| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-9页 |
| 第1章 绪论 | 第9-17页 |
| ·立题背景 | 第9页 |
| ·双组分信号转导系统 | 第9-11页 |
| ·组氨酸蛋白激酶 | 第10页 |
| ·应答调控蛋白 | 第10页 |
| ·双组分信号转导系统的作用机制 | 第10-11页 |
| ·乳酸菌中双组分信号转导系统 | 第11-13页 |
| ·耐酸性调控 | 第11-12页 |
| ·细菌素的合成 | 第12-13页 |
| ·粘附和定殖能力 | 第13页 |
| ·突变体的构建 | 第13-15页 |
| ·基因敲除的原理及步骤 | 第14页 |
| ·自杀性质粒的构建及突变体的筛选 | 第14页 |
| ·乳酸菌突变体的构建 | 第14-15页 |
| ·本课题研究的目的及意义 | 第15-16页 |
| ·本课题主要研究内容 | 第16-17页 |
| 第2章 材料和方法 | 第17-32页 |
| ·材料及仪器 | 第17-21页 |
| ·菌株和质粒 | 第17页 |
| ·酶及试剂盒 | 第17页 |
| ·引物 | 第17-18页 |
| ·试剂 | 第18-19页 |
| ·常用试剂的配制 | 第19-20页 |
| ·培养基的配制 | 第20页 |
| ·主要仪器 | 第20-21页 |
| ·实验方法 | 第21-32页 |
| ·不同抗生素筛选浓度的确定 | 第21页 |
| ·德氏乳杆菌保加利亚亚种基因组DNA 提取 | 第21-22页 |
| ·PCR 技术特异性扩增目的基因 | 第22-25页 |
| ·PCR 产物胶回收 | 第25页 |
| ·细菌质粒DNA 的提取 | 第25-26页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备及转化 | 第26页 |
| ·重组质粒的快速鉴定方法 | 第26页 |
| ·重组质粒测序鉴定 | 第26-27页 |
| ·构建重组质粒 pUC18-rr1 和 pUC18- hpk1 | 第27-28页 |
| ·构建重组质粒pUC18-111-EM-1、pUC18-111-EM-1、pUC18-hpk1-EM-2 和pUC18-hpk1-EM-2 | 第28-30页 |
| ·电脉冲转化德氏乳杆菌保加利亚亚种 | 第30页 |
| ·功能分析 | 第30-32页 |
| 第三章 突变体及互补体构建 | 第32-46页 |
| ·不同抗生素筛选浓度确定 | 第32-34页 |
| ·氨苄素青霉素（Amp）筛选浓度的确定 | 第32页 |
| ·红霉素（Em）筛选浓度的确定 | 第32-33页 |
| ·氯霉素（Cm）筛选浓度的确定 | 第33-34页 |
| ·自杀性重组质粒 pUC18-rr1 和 pUC18-hpk1 构建 | 第34-37页 |
| ·德氏乳杆菌保加利亚亚种 CH3 总 DNA 提取以及 PCR 特异性扩增 目的基因 hpk1 和 rr1 | 第35页 |
| ·重组质粒酶切及PCR 鉴定 | 第35-37页 |
| ·测序鉴定 | 第37页 |
| ·重组质粒PUC18-111-EM-1、PUC18-111-EM-2、PUC18-hpk1-EM-1 和PUC18-hpk1-EM-2 构建 | 第37-40页 |
| ·PCR 特异性扩增目的红霉素抗性基因片段 | 第38页 |
| ·重组质粒pUC18-111-EM-1、pUC18-111-EM-2、pUC18-hpk1-EM-1 和pUC18-hpk1-EM-2 酶切鉴定 | 第38-40页 |
| ·测序鉴定 | 第40页 |
| ·突变体筛选 | 第40-43页 |
| ·氨苄青霉素筛选突变体 | 第40-41页 |
| ·红霉素筛选突变体 | 第41-43页 |
| ·互补体筛选 | 第43-44页 |
| ·氯霉素筛选互补体 | 第43-44页 |
| ·本章小结 | 第44-46页 |
| 第四章 功能分析 | 第46-54页 |
| ·德氏乳杆菌保加利亚亚种CH3 与突变体CH3-H1、CH3-R1 生长曲线差异分析 | 第46-47页 |
| ·生长曲线测定 | 第46-47页 |
| ·pH 测定 | 第47页 |
| ·菌体形态差异分析 | 第47-49页 |
| ·德氏乳杆菌保加利亚亚种CH3 不同时期菌体形态差异分析 | 第47-48页 |
| ·突变体CH3-H1 和CH3-R1 不同时期菌体形态差异分析 | 第48-49页 |
| ·耐酸功能分析 | 第49-51页 |
| ·德氏乳杆菌保加利亚亚种CH3 耐酸试验 | 第49-50页 |
| ·突变体CH3-R1 耐酸试验 | 第50页 |
| ·突变体CH3-H1 耐酸试验 | 第50-51页 |
| ·野生乳酸菌与突变体生长耐酸功能差异分析 | 第51页 |
| ·粘附功能分析 | 第51-53页 |
| ·本章小结 | 第53-54页 |
| 结论 | 第54-56页 |
| 参考文献 | 第56-61页 |
| 攻读硕士学位期间发表的论文 | 第61-63页 |
| 致谢 | 第63页 |
