第10页 |
| 1.2 L-色氨酸的应用及市场前景 | 第10-11页 |
| 1.2.1 L-色氨酸在孕妇体内起到的作用 | 第10-11页 |
| 1.2.2 L-色氨酸在家禽体内起到的作用 | 第11页 |
| 1.2.3 L-色氨酸代谢物在医药方面的应用 | 第11页 |
| 1.3 L-色氨酸生产现状及生产方法 | 第11-14页 |
| 1.3.1 蛋白质水解法 | 第12页 |
| 1.3.2 化学合成法 | 第12页 |
| 1.3.3 酶法合成 | 第12-13页 |
| 1.3.4 发酵法生产 | 第13-14页 |
| 1.4 L-色氨酸代谢调控机制 | 第14页 |
| 1.5 L-色氨酸合成的主要限制因素 | 第14-16页 |
| 1.5.1 关键酶反馈抑制 | 第14-15页 |
| 1.5.2 L-色氨酸转录阻遏机制 | 第15页 |
| 1.5.3 前体物水平 | 第15页 |
| 1.5.4 L-色氨酸弱化机制 | 第15页 |
| 1.5.5 L-色氨酸转运系统 | 第15-16页 |
| 1.6 提高大肠杆菌L-色氨酸产量主要策略 | 第16-19页 |
| 1.6.1 增加L-色氨酸合成的前体物 | 第16-17页 |
| 1.6.2 阻断L-色氨酸分解途径及消除限速步骤 | 第17页 |
| 1.6.3 提高L-色氨酸操纵子的表达及解除关键酶的反馈抑制 | 第17-18页 |
| 1.6.4 L-色氨酸转运系统的改造 | 第18页 |
| 1.6.5 优化L-色氨酸发酵条件 | 第18-19页 |
| 1.7 大肠杆菌耐酸系统 | 第19-21页 |
| 1.8 精氨酸脱亚胺酶系统 | 第21页 |
| 1.9 立题背景及实验内容 | 第21-22页 |
| 1.9.1 高产菌株构建策略 | 第21页 |
| 1.9.2 耐酸性菌株构建策略 | 第21-22页 |
| 2 材料与方法 | 第22-33页 |
| 2.1 实验材料 | 第22-23页 |
| 2.2 主要仪器和试剂 | 第23-26页 |
| 2.2.1 主要仪器 | 第23-24页 |
| 2.2.2 主要试剂 | 第24-25页 |
| 2.2.3 主要溶液 | 第25-26页 |
| 2.2.4 培养基 | 第26页 |
| 2.2.5 抗生素 | 第26页 |
| 2.3 实验方法 | 第26-33页 |
| 2.3.1 质粒提取 | 第26页 |
| 2.3.2 DNA纯化回收 | 第26页 |
| 2.3.3 大肠杆菌基因组的提取 | 第26-27页 |
| 2.3.4 大肠杆菌化学转化法感受态的制备及转化实验 | 第27页 |
| 2.3.5 大肠杆菌电转化感受态的制备及转化实验 | 第27-28页 |
| 2.3.6 PCR扩增 | 第28-29页 |
| 2.3.7 实时定量PCR | 第29-30页 |
| 2.3.8 琼脂糖凝胶电泳 | 第30页 |
| 2.3.9 Red同源重组技术基因敲除方法 | 第30-31页 |
| 2.3.10 液相色谱法测定发酵液中L-色氨酸含量 | 第31页 |
| 2.3.11 效液相色谱法测定发酵液中的有机酸含量 | 第31页 |
| 2.3.12 大肠杆菌发酵L-色氨酸的培养条件及分析测定方法 | 第31-33页 |
| 3 结果与讨论 | 第33-57页 |
| 3.1 大肠杆菌不同启动子的转醛酶基因加强L-色氨酸菌株构建 | 第33-41页 |
| 3.1.1 trc1启动子转醛酶基因加强L-色氨酸菌株构建 | 第33-36页 |
| 3.1.2 菌株TRTH02 tktA基因转录量的检测 | 第36-37页 |
| 3.1.3 大肠杆菌TRTH01的30L发酵罐实验 | 第37页 |
| 3.1.4 trc2启动子转醛酶基因加强的L-色氨酸菌株构建 | 第37-39页 |
| 3.1.5 菌株TRTH02 tktA基因转录量的检测 | 第39-40页 |
| 3.1.6 大肠杆菌TRTH02的30L发酵罐实验 | 第40-41页 |
| 3.2 转醛酶基因加强对TRTH L-色氨酸生产菌TRTH的影响 | 第41页 |
| 3.3 L-色氨酸操纵子关键酶表达增强对L-色氨酸发酵的影响 | 第41-44页 |
| 3.3.1 大肠杆菌TRTH03的构建 | 第41-43页 |
| 3.3.2 大肠杆菌TRTH03的30L发酵罐实验 | 第43-44页 |
| 3.4 增加NADPH供应的L-色氨酸菌株构建 | 第44-47页 |
| 3.4.1 TRTH04菌株构建 | 第44-46页 |
| 3.4.2 增加NADPH供应对L-色氨酸发酵的影响 | 第46-47页 |
| 3.5 表达精氨酸脱亚胺酶对菌株TRTH耐酸性的影响 | 第47-53页 |
| 3.5.1 TRTH05菌株构建 | 第47-49页 |
| 3.5.2 不同pH控制下的发酵实验 | 第49-53页 |
| 3.6 加强谷氨酸依赖型耐酸系统对TRTH耐酸性的影响 | 第53-55页 |
| 3.6.1 TRTH06菌株构建 | 第53-54页 |
| 3.6.2 pH为6.0时TRTH06的5L酵罐实验 | 第54-55页 |
| 3.7 耐酸菌株改造总结 | 第55-57页 |
| 4 结论 | 第57-58页 |
| 5 展望 | 第58-59页 |
| 6 参考文献 | 第59-66页 |
| 7 研究生期间所发表论文情况 | 第66-67页 |
| 8 致谢 | 第67页 |
