| 摘要 | 第4-5页 |
| ABSTRACT | 第5-6页 |
| 第一章 绪论 | 第14-20页 |
| 1.1 酿酒酵母醛酮还原酶简介 | 第14-15页 |
| 1.2 葡萄糖脱氢酶简介 | 第15页 |
| 1.3 醛酮类物质简介 | 第15-16页 |
| 1.4 内含肽简介 | 第16-17页 |
| 1.5 多肽的简介 | 第17-18页 |
| 1.6 课题的研究内容及意义 | 第18-20页 |
| 第二章 载体的构建 | 第20-56页 |
| 2.1 pET28-GRE2载体的构建 | 第20-28页 |
| 2.1.1 实验材料与试剂 | 第20-22页 |
| 2.1.1.1 实验菌种与载体 | 第20-21页 |
| 2.1.1.2 实验设计的引物序列 | 第21页 |
| 2.1.1.3 试剂 | 第21页 |
| 2.1.1.4 溶液 | 第21-22页 |
| 2.1.2 提取质粒 | 第22-23页 |
| 2.1.3 酶切质粒 | 第23页 |
| 2.1.4 快速回收pET-28 (a)切开的载体 | 第23-24页 |
| 2.1.5 胶回收GRE2的酶切片段 | 第24-25页 |
| 2.1.6 连接pET-28 (a)和Gre2片段 | 第25-26页 |
| 2.1.7 制备感受态 | 第26页 |
| 2.1.8 转化 | 第26页 |
| 2.1.9 菌落PCR筛选目的菌落 | 第26-28页 |
| 2.2 pET28-GDH载体的构建 | 第28-34页 |
| 2.2.1 提取质粒 | 第28-29页 |
| 2.2.2 酶切质粒 | 第29-30页 |
| 2.2.3 快速回收pET-28(a)切开的载体 | 第30页 |
| 2.2.4 胶回收GDH的酶切片段 | 第30-31页 |
| 2.2.5 连接pET-28 (a)和GDH片段 | 第31-32页 |
| 2.2.6 转化 | 第32页 |
| 2.2.7 菌落PCR筛选目的菌落 | 第32-34页 |
| 2.3. NpuN,NpuC内含肽介导的GRE2-GDH载体的构建 | 第34-43页 |
| 2.3.1 pETDuet-GRE2构建 | 第34-37页 |
| 2.3.2 pETDuet-NpuC-GRE2构建 | 第37-39页 |
| 2.3.3 pETDuet-NpuC-GRE2-NpuN构建 | 第39-41页 |
| 2.3.4 pETDuet-NpuC-GRE2-GDH-NpuN载体的构建 | 第41-43页 |
| 2.4 pET28-GRE2-E体的构建 | 第43-48页 |
| 2.5 pET28-GDH-R载体的构建 | 第48-53页 |
| 2.6 本章小结 | 第53-56页 |
| 第三章 载体的表达纯化 | 第56-68页 |
| 3.1 仪器和试剂 | 第56-58页 |
| 3.1.1 载体和菌体 | 第56页 |
| 3.1.2 主要试剂 | 第56-57页 |
| 3.1.3 实验仪器 | 第57-58页 |
| 3.2 预表达 | 第58-61页 |
| 3.2.1 pET28a-GDH的预表达 | 第58-60页 |
| 3.2.2 pET28a-GRE2载体预表达 | 第60页 |
| 3.2.3 pETDuet-NpuC-GRE2-GDH-NpuN载体预表达 | 第60-61页 |
| 3.3 含酶载体的表达纯化 | 第61-63页 |
| 3.3.1 五种载体的表达 | 第61页 |
| 3.3.2 酶的纯化 | 第61-63页 |
| 3.4 结果与分析 | 第63-67页 |
| 3.4.1 GRE2-PET28的表达结果 | 第63-64页 |
| 3.4.2 GDH-PET28的表达结果 | 第64-65页 |
| 3.4.3 PET28-GRE2-E的表达结果 | 第65页 |
| 3.4.4 PET28-GDH-R的表达结果 | 第65-66页 |
| 3.4.5 pETDuet-NpuC-GRE2-GDH-NpuN的表达结果 | 第66-67页 |
| 3.5 本章总结 | 第67-68页 |
| 第四章 三种体系的活性 | 第68-80页 |
| 4.1 材料和方法 | 第68-69页 |
| 4.1.1 菌种 | 第68-69页 |
| 4.1.2 试剂 | 第69页 |
| 4.1.3 主要的仪器 | 第69页 |
| 4.2 酿酒酵母醛酮还原酶活性的测定 | 第69-78页 |
| 4.2.1 测蛋白标准曲线 | 第70-73页 |
| 4.2.1.1 制作蛋白质的标准曲线 | 第70-71页 |
| 4.2.1.2 测苯乙酮标准曲线 | 第71-72页 |
| 4.2.1.3 测糠醛的标准曲线 | 第72-73页 |
| 4.2.2 对酿酒酵母醛酮还原酶对苯乙酮的反应条件的优化 | 第73-78页 |
| 4.2.2.1 糠醛 | 第73-74页 |
| 4.2.2.2 苯乙酮 | 第74-78页 |
| 4.3 本章小结 | 第78-80页 |
| 第五章 双酶体系的表征 | 第80-90页 |
| 5.1 荧光猝灭实验 | 第80-83页 |
| 5.1.1 实验材料 | 第80页 |
| 5.1.2 实验方法 | 第80-83页 |
| 5.2 圆二色谱 | 第83-85页 |
| 5.3 天然聚丙烯酰胺凝胶电泳(BN-PAGE) | 第85-88页 |
| 5.3.1 试剂 | 第85-86页 |
| 5.3.2 实验步骤 | 第86-87页 |
| 5.3.3 结果分析 | 第87-88页 |
| 5.4 本章小结 | 第88-90页 |
| 第六章 总结 | 第90-92页 |
| 参考文献 | 第92-96页 |
| 致谢 | 第96-98页 |
| 作者和导师简介 | 第98-99页 |
| 附件 | 第99-100页 |
