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多重PCR检测肉及肉制品中四种食源性致病菌的研究

摘要第1-5页
Abstract第5-9页
1 引言第9-22页
   ·立题背景及意义第9页
   ·本文所涉及的食源性致病菌简介第9-15页
     ·金黄色葡萄球菌第9-10页
     ·沙门氏菌第10-12页
     ·志贺氏菌第12-13页
     ·单核增生李斯特氏菌第13-15页
   ·食源性致病菌检测方法第15-20页
     ·常规的检测方法第15页
     ·快速的检测方法第15-20页
   ·肉及肉制品中食源性致病菌PCR检测研究现状第20页
   ·本文研究目的及研究内容第20-22页
2 材料与方法第22-33页
   ·试验材料第22-24页
     ·菌株第22页
     ·主要培养基第22-23页
     ·仪器与设备第23页
     ·样品与生化试剂第23-24页
   ·实验方法第24-33页
     ·细菌的培养第24页
     ·菌体的DNA的提取第24页
     ·多重PCR引物的设计第24-25页
     ·多重PCR反应条件的优化第25页
     ·特异性第25-26页
     ·灵敏度的检测第26页
     ·多重PCR反应产物检测第26页
     ·多重PCR反应产物胶回收第26-27页
     ·多重PCR产物的测序鉴定第27页
     ·多重PCR检测人工污染的肉及肉制品第27-28页
     ·肉及肉制品中四种致病菌DNA提取方法比较第28-31页
     ·多重 PCR方法与国标方法进行实际样品检测对比试验第31-33页
3 结果与分析第33-52页
   ·PCR反应条件优化结果第33-37页
     ·最适引物添加量的选择第33-34页
     ·最适Mg~(2+)(25mmol)添加量的选择第34-35页
     ·最适退火温度选择第35页
     ·最适dNTPmixture(各2.5mM)添加量的选择第35-36页
     ·最适Taq酶(5U/μL)添加量第36页
     ·多重PCR反应循环数的选择第36页
     ·多重PCR反应的热启动与冷启动比较第36-37页
   ·特异性第37-38页
     ·多重PCR引物特异性第37-38页
     ·多重PCR反应特异性第38页
   ·多重反应的灵敏度第38-41页
     ·多重PCR检测单一致病菌的灵敏度第39-40页
     ·多重PCR同时检测四种致病菌的灵敏度第40-41页
   ·多重PCR反应产物测序结果第41-42页
   ·人工污染样品,确定检出限第42-46页
   ·肉及肉制品中四种致病菌DNA提取方法比较结果第46-50页
   ·实际样品检测结果第50-52页
4 讨论第52-57页
   ·多重 PCR反应程序优化第52-53页
     ·靶基因及引物的确定第52-53页
     ·dNTP和Taq酶及引物添加量的确定第53页
     ·镁离子浓度和退火温度及循环数的确定第53页
   ·DNA模板的制备方法比较第53-54页
   ·与国标检测方法的比较第54-55页
   ·多重PCR反应污染的防控第55页
   ·展望第55-57页
5 结论第57-58页
参考文献第58-64页
附录第64-66页
硕士期间发表学术论文第66-67页
作者简历第67-68页
致谢第68页

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