| 摘要 | 第4-5页 |
| ABSTRACT | 第5-6页 |
| 第1章 绪论 | 第11-20页 |
| 1.1 课题的研究背景与目的意义 | 第11页 |
| 1.2 乳酸杆菌耐盐性 | 第11-12页 |
| 1.3 盐胁迫条件下乳酸杆菌对甜菜碱的积累 | 第12-13页 |
| 1.3.1 甜菜碱 | 第12页 |
| 1.3.2 其他相容性溶质 | 第12-13页 |
| 1.4 甜菜碱的作用 | 第13-15页 |
| 1.4.1 渗透调节 | 第13-14页 |
| 1.4.2 稳定酶结构 | 第14页 |
| 1.4.3 促进PCR扩增 | 第14-15页 |
| 1.5 盐应激条件下的蛋白变化 | 第15-18页 |
| 1.5.1 应激响应中的 σ 因子分析 | 第15页 |
| 1.5.2 各种应激条件下的蛋白变化 | 第15-16页 |
| 1.5.3 盐应激条件下的基因以及蛋白的变化 | 第16-17页 |
| 1.5.4 盐应激条件下调控甜菜碱转运基因与蛋白的变化 | 第17-18页 |
| 1.6 课题主要研究内容 | 第18-19页 |
| 1.7 技术路线 | 第19-20页 |
| 第2章 材料和方法 | 第20-33页 |
| 2.1 材料及仪器 | 第20-22页 |
| 2.1.1 材料与试剂 | 第20-21页 |
| 2.1.2 实验仪器 | 第21页 |
| 2.1.3 菌体活化及培养基 | 第21-22页 |
| 2.2 菌体耐盐性与渗透压的确定 | 第22页 |
| 2.2.1 耐盐性测定 | 第22页 |
| 2.2.2 盐浓度与渗透压之间的关系 | 第22页 |
| 2.3 甜菜碱最佳作用条件的确定 | 第22-23页 |
| 2.3.1 甜菜碱最佳作用浓度的确定 | 第22页 |
| 2.3.2 甜菜碱最佳作用时间的确定 | 第22页 |
| 2.3.3 甜菜碱最佳作用温度的确定 | 第22-23页 |
| 2.3.4 甜菜碱最佳作用pH的确定 | 第23页 |
| 2.3.5 甜菜碱转运最佳浓度、时间、温度、pH的验证 | 第23页 |
| 2.4 保加利亚乳杆菌转运甜菜碱含量的测定 | 第23-24页 |
| 2.4.1 胞内甜菜碱的提取 | 第23页 |
| 2.4.2 高效相色谱法测细胞内甜菜碱含量 | 第23-24页 |
| 2.4.3 吸光度与活菌数之间关系的确定 | 第24页 |
| 2.4.4 胞内外甜菜碱含量的计算 | 第24页 |
| 2.5 调控甜菜碱转运关键蛋白的挖掘 | 第24-31页 |
| 2.5.1 扫描电镜观察菌体形态的变化 | 第24-25页 |
| 2.5.2 超声破碎法提取菌体全蛋白 | 第25页 |
| 2.5.3 菌体全蛋白含量的测定 | 第25-26页 |
| 2.5.4 菌体全蛋白超声破碎条件的确定 | 第26页 |
| 2.5.5 单向SDS-PAGE电泳 | 第26-28页 |
| 2.5.6 菌体全蛋白双向电泳处理方式的确定 | 第28页 |
| 2.5.7 双向电泳分析差异蛋白 | 第28-31页 |
| 2.6 外源诱导物与甜菜碱对盐胁迫菌体的协同保护作用研究 | 第31-32页 |
| 2.6.1 精氨酸、鸟氨酸、瓜氨酸单因素实验 | 第31页 |
| 2.6.2 多聚磷酸盐单因素实验 | 第31页 |
| 2.6.3 L-半胱氨酸盐酸盐单因素实验 | 第31-32页 |
| 2.6.4 Plaekett-Burman实验 | 第32页 |
| 2.6.5 最陡爬坡实验 | 第32页 |
| 2.6.6 Box-Behnken Design(BBD)实验设计和响应面分析 | 第32页 |
| 2.6.7 验证实验 | 第32页 |
| 2.7 数据处理及绘图 | 第32-33页 |
| 第3章 盐胁迫条件下保加利亚乳杆菌转运甜菜碱能力研究 | 第33-45页 |
| 3.1 耐盐性与渗透压的确定 | 第33-35页 |
| 3.1.1 L. bulgaricus 34.5 耐盐性测定 | 第33-35页 |
| 3.1.2 盐浓度与渗透压之间的关系 | 第35页 |
| 3.2 甜菜碱最佳作用条件的确定 | 第35-39页 |
| 3.2.1 甜菜碱最佳作用浓度的确定 | 第35-36页 |
| 3.2.2 甜菜碱最佳作用时间的确定 | 第36-37页 |
| 3.2.3 甜菜碱最佳作用温度的确定 | 第37-38页 |
| 3.2.4 甜菜碱最佳作用pH的确定 | 第38-39页 |
| 3.2.5 甜菜碱最优作用条件下的菌数测定 | 第39页 |
| 3.3 菌体胞内外甜菜碱含量的测定 | 第39-44页 |
| 3.3.1 吸光度与活菌数之间的关系 | 第39-41页 |
| 3.3.2 不同培养条件胞内甜菜碱含量的测定 | 第41-43页 |
| 3.3.3 最优条件下胞内甜菜碱含量与转运率的比较分析 | 第43-44页 |
| 3.4 本章小结 | 第44-45页 |
| 第4章 调控甜菜碱转运关键蛋白的挖掘 | 第45-60页 |
| 4.1 扫描电镜观察菌体形态的变化 | 第45-48页 |
| 4.1.1 菌体形态变化 | 第45-47页 |
| 4.1.2 菌体大小变化 | 第47-48页 |
| 4.2 菌体蛋白含量的测定 | 第48-50页 |
| 4.2.1 标准曲线的绘制 | 第48页 |
| 4.2.2 蛋白提取超声功率的确定 | 第48-49页 |
| 4.2.3 蛋白提取超声时间的确定 | 第49-50页 |
| 4.3 菌体全蛋白双向电泳处理方式的确定 | 第50-51页 |
| 4.4 甜菜碱对盐胁迫菌体蛋白表达变化的影响 | 第51-59页 |
| 4.4.1 单向SDS-PAGE电泳初步分析差异蛋白 | 第51页 |
| 4.4.2 双向电泳蛋白表达图谱 | 第51-53页 |
| 4.4.3 差异蛋白质谱鉴定结果 | 第53-54页 |
| 4.4.4 差异蛋白GO分析 | 第54-55页 |
| 4.4.5 差异蛋白kegg pathway分析 | 第55-58页 |
| 4.4.6 差异蛋白string network分析 | 第58-59页 |
| 4.5 本章小结 | 第59-60页 |
| 第5章 外源诱导物与甜菜碱对盐胁迫菌体的协同保护作用研究 | 第60-68页 |
| 5.1 精氨酸、鸟氨酸、瓜氨酸单因素实验 | 第60-61页 |
| 5.2 多聚磷酸盐单因素实验 | 第61-63页 |
| 5.3 L-半胱氨酸盐酸盐单因素实验 | 第63页 |
| 5.4 PB实验 | 第63-64页 |
| 5.5 最陡爬坡实验 | 第64页 |
| 5.6 BBD实验和响应面分析 | 第64-66页 |
| 5.7 验证实验 | 第66-67页 |
| 5.8 本章小结 | 第67-68页 |
| 结论 | 第68-69页 |
| 参考文献 | 第69-77页 |
| 附录 1 | 第77-79页 |
| 附录 2 | 第79-83页 |
| 附录 3 | 第83-85页 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 | 第85-87页 |
| 致谢 | 第87页 |
