| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-7页 |
| 主要缩略词注释表 | 第8-9页 |
| 目录 | 第9-13页 |
| 第一章 绪论 | 第13-22页 |
| 1.1 概述 | 第13-14页 |
| 1.2 共轭亚油酸的生理功能 | 第14-15页 |
| 1.2.1 抗肿瘤 | 第14页 |
| 1.2.2 减少肥胖 | 第14页 |
| 1.2.3 免疫调节 | 第14-15页 |
| 1.3 共轭亚油酸的生物合成 | 第15-16页 |
| 1.4 微生物生物转化共轭亚油酸的机理研究 | 第16-19页 |
| 1.4.1 瘤胃菌生物转化共轭亚油酸 | 第16-17页 |
| 1.4.2 丙酸杆菌生物转化共轭亚油酸 | 第17-18页 |
| 1.4.3 乳酸菌生物转化共轭亚油酸 | 第18-19页 |
| 1.5 立题意义与依据 | 第19-20页 |
| 1.6 研究内容 | 第20-22页 |
| 第二章 生物转化共轭亚油酸乳酸菌的筛选 | 第22-35页 |
| 2.1 前言 | 第22页 |
| 2.2 实验材料 | 第22-23页 |
| 2.2.1 主要材料 | 第22页 |
| 2.2.2 主要设备 | 第22-23页 |
| 2.3 实验方法 | 第23页 |
| 2.3.1 乳酸菌的培养 | 第23页 |
| 2.3.2 乳酸菌样品处理及脂肪酸提取 | 第23页 |
| 2.3.3 脂肪酸甲酯化及 GC-MS 检测 | 第23页 |
| 2.4 结果与讨论 | 第23-34页 |
| 2.4.1 乳酸菌生物转化共轭亚油酸时发酵液中脂肪酸的组成 | 第24-32页 |
| 2.4.2 乳酸菌生物转化亚油酸时胞内脂肪酸的组成 | 第32-34页 |
| 2.5 本章小结 | 第34-35页 |
| 第三章 六株乳酸菌肌球蛋白交叉反应抗原蛋白的酶学功能 | 第35-49页 |
| 3.1 前言 | 第35页 |
| 3.2 材料与设备 | 第35-38页 |
| 3.2.1 菌株、质粒及培养基 | 第35-36页 |
| 3.2.2 主要设备 | 第36页 |
| 3.2.3 工具酶和试剂 | 第36-37页 |
| 3.2.4 主要试剂的配制 | 第37-38页 |
| 3.3 实验方法 | 第38-42页 |
| 3.3.1 六株乳酸菌 mcra 基因序列的综合分析 | 第38页 |
| 3.3.2 乳酸菌基因组提取、mcra 基因片段扩增及表达载体的构建 | 第38-40页 |
| 3.3.3 重组蛋白诱导表达和纯化 | 第40-41页 |
| 3.3.4 MCRA 蛋白的活性检测 | 第41-42页 |
| 3.4 结果与讨论 | 第42-48页 |
| 3.4.1 六个 MCRA 蛋白的序列及系统进化树分析 | 第42-44页 |
| 3.4.2 重组 MCRA 蛋白的表达与纯化 | 第44-45页 |
| 3.4.3 六个重组表达的 MCRA 蛋白的酶学功能 | 第45-48页 |
| 3.5 本章小结 | 第48-49页 |
| 第四章 植物乳杆菌 ZS2058 生物转化共轭亚油酸的机制 | 第49-61页 |
| 4.1 前言 | 第49页 |
| 4.2 实验材料 | 第49-50页 |
| 4.2.1 菌株、质粒及培养基 | 第49-50页 |
| 4.2.2 主要试剂 | 第50页 |
| 4.2.3 主要仪器 | 第50页 |
| 4.3 实验方法 | 第50-52页 |
| 4.3.1 植物乳杆菌 ZS2058 基因组提取、测序、拼接及注释 | 第50页 |
| 4.3.2 表达载体 pET28a-mcra，pET28a-dh，pET28a-dc 的构建 | 第50-51页 |
| 4.3.3 重组蛋白的诱导表达、SDS-PAGE 及 Western blot 检测 | 第51页 |
| 4.3.4 重组蛋白的活性检验 | 第51-52页 |
| 4.3.5 脂肪酸分析 | 第52页 |
| 4.4 结果与讨论 | 第52-59页 |
| 4.4.1 植物乳杆菌 ZS2058 生物转化共轭亚油酸及中间产物的积累 | 第52-54页 |
| 4.4.2 植物乳杆菌 ZS2058 基因组测序结果 | 第54-56页 |
| 4.4.3 用于表达植物乳杆菌 ZS2058 亚油酸异构酶系的重组菌株构建及诱导表达 | 第56-57页 |
| 4.4.4 重组表达植物乳杆菌 ZS2058 亚油酸异构酶系各组成的功能 | 第57-59页 |
| 4.5 本章小结 | 第59-61页 |
| 第五章 植物乳杆菌 ST-III 生物转化共轭亚油酸的机制 | 第61-71页 |
| 5.1 前言 | 第61页 |
| 5.2 菌株、质粒及培养基 | 第61-62页 |
| 5.2.1 主要试剂 | 第61页 |
| 5.2.2 主要仪器 | 第61-62页 |
| 5.3 实验方法 | 第62-63页 |
| 5.3.1 植物乳杆菌 ST-III 与植物乳杆菌 ZS2058 全基因组比较 | 第62页 |
| 5.3.2 构建用于重组表达植物乳杆菌 ST-III 亚油酸异构酶系的载体 | 第62页 |
| 5.3.3 重组蛋白的诱导表达、SDS-PAGE 及 Western blot 检测 | 第62-63页 |
| 5.3.4 重组蛋白的活性检验、脂肪酸提取、甲酯化及 GC-MS 检测 | 第63页 |
| 5.3.5 脂肪酸提取、甲酯化及 GC-MS 检测 | 第63页 |
| 5.4 结果与讨论 | 第63-70页 |
| 5.4.1 植物乳杆菌 ST-III 与植物乳杆菌 ZS2058 全基因组比较 | 第63-65页 |
| 5.4.2 植物乳杆菌 ST-III 代谢亚油酸后的脂肪酸组成 | 第65-66页 |
| 5.4.3 用于表达植物乳杆菌 ST-III 亚油酸异构酶系的重组菌株构建及诱导表达 | 第66-67页 |
| 5.4.4 重组表达植物乳杆菌 ST-III 亚油酸异构酶系各组成的功能 | 第67-70页 |
| 5.5 本章小结 | 第70-71页 |
| 第六章 不同种属乳酸菌生物转化共轭亚油酸差异的原因 | 第71-87页 |
| 6.1 前言 | 第71页 |
| 6.2 实验材料 | 第71-72页 |
| 6.2.1 菌株及培养基 | 第71-72页 |
| 6.2.2 主要试剂 | 第72页 |
| 6.2.3 主要仪器 | 第72页 |
| 6.3 实验方法 | 第72-75页 |
| 6.3.1 乳酸菌中亚油酸异构酶系基因组成的生物信息学分析 | 第72页 |
| 6.3.2 不同乳酸菌在不同生长时期脂肪酸组成分析 | 第72-73页 |
| 6.3.3 不同乳酸菌在不同生长时期亚油酸异构酶系各组分转录水平分析 | 第73-75页 |
| 6.4 结果与讨论 | 第75-86页 |
| 6.4.1 亚油酸异构酶系三个基因组分在乳酸菌中的分布 | 第75-79页 |
| 6.4.2 七株乳酸菌生物转化共轭亚油酸差异的内在原因 | 第79-86页 |
| 6.5 本章小结 | 第86-87页 |
| 主要结论与展望 | 第87-88页 |
| 论文创新点 | 第88-89页 |
| 致谢 | 第89-90页 |
| 参考文献 | 第90-101页 |
| 附录 I: 用于生物信息学分析的乳酸菌 | 第101-104页 |
| 附录 II: 作者在攻读博士学位期间发表的论文 | 第104页 |
