| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 第一章 绪论 | 第13-28页 |
| 1.1 亚硝酸盐 | 第13-15页 |
| 1.1.1 概述 | 第13页 |
| 1.1.2 NIT对人体的危害 | 第13-14页 |
| 1.1.3 NIT的药用价值 | 第14-15页 |
| 1.1.4 食品中亚硝酸盐的限量标准及检测方法 | 第15页 |
| 1.2 食品中NIT的控制方法 | 第15-18页 |
| 1.2.1 减少食品中NIT的危害物理方法 | 第16页 |
| 1.2.2 减少食品中NIT的危害化学方法 | 第16-17页 |
| 1.2.3 减少食品中NIT的危害生物方法 | 第17页 |
| 1.2.4 开发食品中NIT的替代物 | 第17-18页 |
| 1.3 反硝化作用与NIR | 第18-23页 |
| 1.3.1 NIR的分类与结构 | 第19-20页 |
| 1.3.2 CuNIR的概述 | 第20-22页 |
| 1.3.3 cd1NIR的概述 | 第22-23页 |
| 1.4 关于NIR的研究现状 | 第23-25页 |
| 1.4.1 乳酸菌降解NIT的研究 | 第23页 |
| 1.4.2 乳酸菌中NIR的分离纯化研究 | 第23-24页 |
| 1.4.3 关于NIR电子供体的研究现状 | 第24-25页 |
| 1.4.4 关于NIR的酶学性质的研究 | 第25页 |
| 1.5 本论文的研究内容和意义 | 第25-28页 |
| 1.5.1 研究意义 | 第25-26页 |
| 1.5.2 研究内容 | 第26-28页 |
| 第二章 重组蛋白NIR大肠杆菌表达载体的构建 | 第28-41页 |
| 2.1 实验材料与仪器 | 第28-30页 |
| 2.1.1 菌株与载体 | 第28页 |
| 2.1.2 主要仪器 | 第28-29页 |
| 2.1.3 主要试剂 | 第29页 |
| 2.1.4 培养基和常用溶液 | 第29-30页 |
| 2.2 实验方法 | 第30-35页 |
| 2.2.1 植物乳杆菌DMDL9010 中nir的编码基因序列的查找及引物设计 | 第30页 |
| 2.2.2 植物乳杆菌DMDL9010 的培养以及DNA的提取 | 第30-31页 |
| 2.2.3 植物乳杆菌DMDL9010 中nir编码基因的扩增 | 第31-32页 |
| 2.2.4 目的基因PCR产物的回收及测序 | 第32页 |
| 2.2.5 目的基因PCR产物及质粒的双酶切与回收 | 第32-33页 |
| 2.2.6 目的基因与载体的连接 | 第33页 |
| 2.2.7 大肠杆菌DH5α 感受态细胞的制备与转化 | 第33-35页 |
| 2.2.8 重组子的筛选与鉴定 | 第35页 |
| 2.3 实验结果与分析 | 第35-40页 |
| 2.3.1 植物乳杆菌DMDL9010 中NIR的蛋白序列及nir的编码基因序列 | 第35-36页 |
| 2.3.2 目的基因的扩增 | 第36页 |
| 2.3.3 目的基因PCR产物的测序 | 第36-38页 |
| 2.3.4 重组表达载体的构建 | 第38-40页 |
| 2.4 本章小结 | 第40-41页 |
| 第三章 rNIR在大肠杆菌中的表达与纯化 | 第41-53页 |
| 3.1 实验材料与仪器 | 第41-45页 |
| 3.1.1 菌株和质粒 | 第41页 |
| 3.1.2 主要仪器 | 第41页 |
| 3.1.3 主要试剂 | 第41-42页 |
| 3.1.4 培养基和常用溶液 | 第42-44页 |
| 3.1.5 预备实验 | 第44-45页 |
| 3.2 实验方法 | 第45-48页 |
| 3.2.1 大肠杆菌BL21（DE3)感受态的制备及转化 | 第45页 |
| 3.2.2 rNIR降解NaNO_2活性检测 | 第45-46页 |
| 3.2.3 rNIR在大肠杆菌的表达 | 第46页 |
| 3.2.4 重组菌株的粗蛋白的提取 | 第46-47页 |
| 3.2.5 rNIR的分离纯化 | 第47-48页 |
| 3.2.6 rNIR的透析和浓缩 | 第48页 |
| 3.2.7 rNIR的SDS-PAGE蛋白电泳 | 第48页 |
| 3.3 实验结果 | 第48-52页 |
| 3.3.1 NIR降解NaNO_2活性检测 | 第48-49页 |
| 3.3.2 rNIR的分离纯化 | 第49-51页 |
| 3.3.3 rNIR的SDS-PAGE电泳分析 | 第51-52页 |
| 3.4 本章小结 | 第52-53页 |
| 第四章 rNIR的酶学性质研究 | 第53-67页 |
| 4.1 实验材料与仪器 | 第53-55页 |
| 4.1.1 菌株 | 第53页 |
| 4.1.2 主要仪器 | 第53页 |
| 4.1.3 主要试剂 | 第53页 |
| 4.1.4 常用溶液 | 第53-55页 |
| 4.2 实验方法 | 第55-58页 |
| 4.2.1 NIT标准曲线的制作及酶活定义 | 第55页 |
| 4.2.2 rNIR降解NIT的酶活检测 | 第55页 |
| 4.2.3 rNIR降解NIT的最适电子供体 | 第55-56页 |
| 4.2.4 rNIR降解NIT的最适电子供体浓度 | 第56页 |
| 4.2.5 rNIR降解NIT的最适反应时间 | 第56-57页 |
| 4.2.6 rNIR降解NIT的最适底物浓度 | 第57页 |
| 4.2.7 rNIR降解NIT的最适温度 | 第57页 |
| 4.2.8 rNIR降解NIT的最适缓冲液 | 第57-58页 |
| 4.3 实验结果 | 第58-66页 |
| 4.3.1 NIT标准曲线 | 第58页 |
| 4.3.2 rNIR降解NIT的酶活检测 | 第58-59页 |
| 4.3.3 rNIR降解NIT的最适电子供体 | 第59-60页 |
| 4.3.4 NIR降解NIT的最适电子供体浓度 | 第60-61页 |
| 4.3.5 NIR降解NIT的最适反应时间 | 第61-62页 |
| 4.3.6 NIR降解NIT的最适底物浓度 | 第62-63页 |
| 4.3.7 rNIR降解NIT的最适反应温度 | 第63-64页 |
| 4.3.8 rNIR降解NIT的最适缓冲液 | 第64-66页 |
| 4.4 本章小结 | 第66-67页 |
| 结论与展望 | 第67-70页 |
| 参考文献 | 第70-81页 |
| 附录1 中英文对照表 | 第81-82页 |
| 攻读硕士期间取得的研究成果 | 第82-84页 |
| 致谢 | 第84-85页 |
| 附件 | 第85页 |
