| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-7页 |
| 1.引言 | 第10-20页 |
| 1.1 乳酸菌 | 第10-12页 |
| 1.1.1 乳酸菌的益生作用及应用 | 第10-11页 |
| 1.1.2 乳酸菌生物技术的研究 | 第11-12页 |
| 1.2 乳酸菌食品级表达系统 | 第12-15页 |
| 1.2.1 食品级表达系统的基本条件 | 第13页 |
| 1.2.2 食品级表达系统的分类 | 第13-15页 |
| 1.2.3 食品级表达系统的应用 | 第15页 |
| 1.3 纳豆激酶 | 第15-18页 |
| 1.3.1 纳豆激酶的理化性质 | 第15-16页 |
| 1.3.2 纳豆激酶活性测定方法 | 第16-17页 |
| 1.3.3 溶栓制剂的研究 | 第17-18页 |
| 1.3.4 纳豆激酶的研究现状 | 第18页 |
| 1.4 本文的研究目的及意义 | 第18-20页 |
| 2.材料与方法 | 第20-32页 |
| 2.1 实验菌种与质粒 | 第20页 |
| 2.2 培养基及缓冲液 | 第20-21页 |
| 2.3 主要试验试剂 | 第21-22页 |
| 2.4 主要仪器设备 | 第22页 |
| 2.5 实验试剂与药品的配置 | 第22-23页 |
| 2.6 实验方法 | 第23-32页 |
| 2.6.1 表达载体pMGthyA-ppNK电转化保加利亚乳杆菌thyA缺陷型菌株 | 第23-25页 |
| 2.6.2 SDS-PAGE聚丙烯酰胺凝胶电泳法分析表达产物 | 第25-26页 |
| 2.6.3 半定量RT-PCR法分析重组菌株中纳豆激酶的表达量 | 第26-27页 |
| 2.6.4 纳豆激酶活力测定方法 | 第27-28页 |
| 2.6.5 纳豆激酶体外溶栓实验 | 第28页 |
| 2.6.6 重组乳酸菌表达纳豆激酶条件的优化 | 第28-29页 |
| 2.6.7 纳豆激酶粗酶液酶学性质的测定 | 第29-30页 |
| 2.6.8 纳豆激酶溶解纤维蛋白的作用方式 | 第30页 |
| 2.6.9 模拟肠、胃环境对纳豆激酶酶活的影响 | 第30页 |
| 2.6.10 模拟肠、胃环境对重组菌株的影响 | 第30-31页 |
| 2.6.11 金属离子对肠道内酶活的影响 | 第31-32页 |
| 3.结果与分析 | 第32-49页 |
| 3.1 质粒pMGthyA-ppNK的验证 | 第32页 |
| 3.2 表达载体pMGthyA-ppNK电转保加利亚乳杆菌thyA缺陷型菌株 | 第32-34页 |
| 3.2.1 保加利亚乳杆菌thyA缺陷型菌株生长曲线的测定 | 第32-33页 |
| 3.2.2 保加利亚乳杆菌thyA缺陷型菌株的电转化及转化子的筛选验证 | 第33-34页 |
| 3.2.3 质粒稳定性的测定 | 第34页 |
| 3.3 重组菌株表达纳豆激酶的研究 | 第34-37页 |
| 3.3.1 半定量RT-PCR法分析重组菌株中纳豆激酶的表达量 | 第34-35页 |
| 3.3.2 纳豆激酶的表达方式 | 第35-36页 |
| 3.3.3 表达产物SDS-PAGE分析 | 第36-37页 |
| 3.4 纳豆激酶体外溶栓实验 | 第37-38页 |
| 3.5 重组乳酸菌表达纳豆激酶条件的优化 | 第38-42页 |
| 3.5.1 培养时间对重组菌株的生长及表达蛋白的影响 | 第38-39页 |
| 3.5.2 接种龄对重组菌株的生长及表达蛋白的影响 | 第39-40页 |
| 3.5.3 接种量对重组菌株的生长及表达蛋白的影响 | 第40-41页 |
| 3.5.4 优化培养条件的正交实验分析 | 第41-42页 |
| 3.6 纳豆激酶粗酶液酶学性质的研究 | 第42-44页 |
| 3.6.1 纳豆激酶最适温度及热稳定性 | 第42页 |
| 3.6.2 纳豆激酶的最适pH及pH稳定性 | 第42-43页 |
| 3.6.3 金属离子及化学试剂对纳豆激酶酶活的影响 | 第43-44页 |
| 3.7 纳豆激酶溶解纤维蛋白的作用方式 | 第44-45页 |
| 3.8 模拟肠、胃环境对纳豆激酶酶活的影响 | 第45-46页 |
| 3.8.1 人工胃液对纳豆激酶粗酶液酶活的影响 | 第45页 |
| 3.8.2 人工肠液对纳豆激酶粗酶液酶活的影响 | 第45-46页 |
| 3.9 模拟肠、胃环境对重组菌株的影响 | 第46-47页 |
| 3.9.1 模拟人工胃液对重组菌株的影响 | 第46-47页 |
| 3.9.2 模拟人工肠液对重组菌株的影响 | 第47页 |
| 3.10 肠液中金属离子对菌体自溶及酶活的影响 | 第47-49页 |
| 4.讨论 | 第49-52页 |
| 4.1 纳豆激酶在重组菌株中食品级异源表达 | 第49页 |
| 4.2 提高重组菌株表达纳豆激酶的表达量 | 第49-50页 |
| 4.3 乳酸菌异源表达纳豆激酶的酶学性质 | 第50页 |
| 4.4 人工模拟肠胃液对纳豆激酶的影响 | 第50-51页 |
| 4.5 纳豆激酶的溶栓作用 | 第51-52页 |
| 5. 结论 | 第52-53页 |
| 参考文献 | 第53-58页 |
| 在校期间发表的学术论文 | 第58-59页 |
| 作者简介 | 第59-60页 |
| 致谢 | 第60-61页 |
