| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 缩略词 | 第7-10页 |
| 1 绪论 | 第10-17页 |
| 1.1 淀粉分支酶概述 | 第10-13页 |
| 1.1.1 淀粉分支酶的功能 | 第10-11页 |
| 1.1.2 淀粉分支酶的结构 | 第11-12页 |
| 1.1.3 淀粉分支酶的转糖基反应机理 | 第12-13页 |
| 1.2 淀粉分支酶发酵生产的研究进展 | 第13-15页 |
| 1.2.1 大肠杆菌分泌表达系统 | 第13-14页 |
| 1.2.2 在大肠杆菌中的发酵生产 | 第14-15页 |
| 1.3 淀粉分支酶活性中心的研究现状 | 第15-16页 |
| 1.4 立题依据及意义 | 第16页 |
| 1.5 本课题主要研究内容 | 第16-17页 |
| 2 材料与方法 | 第17-23页 |
| 2.1 实验材料与设备 | 第17页 |
| 2.1.1 菌株与质粒 | 第17页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第17页 |
| 2.1.3 主要仪器 | 第17页 |
| 2.2 实验方法 | 第17-23页 |
| 2.2.1 DNA操作 | 第17-18页 |
| 2.2.2 表达载体pET-22b(+)/gbe、pET-24a(+)/gbe的构建与转化 | 第18页 |
| 2.2.3 表达载体pET-20b(+)/gbe-pe1B的构建与转化 | 第18页 |
| 2.2.4 突变体的构建与转化 | 第18-20页 |
| 2.2.5 淀粉分支酶的生产 | 第20页 |
| 2.2.6 淀粉分支酶的分泌表达在不同发酵条件下的验证 | 第20-21页 |
| 2.2.7 淀粉分支酶的定位 | 第21页 |
| 2.2.8 淀粉分支酶的纯化 | 第21页 |
| 2.2.9 SDS-PAGE蛋白凝胶电泳 | 第21页 |
| 2.2.10 淀粉分支酶蛋白浓度的测定 | 第21页 |
| 2.2.11 淀粉分支酶酶活的测定 | 第21-22页 |
| 2.2.12 细胞内外膜透性的测定 | 第22页 |
| 2.2.13 细胞形态结构的测定 | 第22页 |
| 2.2.14 蛋白质N-端氨基酸序列的测序 | 第22页 |
| 2.2.15 链长分布的测定 | 第22页 |
| 2.2.16 α-1,6-糖苷键比例的测定 | 第22页 |
| 2.2.17 环状产物的测定 | 第22页 |
| 2.2.18 淀粉分支酶的晶体结构模拟 | 第22页 |
| 2.2.19 数据处理 | 第22-23页 |
| 3 结果与讨论 | 第23-55页 |
| 3.1 不同发酵条件对淀粉分支酶分泌表达的影响 | 第23-26页 |
| 3.1.1 不同发酵培养基对淀粉分支酶分泌表达的影响 | 第23页 |
| 3.1.2 不同发酵温度对淀粉分支酶分泌表达的影响 | 第23-24页 |
| 3.1.3 不同发酵时间对淀粉分支酶分泌表达的影响 | 第24-25页 |
| 3.1.4 不同发酵初始pH对淀粉分支酶分泌表达的影响 | 第25-26页 |
| 3.1.5 不同IPTG浓度对淀粉分支酶分泌表达的影响 | 第26页 |
| 3.2 淀粉分支酶分泌表达的机理探究 | 第26-37页 |
| 3.2.1 菌体生长过程对淀粉分支酶分泌表达的影响 | 第26-32页 |
| 3.2.2 信号肽对淀粉分支酶分泌表达的影响 | 第32-35页 |
| 3.2.3 载体对淀粉分支酶分泌表达的影响 | 第35-36页 |
| 3.2.4 酶活对淀粉分支酶分泌表达的影响 | 第36页 |
| 3.2.5 N-端氨基酸对淀粉分支酶分泌表达的影响 | 第36-37页 |
| 3.3 淀粉分支酶与淀粉作用机理分析 | 第37-41页 |
| 3.3.1 淀粉分支酶的底物特异性分析 | 第37-38页 |
| 3.3.2 淀粉分支酶的酶活分析 | 第38-39页 |
| 3.3.3 淀粉分支酶的转苷模式分析 | 第39-40页 |
| 3.3.4 淀粉分支酶的环化反应分析 | 第40-41页 |
| 3.4 淀粉分支酶活性中心的研究 | 第41-48页 |
| 3.4.1 310 位氨基酸的序列分析 | 第41-43页 |
| 3.4.2 310 位点对酶活的影响 | 第43-46页 |
| 3.4.3 310 位点对转苷模式的影响 | 第46-47页 |
| 3.4.4 310 位点对底物特异性的影响 | 第47-48页 |
| 3.5 定点突变提高淀粉分支酶比酶活 | 第48-55页 |
| 3.5.1 349 位氨基酸的序列比对及结构分析 | 第48-51页 |
| 3.5.2 定点突变对比酶活的影响 | 第51页 |
| 3.5.3 定点突变对增加 α-1,6-糖苷键含量能力的影响 | 第51-52页 |
| 3.5.4 定点突变对比酶活影响的机理分析 | 第52-55页 |
| 主要结论与展望 | 第55-57页 |
| 致谢 | 第57-58页 |
| 参考文献 | 第58-64页 |
| 附录：作者在攻读硕士学位期间发表的论文 | 第64页 |
