| 摘要 | 第4-5页 |
| ABSTRACT | 第5页 |
| 1 前言 | 第9-22页 |
| 1.1 萜类化合物 | 第9-13页 |
| 1.1.1 萜类化合物简介 | 第9-10页 |
| 1.1.2 萜类化合物的合成 | 第10-13页 |
| 1.2 番茄红素 | 第13-16页 |
| 1.2.1 番茄红素简介 | 第13-14页 |
| 1.2.2 番茄红素的合成途径 | 第14-16页 |
| 1.3 异戊烯基焦磷酸异构酶 | 第16-19页 |
| 1.3.1 两种类型的IDI | 第17-18页 |
| 1.3.2 利用IDI对萜类合成途径的改造 | 第18-19页 |
| 1.4 合成生物学的控制手段 | 第19-20页 |
| 1.4.1 蛋白质表达水平的影响 | 第19页 |
| 1.4.2 蛋白质预算的调控手段 | 第19-20页 |
| 1.5 本课题的研究内容和意义 | 第20-22页 |
| 1.5.1 研究内容 | 第20-21页 |
| 1.5.2 研究意义 | 第21-22页 |
| 2 材料与方法 | 第22-41页 |
| 2.1 菌株与质粒 | 第22-24页 |
| 2.2 主要试剂 | 第24-25页 |
| 2.3 主要仪器设备 | 第25页 |
| 2.4 培养基 | 第25页 |
| 2.5 主要溶液的配方 | 第25-27页 |
| 2.6 实验方法与步骤 | 第27-41页 |
| 2.6.1 引物设计 | 第27-28页 |
| 2.6.2 各个目的基因的扩增 | 第28-30页 |
| 2.6.3 对载体及目的片段进行酶切处理 | 第30-31页 |
| 2.6.4 载体和目的片段的连接 | 第31页 |
| 2.6.5 连接体系的转化与鉴定 | 第31-33页 |
| 2.6.6 重组菌株的构建 | 第33-34页 |
| 2.6.7 重组菌株的诱导表达及生物转化 | 第34-35页 |
| 2.6.8 重组菌株表达蛋白的SDS-PAGE分析 | 第35-36页 |
| 2.6.9 番茄红素的测定方法 | 第36-37页 |
| 2.6.10 OLMA方法 | 第37-41页 |
| 3 结果与讨论 | 第41-54页 |
| 3.1 不同来源IDI的重组载体的构建 | 第41-45页 |
| 3.1.1 不同来源的Ⅰ型与Ⅱ型IDI序列分析 | 第41页 |
| 3.1.2 不同来源的目的基因idi的扩增 | 第41-43页 |
| 3.1.3 表达载体pSB1s的双酶切结果 | 第43页 |
| 3.1.4 重组载体的鉴定 | 第43-45页 |
| 3.2 IDI的诱导表达以及SDS-PAGE分析 | 第45页 |
| 3.3 在MEP和MVA途径中单独异源表达不同来源的IDI | 第45-47页 |
| 3.3.1 在MEP途径强化菌株中表达IDI对番茄红素产量的影响 | 第46页 |
| 3.3.2 在MVA途径背景菌株中表达IDI对番茄红素产量的影响 | 第46-47页 |
| 3.4 利用异源IDI构建高水平合成番茄红素的工程菌株 | 第47-54页 |
| 3.4.1 协同强化MEP途径的关键基因靶点 | 第47-50页 |
| 3.4.2 借助于异源IDI于MVA背景菌株中优化番茄红素合成途径 | 第50-54页 |
| 4 结论 | 第54-56页 |
| 4.1 不同来源IDI重组质粒的构建 | 第54页 |
| 4.2 不同来源IDI重组质粒的诱导表达 | 第54页 |
| 4.3 在MEP和MVA途径中单独异源表达不同来源的IDI | 第54-55页 |
| 4.4 利用异源IDI构建高水平合成番茄红素的工程菌株 | 第55-56页 |
| 5 展望 | 第56-57页 |
| 6 参考文献 | 第57-64页 |
| 7 攻读硕士学位期间发表论文情况 | 第64-65页 |
| 8 致谢 | 第65-67页 |
| 附录 | 第67-72页 |
