| 摘要 | 第5-6页 |
| Abstract | 第6页 |
| 第1章 文献综述 | 第9-18页 |
| 1.1 β-胡萝卜素简介 | 第9页 |
| 1.2 β-胡萝卜素的生理功能 | 第9-10页 |
| 1.2.1 维生素A的前体 | 第9页 |
| 1.2.2 抗氧化功效 | 第9页 |
| 1.2.3 促进细胞通讯 | 第9-10页 |
| 1.3 β-胡萝卜素的来源 | 第10-11页 |
| 1.3.1 化学合成 | 第10页 |
| 1.3.2 天然植物提取 | 第10页 |
| 1.3.3 生物发酵 | 第10-11页 |
| 1.4 β-胡萝卜素的应用 | 第11页 |
| 1.4.1 临床、医药应用 | 第11页 |
| 1.4.2 添加剂 | 第11页 |
| 1.4.3 保健品应用 | 第11页 |
| 1.5 β-胡萝卜素的生物合成 | 第11-12页 |
| 1.6 β-胡萝卜素合成的基因工程研究 | 第12-14页 |
| 1.7 β-胡萝卜素的代谢工程研究 | 第14-16页 |
| 1.8 DNA assembley技术 | 第16-17页 |
| 1.9 立项依据 | 第17-18页 |
| 第2章 β-胡萝卜素产生菌的构建 | 第18-38页 |
| 2.1 实验材料 | 第18-22页 |
| 2.1.1 菌株与质粒 | 第18页 |
| 2.1.2 主要仪器 | 第18-19页 |
| 2.1.3 主要试剂 | 第19-21页 |
| 2.1.4 主要溶液及培养基 | 第21-22页 |
| 2.2 实验方法 | 第22-28页 |
| 2.2.1 酵母基因组提取方法 | 第22页 |
| 2.2.2 酵母菌总RNA抽提 | 第22页 |
| 2.2.3 反转录PCR | 第22-23页 |
| 2.2.4 高保真PCR扩增 | 第23-24页 |
| 2.2.5 质粒提取方法 | 第24页 |
| 2.2.6 E.coli DH5α感受态制备方法 | 第24页 |
| 2.2.7 E.coli DH5α转化方法 | 第24-25页 |
| 2.2.8 凝胶回收方法 | 第25页 |
| 2.2.9 β-胡萝卜素的提取方法 | 第25页 |
| 2.2.10 β-胡萝卜素的检测方法 | 第25-26页 |
| 2.2.11 发酵产量的计算 | 第26页 |
| 2.2.12 DNA片段浓缩方法 | 第26-27页 |
| 2.2.13 酵母转化方法 | 第27页 |
| 2.2.14 发酵培养方法 | 第27页 |
| 2.2.15 T4连接酶体系 | 第27页 |
| 2.2.16 引物设计 | 第27页 |
| 2.2.17 限制性内切酶酶切 | 第27-28页 |
| 2.3 结果 | 第28-36页 |
| 2.3.1 红发夫酵母总RNA的提取 | 第28页 |
| 2.3.2 反转录获得cDNA和目的基因的PCR | 第28-29页 |
| 2.3.3 目的基因克隆到pYES2载体 | 第29-31页 |
| 2.3.4 工程菌构建所需DNA片段的扩增 | 第31-32页 |
| 2.3.5 BY4742转化 | 第32页 |
| 2.3.6 菌落的PCR验证 | 第32-33页 |
| 2.3.7 工程菌发酵产物验证 | 第33-36页 |
| 2.4 讨论 | 第36-38页 |
| 第3章 HCCB08531菌的代谢通路研究 | 第38-68页 |
| 3.1 实验材料 | 第38-39页 |
| 3.1.1 菌株及质粒 | 第38页 |
| 3.1.2 主要仪器 | 第38页 |
| 3.1.3 主要试剂 | 第38页 |
| 3.1.4 主要溶液及培养基 | 第38-39页 |
| 3.2 实验方法 | 第39-40页 |
| 3.2.1 Gibson连接方法 | 第39-40页 |
| 3.2.2 Klenow fragment平滑处理DNA末端 | 第40页 |
| 3.3 结果 | 第40-68页 |
| 3.3.1 BTS1和tHMG1基因的过表达 | 第40-47页 |
| 3.3.2 HCCB08531菌ERG9基因的弱化 | 第47-50页 |
| 3.3.3 FPP途径的增强 | 第50-54页 |
| 3.3.4 重要基因的过表达 | 第54-61页 |
| 3.3.5 工程菌发酵验证 | 第61-66页 |
| 3.3.6 讨论 | 第66-68页 |
| 第4章 总结和展望 | 第68-69页 |
| 参考文献 | 第69-74页 |
| 攻读学位期间发表的论文(专利) | 第74-75页 |
| 致谢 | 第75-76页 |
| 附录1 | 第76-79页 |