| 摘要 | 第7-10页 |
| ABSTRACT | 第10-13页 |
| 符号及缩写词 | 第14-16页 |
| 第一章 绪论 | 第16-28页 |
| 1.1 乳酸茵 | 第16-18页 |
| 1.1.1 嗜热链球菌 | 第16-17页 |
| 1.1.2 酸奶及其营养价值 | 第17-18页 |
| 1.2 β-半乳糖苷酶 | 第18-20页 |
| 1.3 低聚半乳糖 | 第20-23页 |
| 1.3.1 低聚半乳糖的生理功能 | 第20-21页 |
| 1.3.2 低聚半乳糖的工业生产 | 第21-23页 |
| 1.4 乳酸菌表面展示系统的建立 | 第23-26页 |
| 1.4.1 表面展示的基本原理及应用 | 第23-25页 |
| 1.4.2 嗜热链球菌表面展示系统的研究进展 | 第25页 |
| 1.4.3 烯醇化酶 | 第25-26页 |
| 1.5 立题背景及意义 | 第26-27页 |
| 1.6 本论文研究内容 | 第27-28页 |
| 第二章 嗜热链球菌中高活性β-半乳糖苷酶的筛选 | 第28-36页 |
| 2.1 实验材料和方法 | 第29-30页 |
| 2.1.1 菌株 | 第29页 |
| 2.1.2 培养基与试剂 | 第29页 |
| 2.1.3 主要实验仪器 | 第29页 |
| 2.1.4 实验方法 | 第29-30页 |
| 2.1.4.1 X-Gal平板初筛 | 第29-30页 |
| 2.1.4.2 胞内破碎液的制备 | 第30页 |
| 2.1.4.3 β-半乳糖苷酶的酶活力检测 | 第30页 |
| 2.1.4.4 嗜热链球菌β-半乳糖苷酶的转糖基活性检测 | 第30页 |
| 2.1.4.5 HPLC法测定嗜热链球菌发酵液中的半乳糖残留量 | 第30页 |
| 2.2 结果 | 第30-33页 |
| 2.2.1 X-Gal平板初步筛选结果 | 第30-31页 |
| 2.2.2 嗜热链球菌β-半乳糖苷酶活性的检测 | 第31-32页 |
| 2.2.3 嗜热链球菌β-半乳糖苷酶转糖基活性检测 | 第32-33页 |
| 2.2.4 嗜热链球菌发酵液中的半乳糖残留量 | 第33页 |
| 2.3 讨论 | 第33-36页 |
| 第三章 β-半乳糖苷酶BgaQ的酶学性质研究及其转糖基活性条件的优化 | 第36-50页 |
| 3.1 实验材料及方法 | 第37-43页 |
| 3.1.1 实验菌株与质粒 | 第37页 |
| 3.1.2 培养基及试剂 | 第37-38页 |
| 3.1.3 实验仪器 | 第38页 |
| 3.1.4 实验方法 | 第38-43页 |
| 3.1.4.1 嗜热链球菌总DNA的提取 | 第38-39页 |
| 3.1.4.2 表达载体pET28a (+)-bgaQ的构建 | 第39-40页 |
| 3.1.4.3 BgaQ的纯化 | 第40页 |
| 3.1.4.4 BgaQ酶学性质的研究 | 第40-42页 |
| 3.1.4.5 BgaQ转糖基活性条件的优化 | 第42-43页 |
| 3.2 结果 | 第43-48页 |
| 3.2.1 表达质粒pET28a(+)-bgaQ的构建 | 第43页 |
| 3.2.2 SDS-PAGE凝胶电泳 | 第43-44页 |
| 3.2.3 BgaQ酶学性质的研究 | 第44-46页 |
| 3.2.4 BgaQ体外转糖基活性条件的优化 | 第46-48页 |
| 3.3 讨论 | 第48-50页 |
| 第四章 定点突变提高β-半乳糖苷酶的转糖基活性 | 第50-64页 |
| 4.1 实验材料及方法 | 第51-52页 |
| 4.1.1 菌株及质粒 | 第51页 |
| 4.1.2 培养基及试剂 | 第51页 |
| 4.1.3 实验方法 | 第51-52页 |
| 4.1.3.1 BgaQ的生物信息学分析 | 第51页 |
| 4.1.3.2 BgaQ的定点突变改造 | 第51-52页 |
| 4.1.3.3 mBgaQ的诱导表达及纯化 | 第52页 |
| 4.1.3.4 mBgaQ酶学性质研究 | 第52页 |
| 4.1.3.5 mBgaQ的转糖基活性研究 | 第52页 |
| 4.1.3.6 低浓度乳糖环境下BgaQ与mBgaQ生成GOS转化率的测定 | 第52页 |
| 4.2 结果 | 第52-61页 |
| 4.2.1 BgaQ的生物信息学分析 | 第52-55页 |
| 4.2.2 突变蛋白mBgaQ的诱导表达及纯化 | 第55-56页 |
| 4.2.3 mBgaQ酶学性质的研究 | 第56-59页 |
| 4.2.4 mBgaQ转糖基活性研究 | 第59-60页 |
| 4.2.5 低浓度乳糖条件下BgaQ和mBgaQ催化生成GOS的时间曲线 | 第60-61页 |
| 4.3 讨论 | 第61-64页 |
| 第五章 基于烯醇化酶建立嗜热链球菌的表面展示系统 | 第64-80页 |
| 5.1 材料与方法 | 第65-71页 |
| 5.1.1 实验菌株及质粒 | 第65页 |
| 5.1.2 培养基 | 第65-66页 |
| 5.1.3 试剂 | 第66页 |
| 5.1.4 实验仪器 | 第66页 |
| 5.1.5 实验方法 | 第66-71页 |
| 5.1.5.1 链球菌属enolase序列比对 | 第66-67页 |
| 5.1.5.2 表达载体的构建 | 第67页 |
| 5.1.5.3 大肠杆菌感受态的制备、转化、异源蛋白的表达与纯化 | 第67页 |
| 5.1.5.4 乳酸菌结合反应 | 第67-68页 |
| 5.1.5.5 EnoM锚定特异性研究 | 第68页 |
| 5.1.5.6 不同处理对EnoM锚定效率的影响 | 第68页 |
| 5.1.5.7 β-半乳糖苷酶的表达与展示 | 第68-69页 |
| 5.1.5.8 绿色荧光蛋白在嗜热链球菌中的靶向表达 | 第69-71页 |
| 5.2 结果 | 第71-77页 |
| 5.2.1 嗜热链球菌EnoM的序列同源性分析 | 第71-72页 |
| 5.2.2 表达载体pET28a(+)-gfp和pET28a(+)-gfp-enoM的构建 | 第72页 |
| 5.2.3 SDS-PAGE检测纯化结果 | 第72-73页 |
| 5.2.4 EnoM锚定功能的验证 | 第73页 |
| 5.2.5 EnoM锚定特异性的研究 | 第73-74页 |
| 5.2.6 不同处理条件对EnoM锚定效率的影响 | 第74-75页 |
| 5.2.7 β-半乳糖苷酶的表达与展示 | 第75-77页 |
| 5.2.8 GFP蛋白在嗜热链球菌中的靶向表达 | 第77页 |
| 5.3 讨论 | 第77-80页 |
| 全文总结与展望 | 第80-81页 |
| 参考文献 | 第81-93页 |
| 攻读硕士期间发表的论文 | 第93-94页 |
| 致谢 | 第94-95页 |
| 学位论文评阅及答辩情况表 | 第95页 |
