| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 1 引言 | 第10-20页 |
| 1.1 木瓜蛋白酶概述 | 第10-12页 |
| 1.1.1 木瓜蛋白酶来源、组成结构及性质 | 第10页 |
| 1.1.2 木瓜蛋白酶的应用研究进展 | 第10-11页 |
| 1.1.3 木瓜蛋白酶分离纯化方法研究进展 | 第11-12页 |
| 1.2 金属螯合亲和双水相技术研究进展 | 第12-17页 |
| 1.2.1 双水相技术研究应用概述 | 第12-13页 |
| 1.2.2 亲和分配技术 | 第13页 |
| 1.2.3 金属螯合亲和双水相及其作用机理 | 第13-14页 |
| 1.2.4 金属螯合亲和成相剂制备研究进展 | 第14-16页 |
| 1.2.5 金属螯合亲和双水相的应用 | 第16-17页 |
| 1.3 双水相萃取中蛋白质分配模型研究进展 | 第17-19页 |
| 1.3.1 无亲和配基双水相分配模型研究进展 | 第17页 |
| 1.3.2 亲和分配模型研究进展 | 第17-19页 |
| 1.4 本课题研究的内容及目的意义 | 第19-20页 |
| 2 材料与方法 | 第20-29页 |
| 2.1 实验主要试剂材料 | 第20页 |
| 2.2 实验主要仪器设备 | 第20页 |
| 2.3 环氧基含量检测方法 | 第20页 |
| 2.4 金属离子含量测定方法 | 第20-21页 |
| 2.5 硫酸铵质量分数的测定 | 第21页 |
| 2.6 聚乙二醇质量分数的测定 | 第21-22页 |
| 2.7 木瓜蛋白酶活性测定方法 | 第22页 |
| 2.8 蛋白质浓度测定方法 | 第22-23页 |
| 2.9 金属螯合亲和成相剂制备 | 第23-24页 |
| 2.9.1 金属螯合亲和成相剂制备方法 | 第23页 |
| 2.9.2 PEG与环氧氯丙烷(ECH)摩尔配比对PEG-环氧得率的影响 | 第23页 |
| 2.9.3 三氟化硼添加量及反应时间对PEG-环氧得率的影响 | 第23-24页 |
| 2.9.4 NaOH溶液添加量和反应时间对环氧得率的影响 | 第24页 |
| 2.9.5 反应时间对IDA螯合量的影响 | 第24页 |
| 2.9.6 反应温度对IDA螯合量的影响 | 第24页 |
| 2.9.7 金属离子种类对PEG-IDA结合金属离子的影响 | 第24页 |
| 2.10 木瓜蛋白酶在亲和双水相中分配行为研究 | 第24-26页 |
| 2.10.1 双水相相图的制备 | 第24-25页 |
| 2.10.2 pH对木瓜蛋白酶活性的影响 | 第25页 |
| 2.10.3 PEG和(NH_4)_2SO_4对木瓜蛋白酶活性的影响 | 第25页 |
| 2.10.4 金属螫合亲和成相剂对木瓜蛋白酶活性的影响 | 第25页 |
| 2.10.5 亲和双水相萃取木瓜蛋白酶 | 第25页 |
| 2.10.6 (NH_4)_2SO_4质量分数对酶分配行为的影响 | 第25页 |
| 2.10.7 PEG4000质量分数对酶分配行为的影响 | 第25-26页 |
| 2.10.8 不同金属螯合亲和成相剂取代PEG的量对分配行为的影响 | 第26页 |
| 2.10.9 响应面实验设计 | 第26页 |
| 2.11 亲和萃取的木瓜蛋白酶结构表征 | 第26页 |
| 2.11.1 UV-vis光谱扫描 | 第26页 |
| 2.11.2 傅里叶红外变化光谱(FT-IR)检测 | 第26页 |
| 2.12 亲和双水相萃取木瓜蛋白酶模型的建立 | 第26-29页 |
| 2.12.1 传统双水相萃取木瓜蛋白酶模型的建立 | 第27页 |
| 2.12.2 亲和双水相萃取木瓜蛋白酶模型的建立 | 第27-29页 |
| 3 结果与分析 | 第29-48页 |
| 3.1 酪氨酸标准曲线 | 第29页 |
| 3.2 牛血清蛋白标准曲线 | 第29-30页 |
| 3.3 金属螯合亲和成相剂的制备 | 第30-34页 |
| 3.3.1 PEG与环氧氯丙烷(ECH)摩尔配比对PEG-环氧得率的影响 | 第30页 |
| 3.3.2 三氟化硼添加量及反应时间对PEG-环氧得率的影响 | 第30-31页 |
| 3.3.3 NaOH溶液添加量和反应时间对环氧得率的影响 | 第31-32页 |
| 3.3.4 反应时间对IDA螯合量的影响 | 第32页 |
| 3.3.5 反应温度对IDA螯合量的影响 | 第32-33页 |
| 3.3.6 金属离子种类对PEG-IDA结合金属离子的影响 | 第33-34页 |
| 3.4 木瓜蛋白酶在亲和双水相中分配行为研究 | 第34-43页 |
| 3.4.1 PEG-IDA-Fe~(3+)和PEG4000相图的比较 | 第34页 |
| 3.4.2 pH对木瓜蛋白酶活性的影响 | 第34-35页 |
| 3.4.3 PEG和(NH_4)_2SO_4对木瓜蛋白酶活性的影响 | 第35页 |
| 3.4.4 金属螫合亲和成相剂对木瓜蛋白酶活性的影响 | 第35-36页 |
| 3.4.5 (NH_4)_2SO_4质量分数对酶分配行为的影响 | 第36-37页 |
| 3.4.6 PEG4000质量分数对分配行为的影响 | 第37页 |
| 3.4.7 不同金属螯合亲和成相剂取代PEG的量对分配行为的影响 | 第37-39页 |
| 3.4.8 PEG-IDA-Fe~(3+)/PEG/(NH_4)_2SO_4亲和双水相系统的响应面优化及结果分析 | 第39-43页 |
| 3.5 木瓜蛋白酶结构表征 | 第43-44页 |
| 3.5.1 UV-vis光谱扫描 | 第43页 |
| 3.5.2 傅里叶红外变化光谱(FT-IR)检测 | 第43-44页 |
| 3.6 亲和双水相萃取木瓜蛋白酶模型的建立 | 第44-48页 |
| 3.6.1 传统双水相中木瓜蛋白酶分配模型的建立 | 第44-46页 |
| 3.6.2 亲和双水相中木瓜蛋白酶分配模型的建立 | 第46-48页 |
| 4 讨论 | 第48-50页 |
| 4.1 木瓜蛋白酶的发展潜力评价 | 第48页 |
| 4.2 金属螯合亲和成相剂的制备评价 | 第48页 |
| 4.3 亲和双水相萃取木瓜蛋白酶及萃取前后酶的结构表征评价 | 第48-49页 |
| 4.4 木瓜蛋白酶亲和分配模型评价 | 第49页 |
| 4.5 创新点 | 第49页 |
| 4.6 需要进一步研究的内容 | 第49-50页 |
| 5 结论 | 第50-51页 |
| 参考文献 | 第51-56页 |
| 附录 | 第56-57页 |
| 致谢 | 第57页 |
