| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 第一章 文献综述 | 第10-20页 |
| 1.1 咖啡因简介 | 第10-13页 |
| 1.1.1 咖啡因的生物来源及其化学结构 | 第10-11页 |
| 1.1.2 咖啡因物理化学性质 | 第11页 |
| 1.1.3 咖啡因的功能 | 第11页 |
| 1.1.4 咖啡因的危害 | 第11-12页 |
| 1.1.5 茶叶中营养成分 | 第12-13页 |
| 1.2 咖啡因提取方法 | 第13-15页 |
| 1.2.1 溶剂萃取法 | 第13页 |
| 1.2.2 吸附法 | 第13-14页 |
| 1.2.3 升华法 | 第14页 |
| 1.2.4 沉淀法 | 第14页 |
| 1.2.5 微波提取法 | 第14页 |
| 1.2.6 超临界二氧化碳提取法(SFE法) | 第14-15页 |
| 1.3 咖啡因降解菌的研究动态 | 第15-16页 |
| 1.4 咖啡因在微生物中的代谢途径 | 第16-17页 |
| 1.4.1 N-脱甲基—茶碱途径 | 第17页 |
| 1.4.2 N-脱甲基—可可碱途径 | 第17页 |
| 1.4.3 氧化途径 | 第17页 |
| 1.4.4 黄嘌呤氧化酶途径 | 第17页 |
| 1.5 脱甲基酶的研究 | 第17-18页 |
| 1.6 Paraburkholderia属的研究现状 | 第18页 |
| 1.7 本课题研究目的与意义 | 第18-19页 |
| 1.8 本论文研究内容 | 第19-20页 |
| 第二章 咖啡因降解途径功能基因的确定 | 第20-30页 |
| 2.1 差异转录组测序分析 | 第20页 |
| 2.2 实时荧光定量PCR | 第20-26页 |
| 2.2.1 实验材料 | 第20-22页 |
| 2.2.1.1 菌株来源 | 第20页 |
| 2.2.1.2 培养基 | 第20-21页 |
| 2.2.1.3 主要试剂 | 第21-22页 |
| 2.2.1.4 实验仪器 | 第22页 |
| 2.2.2 引物设计 | 第22-23页 |
| 2.2.3 RNA提取及质量检测 | 第23-24页 |
| 2.2.3.1 RNA提取 | 第23-24页 |
| 2.2.3.2 RNA质量检测 | 第24页 |
| 2.2.4 RNA反转录 | 第24页 |
| 2.2.5 逆转录PCR | 第24-25页 |
| 2.2.6 实时荧光定量PCR | 第25-26页 |
| 2.3 实验结果分析 | 第26-28页 |
| 2.3.1 转录组测序 | 第26-27页 |
| 2.3.2 实时荧光定量PCR | 第27-28页 |
| 2.4 本章小结 | 第28-30页 |
| 第三章 cdnA和cdnC基因克隆 | 第30-42页 |
| 3.1 引言 | 第30页 |
| 3.2 材料 | 第30-33页 |
| 3.2.1 菌株、质粒 | 第30页 |
| 3.2.2 仪器 | 第30-31页 |
| 3.2.3 药品与试剂 | 第31-33页 |
| 3.2.3.1 药品 | 第31-32页 |
| 3.2.3.2 培养基 | 第32页 |
| 3.2.3.3 分子实验相关试剂和试剂盒 | 第32-33页 |
| 3.3 方法 | 第33-39页 |
| 3.3.1 提取菌体基因组DNA | 第33-34页 |
| 3.3.2 目的基因cdnA、cdnC的体外扩增 | 第34-36页 |
| 3.3.2.1 设计引物,扩增目的基因片段 | 第34-35页 |
| 3.3.2.2 琼脂糖凝胶电泳检测及胶回收 | 第35-36页 |
| 3.3.3 克隆质粒构建 | 第36页 |
| 3.3.4 转化 | 第36-37页 |
| 3.3.4.1 超级感受态制备 | 第36-37页 |
| 3.3.4.2 快转 | 第37页 |
| 3.3.5 菌液PCR进行克隆检测 | 第37-38页 |
| 3.3.6 质粒的提取(碱裂解法) | 第38页 |
| 3.3.7 测序 | 第38-39页 |
| 3.4 实验结果与分析 | 第39-41页 |
| 3.5 本章小结 | 第41-42页 |
| 第四章 原核表达系统的构建 | 第42-61页 |
| 4.1 引言 | 第42页 |
| 4.2 材料 | 第42-44页 |
| 4.2.1 菌株和质粒 | 第42页 |
| 4.2.2 仪器 | 第42-43页 |
| 4.2.3 试剂与药品 | 第43-44页 |
| 4.3 诱导蛋白CdnA和CdnC表达及检测活性 | 第44-49页 |
| 4.3.1 原核表达系统构建 | 第44-46页 |
| 4.3.1.1 表达载体pET32a-cdnA和pET32a-cdnC的构建 | 第44-45页 |
| 4.3.1.2 制备表达宿主感受态 | 第45-46页 |
| 4.3.1.3 构建表达菌株 | 第46页 |
| 4.3.2 SDS-PAGE检测表达菌株的目的蛋白表达情况 | 第46-47页 |
| 4.3.2.1 表达菌株诱导 | 第46-47页 |
| 4.3.3 目的蛋白诱导表达条件优化 | 第47-48页 |
| 4.3.4 表达蛋白活性检测 | 第48-49页 |
| 4.4 实验结果与分析 | 第49-60页 |
| 4.4.1 原核表达载体pET32a-cdnA和pET32a-cdnC的构建 | 第49-52页 |
| 4.4.2 目的蛋白诱导表达条件优化 | 第52-55页 |
| 4.4.3 表达蛋白活性检测 | 第55-60页 |
| 4.5 本章小结 | 第60-61页 |
| 第五章 结论与展望 | 第61-62页 |
| 参考文献 | 第62-65页 |
| 致谢 | 第65页 |
