| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-7页 |
| 第一章 绪论 | 第12-26页 |
| 1.1 氨基甲酸乙酯简介 | 第12-14页 |
| 1.1.1 氨基甲酸乙酯的致癌性及致癌机理 | 第12-13页 |
| 1.1.2 氨基甲酸乙酯在酒精饮品中的限量标准 | 第13页 |
| 1.1.3 黄酒中的氨基甲酸乙酯的食品安全问题 | 第13-14页 |
| 1.2 氨基甲酸乙酯的形成机理 | 第14-16页 |
| 1.2.1 酒精饮品中氨基甲酸乙酯的生成途径 | 第15-16页 |
| 1.2.2 黄酒中形成氨基甲酸乙酯的前体物质 | 第16页 |
| 1.3 氨基甲酸乙酯的控制措施 | 第16-23页 |
| 1.3.1 工艺优化法 | 第16-17页 |
| 1.3.2 酶法 | 第17-18页 |
| 1.3.3 选育低产氨基甲酸乙酯前体物的酿酒酵母 | 第18-21页 |
| 1.3.4 黄酒中氨基甲酸乙酯的控制措施 | 第21-23页 |
| 1.4 论文的主要研究内容 | 第23-26页 |
| 1.4.1 立题依据和研究意义 | 第23-24页 |
| 1.4.2 本论文的主要研究内容 | 第24-26页 |
| 第二章 工业黄酒酵母单倍体的分离 | 第26-40页 |
| 2.1 前言 | 第26页 |
| 2.2 材料与方法 | 第26-34页 |
| 2.2.1 酿造原料 | 第27页 |
| 2.2.2 菌株和质粒 | 第27页 |
| 2.2.3 试剂和仪器 | 第27-28页 |
| 2.2.4 主要溶液及培养基 | 第28-29页 |
| 2.2.5 分子生物学操作 | 第29-32页 |
| 2.2.6 敲除酿酒酵母N85菌株的HO基因 | 第32-33页 |
| 2.2.7 单倍体菌株的分离及接合型鉴定 | 第33页 |
| 2.2.8 切除单倍体酵母的抗性基因 | 第33页 |
| 2.2.9 实验室三角瓶发酵实验 | 第33-34页 |
| 2.2.10 黄酒发酵液指标的测定 | 第34页 |
| 2.2.11 数据分析 | 第34页 |
| 2.3 结果与讨论 | 第34-39页 |
| 2.3.1 酿酒酵母N85菌株单倍体的分离 | 第34-36页 |
| 2.3.2 单倍体菌株抗性基因的切除 | 第36-37页 |
| 2.3.3 黄酒酵母单倍体菌株发酵性能的考察 | 第37-38页 |
| 2.3.4 黄酒发酵液中尿素和EC含量的测定 | 第38-39页 |
| 2.4 本章小结 | 第39-40页 |
| 第三章 敲除精氨酸酶基因阻断尿素的生成 | 第40-52页 |
| 3.1 前言 | 第40页 |
| 3.2 材料与方法 | 第40-44页 |
| 3.2.1 酿造原料 | 第40页 |
| 3.2.2 菌株和质粒 | 第40-41页 |
| 3.2.3 试剂和仪器 | 第41页 |
| 3.2.4 主要溶液及培养基 | 第41页 |
| 3.2.5 分子生物学操作 | 第41-42页 |
| 3.2.6 敲除单倍体酵母的URA3基因 | 第42页 |
| 3.2.7 单倍体酵母精氨酸酶基因的敲除 | 第42-43页 |
| 3.2.8 二倍体黄酒酵母工程菌的获得 | 第43页 |
| 3.2.9 酿酒酵母精氨酸酶酶活的测定 | 第43-44页 |
| 3.2.10 实验室三角瓶发酵实验及指标测定 | 第44页 |
| 3.2.11 酵母工程菌遗传稳定性实验 | 第44页 |
| 3.2.12 数据分析 | 第44页 |
| 3.3 结果与讨论 | 第44-51页 |
| 3.3.1 尿嘧啶缺陷型单倍体酵母的构建 | 第44-45页 |
| 3.3.2 精氨酸酶基因缺失型单倍体工程菌的构建 | 第45-46页 |
| 3.3.3 二倍体黄酒酵母工程菌的获得 | 第46页 |
| 3.3.4 酵母工程菌发酵性能的考察 | 第46-49页 |
| 3.3.5 酵母工程菌降低发酵液中尿素和EC能力的考察 | 第49-51页 |
| 3.4 本章小结 | 第51-52页 |
| 第四章 高效表达脲基酰胺酶基因强化尿素的降解 | 第52-66页 |
| 4.1 前言 | 第52页 |
| 4.2 材料与方法 | 第52-57页 |
| 4.2.1 酿造原料 | 第52页 |
| 4.2.2 菌株和质粒 | 第52页 |
| 4.2.3 试剂和仪器 | 第52-53页 |
| 4.2.4 主要溶液及培养基 | 第53-54页 |
| 4.2.5 分子生物学操作 | 第54-55页 |
| 4.2.6 敲除精氨酸酶基因缺失型工程菌的URA3基因 | 第55页 |
| 4.2.7 高效表达黄酒酵母脲基酰胺酶基因 | 第55-56页 |
| 4.2.8 二倍体黄酒酵母工程菌的获得 | 第56页 |
| 4.2.9 酿酒酵母精氨酸酶和脲基酰胺酶酶活的测定 | 第56页 |
| 4.2.10 酵母工程菌在精氨酸偏好型氮源培养基中生成尿素的研究 | 第56页 |
| 4.2.11 酵母工程菌在尿素偏好型氮源培养基中对尿素的利用 | 第56页 |
| 4.2.12 实验室三角瓶发酵实验及指标检测 | 第56页 |
| 4.2.13 酵母工程菌遗传稳定性实验 | 第56页 |
| 4.2.14 数据分析 | 第56-57页 |
| 4.3 结果与讨论 | 第57-65页 |
| 4.3.1 精氨酸酶基因缺失型工程菌URA3基因的敲除 | 第57页 |
| 4.3.2 高效表达脲基酰胺酶基因工程菌的构建 | 第57页 |
| 4.3.3 二倍体黄酒酵母工程菌的获得 | 第57-58页 |
| 4.3.4 酵母工程菌降低发酵液中尿素和EC能力的考察 | 第58-60页 |
| 4.3.5 黄酒酵母工程菌发酵性能的考察 | 第60-62页 |
| 4.3.6 高效表达脲基酰胺酶基因对酿酒酵母产生尿素的影响 | 第62-63页 |
| 4.3.7 高效表达脲基酰胺酶基因对酿酒酵母利用尿素的影响 | 第63-65页 |
| 4.4 本章小结 | 第65-66页 |
| 第五章 定向改造酿酒酵母瓜氨酸代谢途径减少EC的形成 | 第66-79页 |
| 5.1 前言 | 第66页 |
| 5.2 材料与方法 | 第66-71页 |
| 5.2.1 酿造原料 | 第66页 |
| 5.2.2 菌株和质粒 | 第66页 |
| 5.2.3 试剂和仪器 | 第66页 |
| 5.2.4 主要溶液及培养基 | 第66-67页 |
| 5.2.5 分子生物学操作 | 第67-69页 |
| 5.2.6 敲除黄酒酵母鸟氨酸氨基甲酰转移酶基因 | 第69页 |
| 5.2.7 高效表达精氨基琥珀酸合成酶和精氨酰琥珀酸裂解酶基因 | 第69-71页 |
| 5.2.8 二倍体黄酒酵母工程菌的获得 | 第71页 |
| 5.2.9 实验室三角瓶发酵实验及指标检测 | 第71页 |
| 5.2.10 米汁培养基发酵实验 | 第71页 |
| 5.2.11 数据分析 | 第71页 |
| 5.3 结果与讨论 | 第71-78页 |
| 5.3.1 敲除ARG3基因工程菌的构建 | 第71-72页 |
| 5.3.2 高效表达ARG1和ARG4基因工程菌的构建 | 第72-74页 |
| 5.3.3 二倍体黄酒酵母工程菌的获得 | 第74-75页 |
| 5.3.4 阻断酿酒酵母的瓜氨酸合成途径对黄酒发酵液中瓜氨酸和EC含量的影响 | 第75-76页 |
| 5.3.5 强化酿酒酵母的瓜氨酸代谢途径对黄酒发酵液中瓜氨酸和EC含量的影响 | 第76-77页 |
| 5.3.6 代谢工程改造对工程菌发酵性能的影响 | 第77-78页 |
| 5.4 本章小结 | 第78-79页 |
| 第六章 黄酒酵母工程菌生产试验 | 第79-92页 |
| 6.1 前言 | 第79页 |
| 6.2 材料与方法 | 第79-81页 |
| 6.2.1 酿造原料 | 第79页 |
| 6.2.2 菌株 | 第79页 |
| 6.2.3 试剂和仪器 | 第79-80页 |
| 6.2.4 主要溶液及培养基 | 第80页 |
| 6.2.5 实验室三角瓶发酵实验及指标检测 | 第80页 |
| 6.2.6 发酵工艺对酵母工程菌低产尿素和EC能力的影响 | 第80页 |
| 6.2.7 黄酒放大实验 | 第80-81页 |
| 6.2.8 黄酒大生产试验 | 第81页 |
| 6.2.9 黄酒发酵液贮存过程中EC含量变化的预测 | 第81页 |
| 6.2.10 数据分析 | 第81页 |
| 6.3 结果与讨论 | 第81-90页 |
| 6.3.1 发酵工艺对酵母工程菌低产尿素和EC能力的影响 | 第81-84页 |
| 6.3.2 黄酒放大实验 | 第84-87页 |
| 6.3.3 黄酒大生产试验 | 第87-90页 |
| 6.3.4 黄酒发酵液贮存过程中EC含量变化的预测 | 第90页 |
| 6.4 本章小结 | 第90-92页 |
| 主要结论与展望 | 第92-94页 |
| 主要结论 | 第92-93页 |
| 展望 | 第93-94页 |
| 论文创新点 | 第94-95页 |
| 致谢 | 第95-97页 |
| 参考文献 | 第97-104页 |
| 附录：作者在攻读博士学位期间发表的论文 | 第104页 |
