| 目录 | 第1-15页 |
| 摘要 | 第15-17页 |
| Abstract | 第17-19页 |
| 名词缩写表 | 第19-21页 |
| 第一章 文献综述 | 第21-52页 |
| 1 前言 | 第21页 |
| 2 啤酒酿造的原辅料及特性 | 第21-25页 |
| ·啤酒酿造的主要原料—大麦 | 第21-23页 |
| ·啤洒酿造的辅助原料 | 第23-24页 |
| ·大麦和麦芽中与啤酒酿造有关的酶类 | 第24-25页 |
| 3 啤酒酿造工艺 | 第25页 |
| ·原料粉碎 | 第25页 |
| ·糖化 | 第25页 |
| ·发酵 | 第25页 |
| ·后酵 | 第25页 |
| ·过滤 | 第25页 |
| 4 啤酒过滤技术 | 第25-27页 |
| ·硅藻土过滤法 | 第26页 |
| ·膜过滤技术 | 第26-27页 |
| ·错流微过滤技术 | 第27页 |
| 5 啤酒过滤问题产生的原因及解决措施 | 第27-32页 |
| ·啤酒过滤问题产生的原因 | 第27-30页 |
| ·解决啤酒过滤困难的措施 | 第30-32页 |
| 6 β-1,3-1,4-葡聚糖酶的研究进展 | 第32-38页 |
| ·β-1,3-1,4-葡聚糖酶的来源 | 第32-33页 |
| ·β-1,3-1,4-葡聚糖酶的酶学性质 | 第33-34页 |
| ·β-1,3-1,4-葡聚糖酶的克隆表达和热稳定性研究 | 第34-35页 |
| ·β-1,3-1,4-葡聚糖酶的检测方法 | 第35-37页 |
| ·β-1,3-1,4-葡聚糖酶的应用 | 第37-38页 |
| 7 β-1,4-木聚糖酶的研究进展 | 第38-45页 |
| ·β-1,4-木聚糖酶的来源 | 第39-40页 |
| ·β-1,4-木聚糖酶的酶学性质 | 第40页 |
| ·β-1,4-木聚糖酶的克隆表达 | 第40-42页 |
| ·β-1,4-木聚糖酶的检测方法 | 第42页 |
| ·β-1.4-木聚糖酶的应用 | 第42-45页 |
| 8 酿酒酵母展示表达系统 | 第45-50页 |
| ·酿酒酵母细胞表面展示表达系统的构成及原理 | 第45-46页 |
| ·常用酿酒酵母展示表达系统 | 第46-48页 |
| ·酿酒酵母细胞表面展示表达系统的应用 | 第48-50页 |
| ·酿洒酵母细胞表面展示表达系统的缺陷 | 第50页 |
| 9 选题背景和研究思路 | 第50-52页 |
| 第二章 分泌型表达β-1,3-1,4-葡聚糖酶和β-1,4-木聚糖酶重组酵母的构建 | 第52-83页 |
| 1 材料与仪器 | 第53-55页 |
| ·菌株和质粒 | 第53-54页 |
| ·引物 | 第54页 |
| ·主要试剂 | 第54页 |
| ·培养基 | 第54-55页 |
| ·主要仪器设备 | 第55页 |
| 2 实验方法 | 第55-64页 |
| ·密码子优化和基因合成 | 第55页 |
| ·PCR反应条件 | 第55-56页 |
| ·PCR产物纯化 | 第56-57页 |
| ·DNA片段的酶切与连接 | 第57页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳 | 第57-58页 |
| ·大肠杆菌质粒提取 | 第58-59页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第59页 |
| ·质粒转化大肠杆菌宿主 | 第59-60页 |
| ·基因测序 | 第60页 |
| ·酵母基因组DNA提取 | 第60页 |
| ·酿酒酵母的感受态制备和质粒的电击转化 | 第60-61页 |
| ·重组酵母的筛选及PCR检测 | 第61-62页 |
| ·酵母分泌表达载体的构建过程 | 第62-63页 |
| ·透明圈实验 | 第63页 |
| ·β-1,4-木聚糖酶活力的测定 | 第63页 |
| ·β-1,3-1,4-葡聚糖酶活力的测定 | 第63-64页 |
| 3 结果与分析 | 第64-79页 |
| ·β-1,4-木聚糖酶基因的优化和合成 | 第64-65页 |
| ·β-1,4-木聚糖酶基因的扩增 | 第65-66页 |
| ·β-1,3-1,4-葡聚糖酶基因的扩增 | 第66-67页 |
| ·PGK1启动子基因的扩增 | 第67-68页 |
| ·MFα1基因的扩增 | 第68-69页 |
| ·PGK1-MFα1基因的连接和扩增 | 第69-70页 |
| ·ADH1终止子基因的扩增 | 第70-71页 |
| ·KanMX的扩增 | 第71-72页 |
| ·PGK1-MFα1的克隆 | 第72页 |
| ·ADH1终止子基因的克隆 | 第72-73页 |
| ·KanMX的克隆 | 第73-74页 |
| ·β-1,4-木聚糖酶基因的克隆 | 第74-75页 |
| ·β-1,3-1,4-葡聚糖酶基因的克隆 | 第75-76页 |
| ·分泌表达β-1,4-木聚糖酶的酿酒酵母基因工程菌的构建 | 第76-77页 |
| ·分泌表达β-1,3-1,4-葡聚糖酶的酿酒酵母基因工程菌的构建 | 第77页 |
| ·共表达β-1,4-木聚糖酶和β-1,3-1,4-葡聚糖酶酿酒酵母基因工程菌的构建 | 第77-78页 |
| ·β-1,4-木聚糖酶和β-1,3-1,4-葡聚塘酶的分泌表达 | 第78-79页 |
| 4 讨论与小结 | 第79-83页 |
| ·讨论 | 第79-80页 |
| ·小结 | 第80-83页 |
| 第三章 组成型展示表达β-1,3-1,4-葡聚糖酶和β-1,4-木聚糖酶重组酵母的构建 | 第83-101页 |
| 1 材料与仪器 | 第84-85页 |
| ·菌株和质粒 | 第84页 |
| ·引物 | 第84页 |
| ·主要试剂 | 第84-85页 |
| ·培养基 | 第85页 |
| ·主要仪器设备 | 第85页 |
| 2 实验方法 | 第85-89页 |
| ·PCR反应条件 | 第85-86页 |
| ·PCR产物纯化 | 第86页 |
| ·DNA片段的酶切与连接 | 第86页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳 | 第86页 |
| ·大肠杆菌质粒提取 | 第86页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第86页 |
| ·质粒转化大肠杆菌宿主 | 第86页 |
| ·基因测序 | 第86页 |
| ·酵母基因组DNA提取 | 第86页 |
| ·酿酒酵母的感受态制备和质粒的电击转化 | 第86页 |
| ·重组酵母的筛选及PCR检测 | 第86-87页 |
| ·酵母展示表达载体的构建过程 | 第87页 |
| ·透明圈实验 | 第87页 |
| ·展示表达β-1,4-木聚糖酶活力的测定 | 第87-88页 |
| ·展示表达β-1,3-1,4-葡聚糖酶活力的测定 | 第88页 |
| ·酵母工程菌株细胞组分的制备 | 第88-89页 |
| 3 结果与分析 | 第89-97页 |
| ·β-1,4-木聚糖酶基因的扩增 | 第89页 |
| ·β-1,3-1,4-葡聚糖酶基因的扩增 | 第89-90页 |
| ·α-agglutinin基因的扩增 | 第90-91页 |
| ·β-1,4-木聚糖酶基因的克隆 | 第91-92页 |
| ·α-agglutinin基因的克隆 | 第92-93页 |
| ·β-1,3-1,4-葡聚糖酶基因的克隆 | 第93-94页 |
| ·展示表达β-1,4-木聚糖酶的酿酒酵母基因工程菌的构建 | 第94-95页 |
| ·展示表达β-1,3-1,4-葡聚糖酶的酿酒酵母基因工程菌的构建 | 第95页 |
| ·共展示表达β-1,4-木聚糖酶和β-1,3-1,4-葡聚糖酶的重组酿酒酵母的构建 | 第95-96页 |
| ·β-1,4-木聚糖酶和β-1,3-1,4-葡聚糖酶在细胞表面的展示表达 | 第96-97页 |
| 4 讨论与小结 | 第97-101页 |
| ·讨论 | 第97-98页 |
| ·小结 | 第98-101页 |
| 第四章 诱导型展示表达β-1,3-1,4-葡聚糖酶和β-1,4-木聚糖酶重组酵母的构建 | 第101-114页 |
| 1 材料与仪器 | 第101-103页 |
| ·菌株和质粒 | 第101-102页 |
| ·引物 | 第102页 |
| ·主要试剂 | 第102页 |
| ·培养基 | 第102-103页 |
| ·主要仪器设备 | 第103页 |
| 2 实验方法 | 第103-105页 |
| ·PCR反应条件 | 第103页 |
| ·PCR产物纯化 | 第103页 |
| ·DNA片段的酶切与连接 | 第103-104页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳 | 第104页 |
| ·大肠杆菌质粒提取 | 第104页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第104页 |
| ·质粒转化大肠杆菌宿主 | 第104页 |
| ·基因测序 | 第104页 |
| ·酵母基因组DNA提取 | 第104页 |
| ·酿酒酵母的感受态制备和质粒的电击转化 | 第104页 |
| ·重组酵母的筛选及PCR检测 | 第104页 |
| ·酵母展示表达载体的构建流 | 第104-105页 |
| ·酵母基因工程菌诱导产酶方法 | 第105页 |
| ·透明圈实验 | 第105页 |
| ·β-1,4-木聚糖酶活力的测定 | 第105页 |
| ·β-1,3-1,4-葡聚糖酶活力的测定 | 第105页 |
| ·酵母工程菌株细胞组分的制备 | 第105页 |
| 3 结果与分析 | 第105-111页 |
| ·GAL1启动子基因的扩增 | 第105-106页 |
| ·构建YEplac181-GMXAAK质粒 | 第106-107页 |
| ·构建YEplac181-GMGAAK质粒 | 第107页 |
| ·展示表达β-1,4-木聚糖酶酿酒酵母基因工程菌的构建 | 第107-108页 |
| ·展示表达β-1,3-1,4-葡聚糖酶酿酒酵母基因工程菌的构建 | 第108-109页 |
| ·共展示表达β-1,4-木聚糖酶和β-1,3-1,4-葡聚糖酶的重组酿酒酵母的构建 | 第109-110页 |
| ·重组酿酒酵母展示表达β-1,4-木聚糖酶和β-1,3-1,4-葡聚墉酶 | 第110-111页 |
| 4 讨论与小结 | 第111-114页 |
| ·讨论 | 第111-112页 |
| ·小结 | 第112-114页 |
| 第五章 重组β-1,4-木聚糖酶和β-1,3-1,4-葡聚糖酶的性质 | 第114-125页 |
| 1 材料与仪器 | 第114-115页 |
| ·菌株 | 第114页 |
| ·主要试剂 | 第114-115页 |
| ·培养基 | 第115页 |
| ·仪器设备 | 第115页 |
| 2 实验方法 | 第115-117页 |
| ·β-1,4-木聚糖酶活力的测定 | 第115页 |
| ·β-1,3-1,4-葡聚糖酶活力的测定 | 第115页 |
| ·标准曲线制作 | 第115-116页 |
| ·木聚糖酶和β-1,3-1,4-葡聚糖酶的表达 | 第116页 |
| ·酵母细胞的收集 | 第116页 |
| ·β-1,3-1,4-葡聚糖酶酶学性质研究 | 第116-117页 |
| ·β-1,4-木聚糖酶酶学性质研究 | 第117页 |
| 3 结果与分析 | 第117-123页 |
| ·重组内切β-1,3-1,4-葡聚糖酶的底物专一性 | 第117-118页 |
| ·重组内切β-1,4-木聚糖酶的底物专一性 | 第118页 |
| ·β-1,4-木聚糖酶的最适反应温度 | 第118-119页 |
| ·β-1,4-木聚糖酶的热稳定性 | 第119页 |
| ·β-1,4-木聚糖酶的最适反应pH | 第119-120页 |
| ·β-1,4-木聚糖酶的pH稳定性 | 第120-121页 |
| ·β-1,3-1,4-葡聚糖酶的最适反应温度 | 第121页 |
| ·β-1,3-1,4-葡聚糖酶的热稳定性 | 第121-122页 |
| ·β-1,3-1,4-葡聚糖酶的最适反应pH | 第122页 |
| ·β-1,3-1,4-葡聚糖酶的pH稳定性 | 第122-123页 |
| 4 讨论与小结 | 第123-125页 |
| ·讨论 | 第123-124页 |
| ·小结 | 第124-125页 |
| 第六章 重组菌株的发酵性能 | 第125-137页 |
| 1 材料与仪器 | 第125-126页 |
| ·主要试剂 | 第125页 |
| ·培养基 | 第125-126页 |
| ·菌株 | 第126页 |
| ·主要仪器与设备 | 第126页 |
| 2 实验方法 | 第126-130页 |
| ·生长曲线 | 第126-127页 |
| ·发酵力试验 | 第127页 |
| ·凝聚性试验 | 第127页 |
| ·热死火温度试验 | 第127-128页 |
| ·木聚糖含量与麦芽汁粘度的关系 | 第128页 |
| ·葡聚糖含量与麦芽汁粘度的关系 | 第128-129页 |
| ·酿酒酵母基因工程菌主发酵过程中分解木聚糖和葡聚糖的研究 | 第129-130页 |
| 3 结果与分析 | 第130-135页 |
| ·生长曲线 | 第130页 |
| ·发酵性能 | 第130-131页 |
| ·凝聚性 | 第131页 |
| ·热死灭温度 | 第131页 |
| ·麦芽汁粘度与β-葡聚糖含量的关系 | 第131-132页 |
| ·麦芽汁粘度与与木聚糖含量的关系 | 第132-133页 |
| ·木聚糖在啤酒主发酵过程中的降解 | 第133-134页 |
| ·葡聚糖在啤酒主发酵过程中的降解 | 第134-135页 |
| 4 讨论与小结 | 第135-137页 |
| ·讨论 | 第135-136页 |
| ·小结 | 第136-137页 |
| 第七章 基因工程菌株酿酒试验 | 第137-141页 |
| 1 材料与仪器 | 第137页 |
| ·酵母菌株及原料 | 第137页 |
| ·主要仪器 | 第137页 |
| 2 实验方法 | 第137-139页 |
| ·麦汁培养基的制备 | 第137页 |
| ·啤酒酿造试验方法 | 第137-138页 |
| ·理化指标和性能分析 | 第138-139页 |
| 3 结果与分析 | 第139-140页 |
| ·啤酒理化指标的测定结果 | 第139页 |
| ·酵母菌性能测试 | 第139-140页 |
| 4 讨论与小结 | 第140-141页 |
| 第8章 结论与展望 | 第141-143页 |
| 1 结论 | 第141-142页 |
| ·具有降解木聚糖和葡聚糖的酿酒酵母基因工程菌的构建 | 第141页 |
| ·重组酶的酶学性质 | 第141页 |
| ·酿酒酵母基因工程菌的性能 | 第141-142页 |
| 2 展望 | 第142-143页 |
| 参考文献 | 第143-156页 |
| 致谢 | 第156-157页 |
| 作者简历 | 第157页 |
