| 致谢 | 第4-10页 |
| 中文摘要 | 第10-12页 |
| Abstract | 第12-14页 |
| 第一章 文献综述 | 第15-25页 |
| 1 EMCV概述 | 第15-23页 |
| 1.1 病原学 | 第15页 |
| 1.2 基因组特征与蛋白构成 | 第15-17页 |
| 1.3 流行病学 | 第17-18页 |
| 1.4 致病性与公共卫生意义 | 第18页 |
| 1.5 致病机制与影响因素 | 第18-20页 |
| 1.6 诊断方法 | 第20-22页 |
| 1.7 疾病防控 | 第22-23页 |
| 2 本文研究目的和意义 | 第23-25页 |
| 第二章 不同动物源EMCV河南流行株的分离和鉴定 | 第25-32页 |
| 1 引言 | 第25页 |
| 2 材料与方法 | 第25-27页 |
| 2.1 病料采集 | 第25页 |
| 2.2 参考毒株和细胞 | 第25页 |
| 2.3 主要试剂和仪器 | 第25页 |
| 2.4 病毒分离和纯化 | 第25-26页 |
| 2.5 TCID_(50)测定 | 第26页 |
| 2.6 病毒理化特性鉴定 | 第26页 |
| 2.7 间接免疫荧光试验鉴定 | 第26页 |
| 2.8 RT-PCR鉴定 | 第26-27页 |
| 3 结果与分析 | 第27-30页 |
| 3.1 分离物的获得与命名 | 第27-28页 |
| 3.2 病毒形态及理化特性鉴定 | 第28-30页 |
| 3.3 间接免疫荧光抗体检测分离物为EMCV阳性 | 第30页 |
| 3.4 RT-PCR检测分离物为EMCV阳性 | 第30页 |
| 4 结论与讨论 | 第30-32页 |
| 第三章 不同动物源EMCV河南流行株的全基因组测序和分析 | 第32-47页 |
| 1 引言 | 第32页 |
| 2 材料与方法 | 第32-34页 |
| 2.1 病毒 | 第32页 |
| 2.2 主要试剂、仪器与细胞株 | 第32页 |
| 2.3 引物设计 | 第32-33页 |
| 2.4 病毒总RNA提取 | 第33页 |
| 2.5 全长基因组的RT-PCR扩增和测序 | 第33页 |
| 2.6 同源性比较与系统进化分析 | 第33-34页 |
| 3 结果与分析 | 第34-45页 |
| 3.1 流行株病毒的基因组序列及结构 | 第34-35页 |
| 3.2 不同分离株EMCV全基因组及各基因片段的同源性 | 第35-37页 |
| 3.3 不同毒株的系统进化关系 | 第37-45页 |
| 4 结论与讨论 | 第45-47页 |
| 第四章 地方土猪源EMCV SYBR Green I实时荧光定量PCR检测方法的建立及应用 | 第47-54页 |
| 1 引言 | 第47页 |
| 2 材料与方法 | 第47-48页 |
| 2.1 毒株 | 第47页 |
| 2.2 主要试剂和仪器 | 第47页 |
| 2.3 标准品制备 | 第47-48页 |
| 2.4 SYBR Green I real-time PCR方法建立 | 第48页 |
| 3 结果与分析 | 第48-52页 |
| 3.1 RT-PCR及质粒标准品 | 第48页 |
| 3.2 质粒标准品质量浓度 | 第48-49页 |
| 3.3 最佳反应条件 | 第49页 |
| 3.4 标准曲线 | 第49-50页 |
| 3.5 特异性 | 第50页 |
| 3.6 敏感性 | 第50-51页 |
| 3.7 可重复性 | 第51-52页 |
| 3.8 临床初步应用 | 第52页 |
| 4 结论与讨论 | 第52-54页 |
| 第五章 家养野猪源EMCV VP1基因的原核表达及其间接ELISA方法的建立和应用 | 第54-66页 |
| 1 引言 | 第54页 |
| 2 材料与方法 | 第54-57页 |
| 2.1 病毒、感受态细胞和表达质粒 | 第54页 |
| 2.2 血清 | 第54页 |
| 2.3 主要试剂与仪器 | 第54-55页 |
| 2.4 VP1基因的原核表达 | 第55-56页 |
| 2.5 间接ELISA方法最佳反应条件优化 | 第56-57页 |
| 2.6 EMC血清流行病学调查 | 第57页 |
| 3 结果与分析 | 第57-64页 |
| 3.1 获得原核表达抗原 | 第57-60页 |
| 3.2 间接ELISA反应条件 | 第60-63页 |
| 3.3 EMC血清流行病学 | 第63-64页 |
| 4 结论与讨论 | 第64-66页 |
| 第六章 PCV-2 所致免疫抑制条件下继发感染EMCV对仔猪的影响 | 第66-76页 |
| 1 引言 | 第66页 |
| 2 材料与方法 | 第66-67页 |
| 2.1 毒株和试验动物 | 第66页 |
| 2.2 主要试剂和仪器 | 第66页 |
| 2.3 仔猪攻毒试验 | 第66-67页 |
| 2.4 组织病理学检测 | 第67页 |
| 2.5 淋巴细胞比率测定 | 第67页 |
| 2.6 EMCV中和抗体测定 | 第67页 |
| 2.7 EMCV排毒情况测定 | 第67页 |
| 3 结果与分析 | 第67-74页 |
| 3.1 仔猪攻毒试验 | 第67-70页 |
| 3.2 体温和日增重变化 | 第70-72页 |
| 3.3 组织病理学检测 | 第72-73页 |
| 3.4 淋巴细胞比率测定 | 第73-74页 |
| 3.5 EMCV中和抗体测定 | 第74页 |
| 3.6 EMCV排毒情况测定 | 第74页 |
| 4 结论与讨论 | 第74-76页 |
| 第七章 EMCV/PCV-2 二联灭活疫苗的研制和免疫效力研究 | 第76-87页 |
| 1 引言 | 第76页 |
| 2 材料与方法 | 第76-80页 |
| 2.1 病毒、细胞和试验动物 | 第76页 |
| 2.2 主要试剂和仪器 | 第76页 |
| 2.3 病毒液制备 | 第76-77页 |
| 2.4 EMCV种毒培养条件研究 | 第77页 |
| 2.5 种毒灭活和灭活效果检验 | 第77页 |
| 2.6 病毒液浓缩 | 第77页 |
| 2.7 灭活疫苗制备 | 第77-78页 |
| 2.8 疫苗检验 | 第78页 |
| 2.9 小鼠免疫效力检验 | 第78-79页 |
| 2.10 仔猪免疫效力检验 | 第79-80页 |
| 3 结果与分析 | 第80-86页 |
| 3.1 EMCV种毒培养条件 | 第80-81页 |
| 3.2 病毒液灭活效果检验 | 第81-82页 |
| 3.3 疫苗检验 | 第82页 |
| 3.4 小鼠免疫效力检验 | 第82-85页 |
| 3.5 仔猪免疫效力检验 | 第85-86页 |
| 4 结论与讨论 | 第86-87页 |
| 第八章 EMCV VP1基因在杆状病毒中的表达及其免疫原性研究 | 第87-96页 |
| 1 引言 | 第87页 |
| 2 材料与方法 | 第87-89页 |
| 2.1 细胞、质粒、菌种和病毒 | 第87页 |
| 2.2 主要试剂 | 第87页 |
| 2.3 试验动物 | 第87页 |
| 2.4 重组转移质粒p Fast Bac TM1-VP1的构建 | 第87页 |
| 2.5 重组穿梭载体Bacmid-VP1构建 | 第87-88页 |
| 2.6 重组杆状病毒获得 | 第88页 |
| 2.7 SDS-PAGE鉴定 | 第88页 |
| 2.8 蛋白纯化和Western blotting分析 | 第88页 |
| 2.9 免疫原性研究 | 第88-89页 |
| 3 结果与分析 | 第89-95页 |
| 3.1 重组转移质粒p Fast Bac TM1-VP1构建 | 第89-92页 |
| 3.2 Bacmid-VP1构建及重组杆状病毒获得 | 第92页 |
| 3.3 重组蛋白SDS-PAGE鉴定、纯化及Western blotting分析 | 第92-94页 |
| 3.4 小鼠免疫试验 | 第94-95页 |
| 4 结论与讨论 | 第95-96页 |
| 结论 | 第96-97页 |
| 参考文献 | 第97-108页 |
| 作者简介及博士期间所获科研成果及奖励 | 第108-109页 |
| 本研究得到的项目资助 | 第109页 |
