| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-11页 |
| 第一章 绪论 | 第11-27页 |
| ·乙醇的用途 | 第11页 |
| ·乙醇的生产方法 | 第11-12页 |
| ·生物发酵法 | 第11-12页 |
| ·化学合成法 | 第12页 |
| ·甘油代谢途径的研究 | 第12-17页 |
| ·乙醇与甘油的联系 | 第12-14页 |
| ·甘油合成途径中的关键酶分析 | 第14-15页 |
| ·阻断甘油合成途径的尝试 | 第15-17页 |
| ·酿酒酵母简介 | 第17-19页 |
| ·基因敲除技术 | 第19-24页 |
| ·克隆构建基因敲除组件 | 第19-20页 |
| ·PCR 介导的基因敲除技术 | 第20-22页 |
| ·基因敲除技术的应用 | 第22-23页 |
| ·PCR 介导的基因敲除技术的优点 | 第23-24页 |
| ·酿酒酵母的筛选标记 | 第24-25页 |
| ·非抗药性标记 | 第24-25页 |
| ·抗药性标记 | 第25页 |
| ·研究依据及意义 | 第25页 |
| ·研究内容 | 第25-26页 |
| ·技术路线 | 第26-27页 |
| 第二章 工业酿酒酵母单倍体的制备 | 第27-38页 |
| ·材料 | 第28-29页 |
| ·菌株 | 第28页 |
| ·培养基 | 第28页 |
| ·药品和试剂 | 第28-29页 |
| ·仪器设备 | 第29页 |
| ·需配试剂 | 第29页 |
| ·方法 | 第29-32页 |
| ·诱导孢子的产生 | 第29-30页 |
| ·单倍体的分离 | 第30页 |
| ·单倍体交配型的鉴定 | 第30页 |
| ·酵母基因组 DNA 的提取 | 第30-31页 |
| ·单倍体交配型的 PCR 扩增验证 | 第31-32页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳 | 第32页 |
| ·筛得的单倍体的生长曲线的制作 | 第32页 |
| ·结果 | 第32-36页 |
| ·单倍体的获得 | 第32-34页 |
| ·单倍体交配型的确定 | 第34页 |
| ·提取的酵母基因组 DNA | 第34-35页 |
| ·单倍体的 PCR 验证结果 | 第35-36页 |
| ·单倍体生长状况的考察 | 第36页 |
| ·讨论 | 第36-38页 |
| 第三章 GPD2 基因的敲除 | 第38-56页 |
| ·材料 | 第39-41页 |
| ·菌株与质粒 | 第39页 |
| ·培养基 | 第39-40页 |
| ·工具酶与药品 | 第40页 |
| ·试剂配制 | 第40-41页 |
| ·主要仪器设备 | 第41页 |
| ·方法 | 第41-49页 |
| ·引物设计 | 第41-42页 |
| ·GPD2 基因的 PCR 扩增 | 第42页 |
| ·基因敲除组件的构建 | 第42页 |
| ·基因敲除组件的纯化 | 第42-43页 |
| ·基因敲除组件连接至 pMD18 T-Vector | 第43页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的小量制备及连接产物的转化 | 第43-44页 |
| ·大肠杆菌转化子的菌落 PCR 鉴定 | 第44-45页 |
| ·质粒的提取 | 第45-46页 |
| ·重组质粒的少量酶切鉴定 | 第46页 |
| ·测序分析 | 第46页 |
| ·同源序列比对 | 第46页 |
| ·转化用基因敲除组件的获得 | 第46页 |
| ·工业酿酒酵母单倍体对 G418 敏感性测定 | 第46-47页 |
| ·酿酒酵母单倍体感受态细胞的制备及电穿孔转化 | 第47-48页 |
| ·转化子的鉴定 | 第48页 |
| ·转化子的稳定性实验 | 第48页 |
| ·全缺失 GPD2 基因的二倍体突变菌株的获得 | 第48-49页 |
| ·结果 | 第49-54页 |
| ·酵母菌 GPD2 基因的 PCR 验证 | 第49页 |
| ·基因敲除组件的获得 | 第49-50页 |
| ·菌落 PCR 的扩增结果 | 第50页 |
| ·酶切鉴定 | 第50-51页 |
| ·测序结果分析 | 第51页 |
| ·同源序列比对结果 | 第51-52页 |
| ·工业酿酒酵母单倍体的 G418 耐受性实验 | 第52页 |
| ·转化子的鉴定 | 第52-53页 |
| ·转化子的稳定性实验 | 第53页 |
| ·全缺失 GPD2 基因的二倍体突变菌的获得 | 第53-54页 |
| ·讨论 | 第54-56页 |
| 第四章 突变体酿酒酵母的发酵实验 | 第56-66页 |
| ·材料 | 第56-57页 |
| ·菌株 | 第56页 |
| ·培养基 | 第56页 |
| ·仪器设备 | 第56-57页 |
| ·方法 | 第57-58页 |
| ·乙醇发酵方法 | 第57页 |
| ·生物量的测定 | 第57页 |
| ·发酵液样品的收集及处理 | 第57-58页 |
| ·液相色谱分析条件 | 第58页 |
| ·标准曲线的制作（外标法） | 第58页 |
| ·结果 | 第58-64页 |
| ·外标法制作的标准曲线 | 第58-59页 |
| ·缺失 GPD2 基因的α型单倍体突变菌株的发酵实验 | 第59-60页 |
| ·缺失 GPD2 基因的 a 型单倍体突变菌株的发酵实验 | 第60-61页 |
| ·缺失 GPD2 基因的二倍体突变株的发酵实验 | 第61-63页 |
| ·缺失 GPD2 基因的单倍体与二倍体突变菌株的乙酸产量 | 第63-64页 |
| ·讨论 | 第64-66页 |
| 全文总结 | 第66-68页 |
| 参考文献 | 第68-75页 |
| 在校期间发表论文 | 第75-76页 |
| 附录一 缩略词 | 第76-77页 |
| 附录二 敲除组件连接 pMD18 T-Vector 后 M13 引物测序结果 | 第77-78页 |
| 致谢 | 第78页 |
