| 摘要 | 第3-5页 |
| ABSTRACT | 第5-6页 |
| 第一章 绪论 | 第11-24页 |
| 1.1 单宁酶的研究进展 | 第11-17页 |
| 1.1.1 单宁酶的作用底物——单宁 | 第11-12页 |
| 1.1.2 产单宁酶微生物来源 | 第12-14页 |
| 1.1.3 单宁酶的分离纯化 | 第14-15页 |
| 1.1.4 单宁酶的性质 | 第15-16页 |
| 1.1.5 单宁酶的发展趋势 | 第16-17页 |
| 1.2 蛋白质糖基化的研究进展 | 第17-23页 |
| 1.2.1 糖基化的分类 | 第17-20页 |
| 1.2.2 糖基化对蛋白质的影响 | 第20-21页 |
| 1.2.3 糖蛋白的去糖基化研究 | 第21-23页 |
| 1.3 本课题的选题依据及研究内容 | 第23-24页 |
| 1.3.1 课题来源 | 第23页 |
| 1.3.2 选题依据 | 第23页 |
| 1.3.3 研究内容 | 第23页 |
| 1.3.4 创新点 | 第23-24页 |
| 第二章 单宁酶的分离纯化 | 第24-37页 |
| 2.1 引言 | 第24页 |
| 2.2 实验材料 | 第24-25页 |
| 2.2.1 单宁酶 | 第24页 |
| 2.2.2 实验试剂 | 第24-25页 |
| 2.2.3 实验主要仪器 | 第25页 |
| 2.3 实验方法 | 第25-30页 |
| 2.3.1 单宁酶粗酶液的制备 | 第25页 |
| 2.3.2 硫酸铵分级沉淀 | 第25-26页 |
| 2.3.3 DEAE-Sepharose Fast Flow阴离子交换层析 | 第26页 |
| 2.3.4 Sephadex G-150凝胶柱层析 | 第26-27页 |
| 2.3.5 单宁酶活力的测定 | 第27-28页 |
| 2.3.6 蛋白质浓度的测定 | 第28-29页 |
| 2.3.7 SDS-PAGE法测定单宁酶纯度 | 第29-30页 |
| 2.4 实验结果与讨论 | 第30-36页 |
| 2.4.1 标准曲线的绘制 | 第30-31页 |
| 2.4.2 硫酸铵分级沉淀饱和度的确定 | 第31-33页 |
| 2.4.3 DEAE-Sepharose Fast Flow阴离子交换柱层析分离 | 第33页 |
| 2.4.4 Sephadex G-150凝胶柱层析分离 | 第33-34页 |
| 2.4.5 单宁酶的纯化效果 | 第34-36页 |
| 2.5 本章小结 | 第36-37页 |
| 第三章 单宁酶的性质分析 | 第37-50页 |
| 3.1 引言 | 第37页 |
| 3.2 实验材料 | 第37-38页 |
| 3.2.1 实验试剂 | 第37页 |
| 3.2.2 实验主要仪器 | 第37-38页 |
| 3.3 实验方法 | 第38-40页 |
| 3.3.1 pH值对单宁酶活性及二级结构的影响 | 第38页 |
| 3.3.2 温度对单宁酶活性及二级结构影响 | 第38页 |
| 3.3.4 单宁酶的4℃储藏稳定性 | 第38页 |
| 3.3.5 金属离子对单宁酶活性的影响 | 第38-39页 |
| 3.3.6 表面活性剂及抑制剂对单宁酶活性的影响 | 第39页 |
| 3.3.7 有机试剂对单宁酶活性的影响 | 第39页 |
| 3.3.8 单宁酶动力学及热力学模型参数的测定 | 第39-40页 |
| 3.4 实验结果与讨论 | 第40-49页 |
| 3.4.1 pH值对单宁酶活性及二级结构的影响 | 第40-42页 |
| 3.4.2 温度对单宁酶活性及二级结构影响 | 第42-44页 |
| 3.4.4 单宁酶的4℃储藏稳定性 | 第44页 |
| 3.4.5 金属离子对单宁酶活性的影响 | 第44-45页 |
| 3.4.6 表面活性剂及抑制剂对单宁酶活性的影响 | 第45-46页 |
| 3.4.7 有机试剂对单宁酶活性的影响 | 第46-47页 |
| 3.4.8 单宁酶动力学及热力学模型参数的测定 | 第47-49页 |
| 3.5 本章小结 | 第49-50页 |
| 第四章 去N-糖基化对单宁酶的影响 | 第50-63页 |
| 4.1 引言 | 第50页 |
| 4.2 实验材料 | 第50-51页 |
| 4.2.1 实验试剂 | 第50页 |
| 4.2.2 实验主要仪器 | 第50-51页 |
| 4.3 实验方法 | 第51-53页 |
| 4.3.1 苯酚硫酸法测定单宁酶糖含量 | 第51-52页 |
| 4.3.2 PNGase F对单宁酶的酶解条件优化 | 第52页 |
| 4.3.3 去N-糖基化对单宁酶活性的影响 | 第52页 |
| 4.3.4 去N-糖基化对单宁酶热稳定性的影响 | 第52页 |
| 4.3.5 圆二色谱二级结构分析 | 第52-53页 |
| 4.3.6 荧光光谱三级结构分析 | 第53页 |
| 4.3.7 原子力显微镜检测单宁酶 | 第53页 |
| 4.4 实验结果与讨论 | 第53-62页 |
| 4.4.1 苯酚硫酸法测定单宁酶糖含量 | 第53-54页 |
| 4.4.2 PNGase F对单宁酶的酶解条件优化 | 第54-55页 |
| 4.4.3 去N-糖基化对单宁酶活性的影响 | 第55-56页 |
| 4.4.4 去N-糖基化对单宁酶热稳定性的影响 | 第56-57页 |
| 4.4.5 圆二色谱二级结构分析 | 第57-59页 |
| 4.4.6 荧光光谱三级结构分析 | 第59-60页 |
| 4.4.7 原子力显微镜检测单宁酶 | 第60-62页 |
| 4.5 本章小结 | 第62-63页 |
| 第五章 结论与展望 | 第63-65页 |
| 5.1 结论 | 第63-64页 |
| 5.1.1 单宁酶的分离纯化 | 第63页 |
| 5.1.2 单宁酶的性质分析 | 第63页 |
| 5.1.3 去N-糖基化对单宁酶的影响 | 第63-64页 |
| 5.2 展望 | 第64-65页 |
| 致谢 | 第65-66页 |
| 参考文献 | 第66-74页 |
| 攻读学位期间的研究成果 | 第74页 |
