| 摘要 | 第9-11页 |
| ABSTRACT | 第11-12页 |
| 致谢 | 第13-20页 |
| 第一章 绪论 | 第20-53页 |
| 1.1 木质纤维素的研究进展 | 第20-25页 |
| 1.1.1 木质纤维素的生物降解利用概况 | 第20-22页 |
| 1.1.2 木糖的微生物利用 | 第22-25页 |
| 1.2 木糖的代谢途径 | 第25-35页 |
| 1.2.1 原核微生物以及真核微生物的木糖代谢途径 | 第25-26页 |
| 1.2.2 米根霉木糖代谢途径 | 第26-27页 |
| 1.2.3 木糖代谢工程改造的研究进展 | 第27-35页 |
| 1.3 米根霉遗传改造 | 第35-39页 |
| 1.3.1 丝状真菌遗传转化体系 | 第35-38页 |
| 1.3.2 米根霉现存的遗传转化方法 | 第38-39页 |
| 1.4 需要解决的科学问题 | 第39-40页 |
| 1.5 本文的研究内容 | 第40-41页 |
| 1.6 研究课题来源 | 第41-42页 |
| 参考文献 | 第42-53页 |
| 第二章 米根霉AS 3.819代谢木糖能力研究 | 第53-72页 |
| 引言 | 第53页 |
| 2.1 材料与方法 | 第53-59页 |
| 2.1.1 材料 | 第53-55页 |
| 2.1.2 实验方法 | 第55-59页 |
| 2.2 结果与分析 | 第59-66页 |
| 2.2.1 米根霉在不同碳源条件下木糖代谢相关酶活特性 | 第59-62页 |
| 2.2.2 米根霉分别以葡萄糖、木糖为碳源条件下的发酵特性 | 第62-63页 |
| 2.2.3 米根霉在葡萄糖、木糖的混合糖为碳源条件下的发酵特性 | 第63-64页 |
| 2.2.4 米根霉利用木糖以及木糖醇的发酵情况 | 第64-66页 |
| 2.3 讨论 | 第66-68页 |
| 2.4 本章小结 | 第68-69页 |
| 参考文献 | 第69-72页 |
| 第三章 米根霉AS 3.819基因启动子片段的克隆及功能鉴定 | 第72-93页 |
| 引言 | 第72页 |
| 3.1 材料与方法 | 第72-76页 |
| 3.1.1 材料 | 第72-75页 |
| 3.1.2 方法 | 第75-76页 |
| 3.2 结果与分析 | 第76-87页 |
| 3.2.1 基因启动子片段克隆 | 第76-77页 |
| 3.2.2 启动子探针质粒的构建与鉴定 | 第77-78页 |
| 3.2.3 各启动子片段在大肠杆菌E.coil JM109中的启动功能 | 第78-83页 |
| 3.2.4 启动子在不同碳源下的启动活性 | 第83-86页 |
| 3.2.5 ldhA基因启动子片段长度对于启动活性的影响 | 第86-87页 |
| 3.3 讨论 | 第87-89页 |
| 3.4 本章小结 | 第89-90页 |
| 参考文献 | 第90-93页 |
| 第四章 基于潮霉素B抗性选择标记的米根霉遗传转化方法的建立 | 第93-115页 |
| 引言 | 第93页 |
| 4.1 材料与方法 | 第93-101页 |
| 4.1.1 材料 | 第93-97页 |
| 4.1.2 方法 | 第97-101页 |
| 4.2 结果与分析 | 第101-110页 |
| 4.2.1 重组基因P_(amyA)-hph-T_(pdcA)及P_(pdcA)-ldhA-T_(pdcA)的合成 | 第101-102页 |
| 4.2.2 重组载体pBS-hygro-ldhA的构建 | 第102页 |
| 4.2.3 多拷贝表达ldhA基因的重组米根霉的构建 | 第102-103页 |
| 4.2.4 原生质体转化条件研究 | 第103-105页 |
| 4.2.5 萌发孢子电转化条件研究 | 第105-106页 |
| 4.2.6 添加TritonX-100及脱氧胆酸钠对筛选效果的影响 | 第106-107页 |
| 4.2.7 不同转化方法的转化效率及转化子稳定性 | 第107-108页 |
| 4.2.8 转化子稳定性与质粒拷贝数的关系 | 第108-110页 |
| 4.3 讨论 | 第110-111页 |
| 4.4 本章小结 | 第111-113页 |
| 参考文献 | 第113-115页 |
| 第五章 米根霉AS 3.819木糖还原酶基因克隆、异源表达以及酶学性质研究 | 第115-155页 |
| 引言 | 第115页 |
| 5.1 材料与方法 | 第115-127页 |
| 5.1.1 材料 | 第115-119页 |
| 5.1.2 实验方法 | 第119-127页 |
| 5.2 结果与分析 | 第127-148页 |
| 5.2.1 木糖还原酶基因Roxr的扩增、序列测定以及结构预测分析 | 第127-133页 |
| 5.2.2 毕赤酵母重组表达载体pPic9K-xr构建 | 第133-134页 |
| 5.2.3 重组毕赤酵母构建以及鉴定 | 第134-135页 |
| 5.2.4 重组蛋白分泌诱导表达、酶活鉴定以及纯化 | 第135-139页 |
| 5.2.5 重组RoXR蛋白基本酶学性质 | 第139-143页 |
| 5.2.6 重组RoXR~(T226E)和RoXR~(V274N)的辅酶偏好性变化 | 第143-148页 |
| 5.3 讨论 | 第148-149页 |
| 5.4 本章小结 | 第149-151页 |
| 参考文献 | 第151-155页 |
| 第六章 多拷贝表达木糖还原酶基因对米根霉AS 3.819代谢木糖能力的影响 | 第155-182页 |
| 引言 | 第155页 |
| 6.1 材料与方法 | 第155-162页 |
| 6.1.1 材料 | 第155-159页 |
| 6.1.2 实验方法 | 第159-162页 |
| 6.2 结果与分析 | 第162-176页 |
| 6.2.1 重组基因融合表达盒的合成 | 第162-163页 |
| 6.2.2 整合表达载体pBS-hygro-xr的构建 | 第163页 |
| 6.2.3 重组米根霉构建以及转化子鉴定 | 第163-164页 |
| 6.2.4 转化子Roxr基因表达情况的变化 | 第164-167页 |
| 6.2.5 多拷贝表达Roxr转化子发酵木糖产酸情况 | 第167-170页 |
| 6.2.6 多拷贝表达Roxr转化子五六碳糖共发酵情况 | 第170-173页 |
| 6.2.7 转化子五六碳糖共发酵性能的进一步研究 | 第173-176页 |
| 6.3 讨论 | 第176-178页 |
| 6.4 本章小结 | 第178-180页 |
| 参考文献 | 第180-182页 |
| 第七章 结论与展望 | 第182-185页 |
| 7.1 主要结论 | 第182-183页 |
| 7.2 论文创新点 | 第183页 |
| 7.3 展望 | 第183-185页 |
| 攻读博士学位期间发表论文情况 | 第185页 |
