| 摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4页 |
| 1 绪论 | 第7-14页 |
| 1.1 稀有糖 | 第7页 |
| 1.2 关于D-阿洛糖的介绍 | 第7-9页 |
| 1.2.1 D-阿洛糖的化学结构和生理功能 | 第7-8页 |
| 1.2.2 制备D-阿洛糖的常用方法 | 第8-9页 |
| 1.3 L-RI | 第9-12页 |
| 1.3.1 L-RI的简单介绍 | 第9页 |
| 1.3.2 L-RI的研究背景 | 第9-11页 |
| 1.3.3 简述L-RI蛋白结构 | 第11页 |
| 1.3.4 关于L-RI催化机理的研究 | 第11-12页 |
| 1.4 本论文立体背景及意义 | 第12-13页 |
| 1.5 本论文研究的主要内容 | 第13-14页 |
| 2 材料与方法 | 第14-23页 |
| 2.1 实验材料与仪器 | 第14页 |
| 2.1.1 菌株与质粒 | 第14页 |
| 2.1.2 实验主要试剂 | 第14页 |
| 2.1.3 实验主要仪器 | 第14页 |
| 2.2 培养基与试剂的配制 | 第14-16页 |
| 2.2.1 培养基的配制 | 第14-15页 |
| 2.2.2 相关试剂的配制 | 第15-16页 |
| 2.3 实验方法 | 第16-23页 |
| 2.3.1 克隆目的基因 | 第16页 |
| 2.3.2 制备E. coli感受态细胞 | 第16页 |
| 2.3.3 构建基因重组菌 | 第16-17页 |
| 2.3.4 抽提备份质粒 | 第17页 |
| 2.3.5 所提质粒的琼脂糖凝胶电泳检测 | 第17页 |
| 2.3.6 保藏基因重组菌 | 第17页 |
| 2.3.7 诱导表达基因重组菌 | 第17页 |
| 2.3.8 分离纯化基因重组菌 | 第17-18页 |
| 2.3.9 确定重组蛋白亚基分子质量和表观相对分子质量 | 第18页 |
| 2.3.10 重组酶蛋白含量的测定 | 第18-19页 |
| 2.3.11 重组酶的酶活力测定 | 第19页 |
| 2.3.12 研究重组酶的酶学性质 | 第19-21页 |
| 2.3.13 重组质粒Desp-DPE的克隆及表达 | 第21-22页 |
| 2.3.14 重组L-RI和Desp-DPE的双酶偶联反应 | 第22页 |
| 2.3.15 同源建模 | 第22-23页 |
| 3 结果与讨论 | 第23-49页 |
| 3.1 对比分析重组L-RI基因序列及氨基酸序列 | 第23-26页 |
| 3.2 分离纯化重组L-RI | 第26-28页 |
| 3.3 两种方法测定重组L-RI的酶活力 | 第28-29页 |
| 3.3.1 比色法测定 | 第28页 |
| 3.3.2 高效液相法测定 | 第28-29页 |
| 3.4 研究重组L-RI的酶学性质 | 第29-36页 |
| 3.4.1 最适催化温度的研究 | 第29-30页 |
| 3.4.2 最适催化pH的研究 | 第30-31页 |
| 3.4.3 金属离子对L-RI酶活力的影响 | 第31-32页 |
| 3.4.4 最适Mn~(2+)浓度的研究 | 第32页 |
| 3.4.5 L-RI pH稳定性的研究 | 第32-33页 |
| 3.4.6 L-RI温度稳定性的研究 | 第33-34页 |
| 3.4.7 测定L-RI的反应动力学参数 | 第34-35页 |
| 3.4.8 生物合成D-阿洛糖的反应进程 | 第35-36页 |
| 3.5 应用L-RI和DPE偶联制备混合糖液 | 第36-41页 |
| 3.5.1 DPE和L-RI的准备 | 第36-38页 |
| 3.5.2 确定加酶最佳比例 | 第38-39页 |
| 3.5.3 确定双酶偶联最佳反应温度 | 第39页 |
| 3.5.4 确定双酶偶联最佳反应pH | 第39-40页 |
| 3.5.5 双酶偶联转化D-果糖的反应进程 | 第40-41页 |
| 3.6 L-RI的计算机模拟及分子对接 | 第41-49页 |
| 3.6.1 L-RI的结构模拟 | 第41-46页 |
| 3.6.2 L-RI的分子对接 | 第46-49页 |
| 主要结论与展望 | 第49-51页 |
| 致谢 | 第51-53页 |
| 参考文献 | 第53-58页 |
| 附录一: 作者在攻读硕士学位期间发表的论文 | 第58-59页 |
| 附录二 | 第59-60页 |
