基于理性设计的β-甘露聚糖酶底物亲和力的定向改造
| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-9页 |
| 1 绪论 | 第9-19页 |
| ·甘露聚糖和低聚甘露糖概述 | 第9-11页 |
| ·甘露聚糖的分类及其结构特征 | 第9-10页 |
| ·低聚甘露糖的生理功能及其应用 | 第10页 |
| ·低聚甘露糖的生产方法及其酶法制备研究进展 | 第10-11页 |
| ·β-甘露聚糖酶的研究进展 | 第11-16页 |
| ·β-甘露聚糖酶的来源与理化性质 | 第11-12页 |
| ·β-甘露聚糖酶的结构特征 | 第12-13页 |
| ·β-甘露聚糖酶基因的克隆及异源表达 | 第13-14页 |
| ·β-甘露聚糖酶的分子定向改造 | 第14-15页 |
| ·β-甘露聚糖酶的应用 | 第15-16页 |
| ·基于理性设计的酶分子定向改造的概述 | 第16-17页 |
| ·本论文的立题依据和主要研究内容 | 第17-19页 |
| ·立题依据 | 第17页 |
| ·主要研究内容 | 第17-19页 |
| 2 材料与方法 | 第19-28页 |
| ·实验材料 | 第19-20页 |
| ·主要仪器设备 | 第19页 |
| ·菌种、质粒和工具酶 | 第19页 |
| ·理性设计所用软件和网站 | 第19页 |
| ·主要试剂 | 第19-20页 |
| ·主要溶液和培养基 | 第20页 |
| ·实验方法 | 第20-28页 |
| ·突变酶的理性设计 | 第20-21页 |
| ·突变酶基因的克隆与表达 | 第21-25页 |
| ·酶的纯化 | 第25-26页 |
| ·酶学性质测定 | 第26页 |
| ·双突变酶基因的克隆与表达 | 第26页 |
| ·重组β-甘露聚糖酶水解瓜尔胶条件的初步优化 | 第26-28页 |
| 3 结果与讨论 | 第28-48页 |
| ·突变酶的理性设计 | 第28-31页 |
| ·拟突变氨基酸及其替换对象的确定 | 第28-30页 |
| ·酶与配体结合自由能的计算 | 第30-31页 |
| ·突变酶基因的构建 | 第31-32页 |
| ·重组酶的表达和纯化 | 第32-34页 |
| ·重组毕赤酵母的鉴定 | 第32页 |
| ·重组酶的活性测定 | 第32-33页 |
| ·重组酶的 SDS-PAGE 分析 | 第33页 |
| ·重组酶的纯化 | 第33-34页 |
| ·重组酶的酶学性质测定 | 第34-40页 |
| ·pH 对重组酶活性及稳定性的影响 | 第34-35页 |
| ·温度对重组酶活性及稳定性的影响 | 第35-36页 |
| ·金属离子和 EDTA 稳定性 | 第36-37页 |
| ·动力学参数的测定 | 第37-38页 |
| ·结构分析 | 第38-40页 |
| ·双重突变酶基因的构建 | 第40-41页 |
| ·重组双重突变酶的表达和纯化 | 第41-42页 |
| ·重组毕赤酵母的鉴定 | 第41页 |
| ·重组双突变酶活性测定及 SDS-PAGE 分析 | 第41-42页 |
| ·重组双突变酶的纯化 | 第42页 |
| ·重组双突变酶的酶学性质测定 | 第42-43页 |
| ·瓜尔豆胶水解条件的初步优化 | 第43-48页 |
| ·瓜尔豆胶中总糖含量的测定 | 第43-44页 |
| ·重组β-甘露聚糖酶水解瓜尔豆胶条件的初步优化 | 第44-48页 |
| 主要结论与展望 | 第48-50页 |
| 主要结论 | 第48-49页 |
| 展望 | 第49-50页 |
| 致谢 | 第50-51页 |
| 参考文献 | 第51-57页 |
| 附录：作者在攻读硕士学位期间发表的论文 | 第57页 |
