| 摘要 | 第11-14页 |
| Abstract | 第14-17页 |
| 缩略语表 | 第18-21页 |
| 第一章 绪论 | 第21-36页 |
| 1 问题的由来 | 第21-25页 |
| 2 蛋白质淀粉样纤维化聚集机制和细胞毒性 | 第25-28页 |
| 2.1 蛋白质淀粉样纤维化聚集机制 | 第25-27页 |
| 2.2 淀粉样纤维的细胞毒性 | 第27-28页 |
| 3 淀粉样纤维化聚集研究模型 | 第28-32页 |
| 3.1 胰岛素蛋白 | 第28-30页 |
| 3.2 Aβ淀粉样多肽 | 第30-32页 |
| 4 多酚类化合物与淀粉样蛋白的相互作用 | 第32-34页 |
| 5 本论文研究的目的意义及主要内容 | 第34-36页 |
| 5.1 本论文研究的目的和意义 | 第34-35页 |
| 5.2 本论文研究的主要内容 | 第35-36页 |
| 第二章 EGCG和A型EGCG二聚体对牛胰岛素淀粉样纤维形成抑制作用的比较研究 | 第36-63页 |
| 前言 | 第36-37页 |
| 1 材料与方法 | 第37-41页 |
| 1.1 实验材料和仪器设备 | 第37-38页 |
| 1.1.1 实验材料 | 第37页 |
| 1.1.2 主要试剂 | 第37-38页 |
| 1.1.3 主要仪器 | 第38页 |
| 1.2 实验方法 | 第38-41页 |
| 1.2.1 A型连接的EGCG二聚体的制备 | 第38-39页 |
| 1.2.2 牛胰岛素淀粉样纤维的制备 | 第39页 |
| 1.2.3 Thioflavin T(ThT)荧光光谱分析 | 第39页 |
| 1.2.4 动态光散射粒度分析 | 第39-40页 |
| 1.2.5 透射电子显微镜分析 | 第40页 |
| 1.2.6 1-anilinonaphthalene-8-sulfonic(ANS)荧光光谱分析 | 第40页 |
| 1.2.7 FTIR光谱分析 | 第40页 |
| 1.2.8 圆二色光谱分析 | 第40页 |
| 1.2.9 数据统计分析 | 第40-41页 |
| 2 结果与分析 | 第41-58页 |
| 2.1 ThT荧光检测两种多酚对牛胰岛素蛋白淀粉样纤维化聚集的影响 | 第41-42页 |
| 2.2 动态光散射检测两种多酚对牛胰岛素蛋白聚集尺度的影响 | 第42-43页 |
| 2.3 透射电子显微镜检测两种多酚对牛胰岛素淀粉样纤维形态的影响 | 第43-46页 |
| 2.4 ANS荧光检测两种多酚对牛胰岛素淀粉样纤维表面疏水性的影响 | 第46-47页 |
| 2.5 FTIR和圆二色光谱检测两种多酚对牛胰岛素淀粉样纤维二级结构的影响 | 第47-50页 |
| 2.6 不同时间段加入EGCG和A型EGCG二聚体对牛胰岛素淀粉样纤维形成的抑制作用研究 | 第50-58页 |
| 2.6.1 ThT荧光检测两种多酚的加入时间对牛胰岛素淀粉样纤维抑制效果的影响 | 第50-51页 |
| 2.6.2 ANS荧光检测两种多酚的加入时间对牛胰岛素淀粉样纤维表面疏水性的影响 | 第51-54页 |
| 2.6.3 FTIR光谱检测两种多酚的加入时间对牛胰岛素淀粉样纤维二级结构的影响 | 第54-55页 |
| 2.6.4 透射电子显微镜检测两种多酚的加入时间对牛胰岛素淀粉样纤维形态的影响 | 第55-58页 |
| 3 讨论 | 第58-61页 |
| 4 小结 | 第61-63页 |
| 第三章 EGCG和A型EGCG二聚体对成熟牛胰岛素淀粉样纤维解聚作用的比较研究 | 第63-81页 |
| 前言 | 第63-64页 |
| 1 材料与方法 | 第64-67页 |
| 1.1 实验材料和仪器设备 | 第64-66页 |
| 1.1.1 实验材料 | 第64页 |
| 1.1.2 主要试剂 | 第64-65页 |
| 1.1.3 主要仪器 | 第65-66页 |
| 1.2 实验方法 | 第66-67页 |
| 1.2.1 牛胰岛素淀粉样纤维的制备 | 第66页 |
| 1.2.2 Thioflavin T(ThT)荧光光谱分析 | 第66页 |
| 1.2.3 1-anilinonaphthalene-8-sulfonic(ANS)荧光光谱分析 | 第66页 |
| 1.2.4 FTIR光谱分析 | 第66页 |
| 1.2.5 Congored光谱分析 | 第66页 |
| 1.2.6 动态光散射粒度分析 | 第66页 |
| 1.2.7 透射电子显微镜分析 | 第66页 |
| 1.2.8 SDS-PAGE分析 | 第66-67页 |
| 1.2.9 Bradford法测定溶液上清液蛋白含量 | 第67页 |
| 1.2.10 数据统计分析 | 第67页 |
| 2 结果与分析 | 第67-78页 |
| 2.1 ThT荧光检测两种多酚对成熟牛胰岛素淀粉样纤维的解聚效果 | 第67-69页 |
| 2.2 ANS荧光检测两种多酚对成熟牛胰岛素淀粉样纤维表面疏水性的影响 | 第69-70页 |
| 2.3 Congo red吸收光谱检测两种多酚与成熟牛胰岛素淀粉样纤维共同孵育后淀粉样纤维含量的变化 | 第70-72页 |
| 2.4 动态光散射检测两种多酚对成熟牛胰岛素淀粉样纤维粒径的影响. | 第72-73页 |
| 2.5 透射电子显微镜检测两种多酚对成熟牛胰岛素淀粉样纤维形态的影响 | 第73-75页 |
| 2.6 SDS-PAGE检测成熟牛胰岛素淀粉样纤维解聚后形成的产物 | 第75-77页 |
| 2.7 Bradford法检测成熟牛胰岛素淀粉样纤维解聚后上清液中可溶性蛋白的含量 | 第77-78页 |
| 3 讨论 | 第78-80页 |
| 4 小结 | 第80-81页 |
| 第四章 EGCG和A型EGCG二聚体对由牛胰岛素淀粉样纤维诱导形成的神经细胞毒性的抑制作用及机制研究 | 第81-109页 |
| 前言 | 第81-82页 |
| 1 材料与方法 | 第82-89页 |
| 1.1 实验材料和仪器设备 | 第82-84页 |
| 1.1.1 实验材料 | 第82页 |
| 1.1.2 主要试剂 | 第82-83页 |
| 1.1.3 主要仪器 | 第83-84页 |
| 1.2 实验方法 | 第84-89页 |
| 1.2.1 细胞培养 | 第84-85页 |
| 1.2.2 牛胰岛素淀粉样纤维诱导PC12细胞损伤与凋亡模型的建立 | 第85页 |
| 1.2.2.1 牛胰岛素淀粉样纤维储备液的制备 | 第85页 |
| 1.2.2.2 MTT法检测细胞存活率 | 第85页 |
| 1.2.3 EGCG与A型EGCG二聚体对牛胰岛素淀粉样纤维诱导神经细胞毒性的保护作用及机理 | 第85-89页 |
| 1.2.3.1 确定EGCG、A型EGCG二聚体的给药剂量 | 第85页 |
| 1.2.3.2 实验分组 | 第85-86页 |
| 1.2.3.3 MTT法检测细胞存活率 | 第86页 |
| 1.2.3.4 Hoechst33258细胞核染色 | 第86页 |
| 1.2.3.5 细胞内乳酸脱氢酶(LDH)释放检测 | 第86页 |
| 1.2.3.6 细胞内Ca~(2+)离子水平检测 | 第86-87页 |
| 1.2.3.7 细胞内活性氧(ROS)水平检测 | 第87页 |
| 1.2.3.8 细胞内一氧化氮(NO)水平检测 | 第87页 |
| 1.2.3.9 细胞线粒体膜电位(MMP)检测 | 第87-88页 |
| 1.2.3.10 细胞抗氧化防御酶(CAT,SOD,GSH-Px)活性检测 | 第88页 |
| 1.2.3.11 细胞内凋亡诱导因子(AIF)、核酸内切酶G(EndoG)表达水平检测 | 第88-89页 |
| 1.2.4 数据统计分析 | 第89页 |
| 2 结果与分析 | 第89-105页 |
| 2.1 牛胰岛素淀粉样纤维诱导PC12细胞损伤与凋亡模型的建立 | 第89-90页 |
| 2.2 两种多酚对牛胰岛素淀粉样纤维诱导神经细胞毒性的保护作用 | 第90-95页 |
| 2.2.1 MTT法检测EGCG和A型EGCG二聚体对PC12细胞存活率的影响 | 第90-92页 |
| 2.2.2 EGCG和A型EGCG二聚体对牛胰岛素淀粉样纤维诱导的PC12细胞毒性的抑制作用 | 第92-94页 |
| 2.2.3 EGCG和A型EGCG二聚体对PC12细胞膜完整性的影响 | 第94-95页 |
| 2.3 两种多酚对牛胰岛素淀粉样纤维诱导神经细胞毒性的保护机理 | 第95-105页 |
| 2.3.1 EGCG和A型EGCG二聚体对PC12细胞内Ca~(2+)离子浓度的影响 | 第95-97页 |
| 2.3.2 EGCG和A型EGCG二聚体对PC12细胞内活性氧(ROS)和和一氧化氮(NO)水平的影响 | 第97-99页 |
| 2.3.3 EGCG和A型EGCG二聚体对PC12细胞线粒体膜电位(MMP)的影响 | 第99-101页 |
| 2.3.4 EGCG和A型EGCG二聚体对PC12细胞内抗氧化防御酶活性的影响 | 第101-103页 |
| 2.3.5 EGCG和A型EGCG二聚体对PC12细胞内凋亡诱导因子(AIF)、核酸内切酶G(EndoG)表达水平的影响 | 第103-105页 |
| 3 讨论 | 第105-107页 |
| 4 小结 | 第107-109页 |
| 第五章 以Aβ_(40)淀粉样多肽为模型研究A型EGCG二聚体强淀粉样聚集抑制作用的机理 | 第109-147页 |
| 前言 | 第109-110页 |
| 1 材料与方法 | 第110-116页 |
| 1.1 实验材料和仪器设备 | 第110-112页 |
| 1.1.1 实验材料 | 第110页 |
| 1.1.2 主要试剂 | 第110-111页 |
| 1.1.3 主要仪器 | 第111-112页 |
| 1.2 实验方法 | 第112-116页 |
| 1.2.1 Aβ_(40)预处理 | 第112页 |
| 1.2.2 Aβ_(40)淀粉样纤维的制备 | 第112页 |
| 1.2.3 Thioflavin T(ThT)荧光光谱分析 | 第112-113页 |
| 1.2.4 1-anilinonaphthalene-8-sulfonic(ANS)荧光光谱分析 | 第113页 |
| 1.2.5 透射电子显微镜分析 | 第113页 |
| 1.2.6 MTT法检测Aβ_(40)寡聚体和成熟淀粉样纤维细胞毒性差异 | 第113页 |
| 1.2.6.1 细胞培养 | 第113页 |
| 1.2.6.2 Aβ_(40)寡聚体和淀粉样纤维的制备 | 第113页 |
| 1.2.6.3 MTT法检测细胞存活率 | 第113页 |
| 1.2.7 未修饰蛋白光催化交联法 | 第113-114页 |
| 1.2.8 EGCG和A型EGCG二聚体与Aβ_(40)作用的荧光光谱测定 | 第114页 |
| 1.2.9 ESI-MS检测EGCG和A型EGCG二聚体与Aβ_(40)的非共价相互作用 | 第114页 |
| 1.2.10 NMR检测EGCG和A型EGCG二聚体与Aβ_(40)的相互作用位点 | 第114-115页 |
| 1.2.11 EGCG和A型EGCG二聚体与Aβ_(40)的分子对接研究 | 第115页 |
| 1.2.12 多酚类化合物结构基团和分子尺寸对其抑制Aβ_(40)淀粉样纤维形成的影响 | 第115-116页 |
| 1.2.12.1 A型ECG二聚体、ECG、EGC和EC抑制Aβ_(40)淀粉样纤维化的效果 | 第115页 |
| 1.2.12.2 多酚类化合物分子尺寸和物化性质与其抑制Aβ_(40)淀粉样纤维形成能力强弱的关系 | 第115-116页 |
| 1.2.13 数据统计分析 | 第116页 |
| 2 结果与分析 | 第116-144页 |
| 2.1 ThT荧光检测两种多酚对Aβ_(40)多肽淀粉样纤维化聚集的影响 | 第116-117页 |
| 2.2 ANS荧光检测两种多酚对Aβ_(40)淀粉样纤维表面疏水性的影响 | 第117-118页 |
| 2.3 透射电子显微镜检测两种多酚对Aβ_(40)淀粉样纤维形态的影响 | 第118-120页 |
| 2.4 MTT法检测两种多酚对Aβ_(40)寡聚体和成熟淀粉样纤维细胞毒性的抑 制作用 | 第120-123页 |
| 2.5 未修饰蛋白光催化交联法检测两种多酚对Aβ_(40)寡聚体形成的抑制作用 | 第123-125页 |
| 2.6 荧光淬灭法检测两种多酚与Aβ_(40)多肽之间的相互作用情况 | 第125-130页 |
| 2.6.1 两种多酚与Aβ_(40)多肽相互作用的荧光淬灭光谱 | 第125-127页 |
| 2.6.2 两种多酚与Aβ_(40)多肽相互作用的淬灭机理 | 第127-128页 |
| 2.6.3 两种多酚与Aβ_(40)多肽相互作用的结合常数和结合位点数 | 第128页 |
| 2.6.4 两种多酚与Aβ_(40)多肽相互作用的热力学参数和作用力类型 | 第128-130页 |
| 2.7 ESI-MS检测两种多酚与Aβ_(40)多肽之间的非共价结合情况 | 第130-132页 |
| 2.8 NMR检测两种多酚与Aβ_(40)多肽之间的相互作用位点 | 第132-136页 |
| 2.9 两种多酚与Aβ_(40)多肽的分子对接研究 | 第136-139页 |
| 2.10 多酚类化合物结构基团和分子尺寸对其抑制Aβ_(40)淀粉样纤维形成的影响 | 第139-144页 |
| 2.10.1 A型ECG二聚体、ECG、EGC和EC对Aβ_(40)多肽淀粉样纤维化的影响 | 第139-142页 |
| 2.10.2 多酚类化合物分子尺寸和物化性质与其抑制Aβ_(40)淀粉样纤维形成能力强弱的关系 | 第142-144页 |
| 3 讨论 | 第144-146页 |
| 4 小结 | 第146-147页 |
| 第六章 结论与展望 | 第147-149页 |
| 1 结论 | 第147-148页 |
| 2 展望 | 第148-149页 |
| 参考文献 | 第149-181页 |
| 在读期间发表论文 | 第181-183页 |
| 致谢 | 第183-184页 |
