| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-10页 |
| 1 引言 | 第10-24页 |
| ·立题背景及意义 | 第10-11页 |
| ·单增李斯特简介 | 第11-14页 |
| ·单增李斯特的生物学特征 | 第11-12页 |
| ·单增李斯特分类 | 第12页 |
| ·单增李斯特血清型分类 | 第12页 |
| ·单增李斯特的致病因子 | 第12-14页 |
| ·单增李斯特流行病学 | 第14页 |
| ·单增李斯特研究现状 | 第14-16页 |
| ·传统鉴定方法 | 第14页 |
| ·免疫学检测方法 | 第14-15页 |
| ·分子生物学检测方法 | 第15页 |
| ·环介导等温扩增（LAMP）技术 | 第15-16页 |
| ·实时荧光定量PCR 检测技术 | 第16-19页 |
| ·实时荧光定量PCR 技术的基本原理 | 第16-18页 |
| ·实时荧光定量PCR 技术的介绍 | 第18页 |
| ·实时荧光定量PCR 技术的特点 | 第18-19页 |
| ·实时荧光定量PCR 技术的应用 | 第19页 |
| ·LNA 的介绍 | 第19-22页 |
| ·LNA 的概念 | 第19-20页 |
| ·LNA 的特点 | 第20页 |
| ·LNA 的设计原则 | 第20-21页 |
| ·LNA 的应用 | 第21-22页 |
| ·研究内容 | 第22-24页 |
| ·研究目的 | 第22页 |
| ·研究内容 | 第22-23页 |
| ·技术路线 | 第23-24页 |
| 2 材料与方法 | 第24-35页 |
| ·试验材料 | 第24-27页 |
| ·试验菌株 | 第24页 |
| ·主要培养基 | 第24-25页 |
| ·质粒 | 第25页 |
| ·仪器与设备 | 第25-26页 |
| ·生化仪器与样品 | 第26-27页 |
| ·试验方法 | 第27-35页 |
| ·菌种的培养 | 第27页 |
| ·细菌DNA 模板的提取（SK1201 细菌基因组DNA 提取试剂盒） | 第27页 |
| ·片段的保守选取 | 第27-28页 |
| ·单增李斯特氏菌119 bp 基因片段的PCR 扩增 | 第28-29页 |
| ·PCR 产物胶回收纯化（按试剂盒说明书操作） | 第29-30页 |
| ·目的重组质粒（标准品）的构建 | 第30-31页 |
| ·荧光定量PCR 检测单核增生李斯特氏菌方法的建立 | 第31-32页 |
| ·猪肉中单核增生性李斯特氏菌基因组DNA 提取方法比较 | 第32-34页 |
| ·荧光定量PCR 方法灵敏度确定 | 第34页 |
| ·人工污染样品，确定检测限 | 第34-35页 |
| 3 结果与分析 | 第35-45页 |
| ·单增李斯特氏菌818 BP 基因片段的PCR 扩增 | 第35-36页 |
| ·单增李斯特氏菌119 BP 基因片段的PCR 扩增 | 第36-37页 |
| ·第二对引物扩增结果 | 第36页 |
| ·引物的特异性 | 第36-37页 |
| ·目的重组质粒的鉴定 | 第37-38页 |
| ·对目的基因PCR 产物进行T 载体克隆 | 第37页 |
| ·质粒线性化处理 | 第37-38页 |
| ·标准品OD 值结果在下文中说明 | 第38页 |
| ·荧光定量PCR 方法的建立 | 第38-45页 |
| ·用阴性反应监测荧光定量PCR 反应环境 | 第38页 |
| ·条件的优化 | 第38-39页 |
| ·标准曲线的建立 | 第39-41页 |
| ·肉中单增李斯特氏菌DNA 提取方法比较 | 第41-42页 |
| ·荧光定量PCR 方法灵敏度确定 | 第42-43页 |
| ·人工污染样品，确定检测限 | 第43-44页 |
| ·补充说明 | 第44-45页 |
| 4 讨论 | 第45-51页 |
| ·单增李斯特检测方法的确定 | 第45-46页 |
| ·靶基因的选择 | 第45页 |
| ·模板DNA 的提取 | 第45-46页 |
| ·模板DNA 的要求 | 第46页 |
| ·荧光定量PCR 技术 | 第46-49页 |
| ·试验结果的可靠性 | 第46页 |
| ·荧光定量PCR 体系 | 第46-47页 |
| ·荧光定量PCR 污染的防控 | 第47-48页 |
| ·试验中注意事项总结 | 第48-49页 |
| ·LNA 的优势 | 第49-51页 |
| 5 结论 | 第51-52页 |
| 6 参考文献 | 第52-57页 |
| 在校期间发表的论文 | 第57-58页 |
| 作者简介 | 第58-59页 |
| 致谢 | 第59-60页 |
| 附录1 HLYA 基因119 BP 产物测序彩图 | 第60页 |
