| 摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-8页 |
| 第一章 绪论 | 第8-16页 |
| ·概述 | 第8-11页 |
| ·医药糖蛋白 | 第8页 |
| ·哺乳动物糖蛋白表达系统 | 第8-9页 |
| ·真核生物的N-糖基化修饰途径 | 第9-11页 |
| ·酵母糖蛋白表达系统 | 第11-13页 |
| ·酵母作为糖蛋白表达系统的优势 | 第11-12页 |
| ·国内外相关研究进展 | 第12-13页 |
| ·酵母糖蛋白表达系统存在的问题 | 第13-14页 |
| ·细胞生长能力和抗胁迫能力降低 | 第13-14页 |
| ·N-聚糖位点占有率降低 | 第14页 |
| ·本论文的立题依据及意义 | 第14-15页 |
| ·本论文的主要研究内容 | 第15-16页 |
| 第二章 材料与方法 | 第16-38页 |
| ·实验材料和设备 | 第16-23页 |
| ·菌株 | 第16-17页 |
| ·质粒 | 第17页 |
| ·引物 | 第17-20页 |
| ·培养基 | 第20页 |
| ·主要试剂 | 第20-21页 |
| ·主要仪器 | 第21-22页 |
| ·溶液的配制 | 第22-23页 |
| ·实验方法 | 第23-38页 |
| ·基因的敲除 | 第23-26页 |
| ·无URA3 标签菌株的构建 | 第26-27页 |
| ·质粒的构建方法 | 第27-30页 |
| ·相关质粒的构建 | 第30-31页 |
| ·适应性进化菌株的筛选 | 第31页 |
| ·生长曲线的测定 | 第31页 |
| ·敏感性及抗性实验分析 | 第31页 |
| ·细胞壁上的 β-1,3-葡聚糖含量的测定 | 第31-32页 |
| ·酿酒酵母细胞形态的观察 | 第32页 |
| ·酿酒酵母细胞壁的透射电子显微镜观察 | 第32页 |
| ·实时荧光定量PCR分析 | 第32页 |
| ·胞内全蛋白的取得 | 第32-33页 |
| ·胞外分泌蛋白的取得 | 第33页 |
| ·蛋白浓度的测定 (BCA法) | 第33页 |
| ·糖蛋白N-糖链的酶切处理 (PNGase F酶切处理) | 第33-34页 |
| ·蛋白质的考马斯亮蓝染色分析 | 第34页 |
| ·酿酒酵母液泡羧肽酶Y (CPY) 的蛋白免疫印迹分析 | 第34-35页 |
| ·酿酒酵母中人类溶菌酶的表达分析 | 第35页 |
| ·高效液相色谱分析N-糖链 | 第35-38页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第38-57页 |
| ·Δalg3Δoch1 菌株中过量表达RHO1 提高菌株的生理性能 | 第38-49页 |
| ·生长曲线的测定 | 第38-39页 |
| ·细胞形态的观察 | 第39-41页 |
| ·细胞壁形态的研究 | 第41页 |
| ·Δalg3Δoch1 菌株中FKS2 的过量表达 | 第41-42页 |
| ·不同菌株细胞壁 β-1,3-葡聚糖含量的测定 | 第42-43页 |
| ·温度敏感性研究 | 第43-44页 |
| ·高渗透压对菌株生长的影响 | 第44页 |
| ·潮霉素B抗性研究 | 第44-45页 |
| ·N-聚糖位点占有率的研究 | 第45-47页 |
| ·液泡羧肽酶Y | 第45页 |
| ·人类溶菌酶 | 第45-47页 |
| ·高效液相色谱分析不同菌株中的N-糖链 | 第47-48页 |
| ·Δalg3Δoch1 菌株的蛋白分泌效果研究 | 第48-49页 |
| ·小结 | 第49页 |
| ·适应性进化提高 Δalg3Δoch1Δmnn1 菌株的生理性能 | 第49-57页 |
| ·Δalg3Δoch1Δmnn1 菌株的适应性进化 | 第50页 |
| ·适应性进化前后 Δalg3Δoch1Δmnn1 菌株糖基化相关基因表达量的分析43 3.2.3 Δalg3Δoch1Δmnn1 菌株中ALG6 和WBP1 的过量表达 | 第50-56页 |
| ·生长曲线的测定 | 第52页 |
| ·温度敏感性研究 | 第52-53页 |
| ·高渗透压对菌株生长的影响 | 第53页 |
| ·潮霉素B抗性研究 | 第53-54页 |
| ·N-聚糖位点占有率的研究 | 第54-55页 |
| ·外源蛋白人类溶菌酶的分泌效果研究 | 第55-56页 |
| ·小结 | 第56-57页 |
| 主要结论与展望 | 第57-59页 |
| 主要结论 | 第57页 |
| 展望 | 第57-59页 |
| 致谢 | 第59-60页 |
| 参考文献 | 第60-65页 |
| 附录：作者在攻读硕士期间发表的论文 | 第65页 |
