| 摘要 | 第4-5页 |
| ABSTRACT | 第5-6页 |
| 1 前言 | 第10-22页 |
| 1.1 葡萄酒概述 | 第10-11页 |
| 1.1.1 葡萄酒的发展 | 第10页 |
| 1.1.2 葡萄酒与人体健康 | 第10-11页 |
| 1.2 葡萄酒中的氨基甲酸乙酯 | 第11-12页 |
| 1.3 高级醇概述 | 第12-15页 |
| 1.3.1 高级醇对葡萄酒风味的影响 | 第13页 |
| 1.3.2 高级醇的形成 | 第13-15页 |
| 1.4 影响葡萄酒高级醇产生的主要因素 | 第15-17页 |
| 1.4.1 酵母菌类型以及接种量对高级醇产生的影响 | 第15-16页 |
| 1.4.2 发酵工艺对高级醇产生的影响 | 第16页 |
| 1.4.3 发酵液α-氨基氮含量对高级醇产生的影响 | 第16-17页 |
| 1.4.4 葡萄品种对高级醇产生的影响 | 第17页 |
| 1.5 低产高级醇酵母菌株的选育 | 第17-19页 |
| 1.5.1 诱变筛选低产高级醇酿酒酵母菌株 | 第17-18页 |
| 1.5.2 原生质体融合筛选低产高级醇酿酒酵母菌株 | 第18页 |
| 1.5.3 基因工程育种筛选低产高级醇酿酒酵母菌株 | 第18-19页 |
| 1.6 本论文的立题依据及研究内容 | 第19-22页 |
| 1.6.1 立题依据 | 第19-21页 |
| 1.6.2 研究内容 | 第21-22页 |
| 2 材料与方法 | 第22-46页 |
| 2.1 材料与仪器 | 第22-28页 |
| 2.1.1 菌株与质粒 | 第22-23页 |
| 2.1.2 主要实验仪器 | 第23页 |
| 2.1.3 主要试剂 | 第23-25页 |
| 2.1.4 主要培养基 | 第25页 |
| 2.1.5 主要溶液 | 第25-28页 |
| 2.2 实验方法 | 第28-41页 |
| 2.2.1 引物设计 | 第28-31页 |
| 2.2.2 目的DNA片段的获取及纯化 | 第31-34页 |
| 2.2.3 重组质粒的构建 | 第34-36页 |
| 2.2.4 酵母细胞转化 | 第36-37页 |
| 2.2.5 KanMX筛选标记的去除 | 第37页 |
| 2.2.6 实时荧光定量PCR | 第37-40页 |
| 2.2.7 生长曲线的测定 | 第40页 |
| 2.2.8 葡萄酒酿造工艺 | 第40页 |
| 2.2.9 遗传稳定性实验 | 第40-41页 |
| 2.3 分析方法 | 第41-46页 |
| 2.3.1 发酵速率的测定 | 第41页 |
| 2.3.2 酒精度测定 | 第41页 |
| 2.3.3 残余还原糖测定 | 第41-42页 |
| 2.3.4 总酸测定 | 第42页 |
| 2.3.5 pH测定 | 第42页 |
| 2.3.6 挥发性酸、酯以及高级醇测定 | 第42-43页 |
| 2.3.7 α-氨基氮测定 | 第43页 |
| 2.3.8 氨基酸测定 | 第43-44页 |
| 2.3.9 尿素测定 | 第44-45页 |
| 2.3.10 EC测定 | 第45-46页 |
| 3 结果与讨论 | 第46-76页 |
| 3.1 游离过表达BAT1基因对葡萄酒酵母产高级醇的影响 | 第46-50页 |
| 3.1.1 重组菌株的筛选与验证 | 第46页 |
| 3.1.2 基因表达水平分析 | 第46-47页 |
| 3.1.3 重组菌株与出发菌株生长、发酵性能的比较 | 第47-48页 |
| 3.1.4 葡萄酒中高级醇及其他风味物质含量的比较 | 第48-49页 |
| 3.1.5 葡萄酒中L-缬氨酸含量的比较 | 第49页 |
| 3.1.6 葡萄酒中尿素及EC含量的比较 | 第49-50页 |
| 3.1.7 小结 | 第50页 |
| 3.2 敲除BAT2基因同时整合过表达BAT1基因对葡萄酒酵母产高级醇的影响 | 第50-60页 |
| 3.2.1 重组质粒pUC-APTKB的构建 | 第50-53页 |
| 3.2.2 BAT2一个等位基因缺失同时整合过表达BAT1基因重组菌株的构建 | 第53-54页 |
| 3.2.3 BAT2两个等位基因缺失同时整合过表达BAT1基因重组菌株的构建 | 第54-55页 |
| 3.2.4 基因表达水平分析 | 第55-56页 |
| 3.2.5 重组菌株与出发菌株生长、发酵性能的比较 | 第56-58页 |
| 3.2.6 葡萄酒中高级醇以及其他风味物质含量的比较 | 第58-59页 |
| 3.2.7 葡萄酒中L-缬氨酸含量的比较 | 第59页 |
| 3.2.8 葡萄酒中尿素及EC含量的比较 | 第59页 |
| 3.2.9 小结 | 第59-60页 |
| 3.3 敲除ILV3基因同时整合过表达BAT1基因对葡萄酒酵母产高级醇的影响 | 第60-66页 |
| 3.3.1 ILV3一个等位基因缺失同时整合过表达BAT1基因重组菌株的构建 | 第60-61页 |
| 3.3.2 ILV3两个等位基因缺失同时整合过表达BAT1基因重组菌株的构建 | 第61-62页 |
| 3.3.3 基因表达水平分析 | 第62-63页 |
| 3.3.4 重组菌株与出发菌株生长、发酵性能的比较 | 第63-64页 |
| 3.3.5 葡萄酒中高级醇以及其他风味物质含量的比较 | 第64-65页 |
| 3.3.6 葡萄酒中L-缬氨酸含量的比较 | 第65-66页 |
| 3.3.7 葡萄酒中尿素及EC含量的比较 | 第66页 |
| 3.3.8 小结 | 第66页 |
| 3.4 低产高级醇重组菌株的比较 | 第66-69页 |
| 3.4.1 生长性能比较 | 第66-67页 |
| 3.4.2 发酵性能比较 | 第67-68页 |
| 3.4.3 葡萄酒中高级醇及其他风味物质含量的比较 | 第68页 |
| 3.4.4 葡萄酒中尿素及EC含量的比较 | 第68-69页 |
| 3.4.5 小结 | 第69页 |
| 3.5 遗传稳定性分析 | 第69-70页 |
| 3.6 不同品种葡萄对重组菌发酵产高级醇的影响 | 第70-74页 |
| 3.6.1 不同品种葡萄原料pH值,α-氨基氮,可溶性固形物测定 | 第70页 |
| 3.6.2 重组菌接种不同品种葡萄汁发酵实验 | 第70-73页 |
| 3.6.3 小结 | 第73-74页 |
| 3.7 不同发酵温度对重组菌发酵产高级醇的影响 | 第74-76页 |
| 3.7.1 发酵温度的选择 | 第74页 |
| 3.7.2 不同发酵温度下重组菌SYBB3的高级醇产量 | 第74-75页 |
| 3.7.3 不同发酵温度下重组菌SYBB3高级醇低产性能的比较 | 第75页 |
| 3.7.4 小结 | 第75-76页 |
| 4 结论 | 第76-77页 |
| 5 展望 | 第77-78页 |
| 6 参考文献 | 第78-85页 |
| 7 攻读硕士学位期间发表论文 | 第85-86页 |
| 8 致谢 | 第86页 |
