| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-9页 |
| 0 前言 | 第13-26页 |
| 0.1 副溶血弧菌简介 | 第13-16页 |
| 0.1.1 副溶血弧菌生理特性 | 第13页 |
| 0.1.2 副溶血弧菌致病机理 | 第13-14页 |
| 0.1.3 副溶血弧菌分布及其危害 | 第14-15页 |
| 0.1.4 弧菌危害的防控措施 | 第15-16页 |
| 0.2 噬菌体及其基因组学 | 第16-20页 |
| 0.2.1 噬菌体的生理特性 | 第16-17页 |
| 0.2.2 噬菌体的裂解机制 | 第17-19页 |
| 0.2.3 噬菌体基因组学 | 第19-20页 |
| 0.3 噬菌体内溶素研究 | 第20-24页 |
| 0.3.1 噬菌体编码内溶素的分类及结构 | 第20-21页 |
| 0.3.2 噬菌体内溶素的制备方法 | 第21-22页 |
| 0.3.3 噬菌体内溶素的应用现状 | 第22-24页 |
| 0.4 研究目的和意义 | 第24-25页 |
| 0.5 技术路线 | 第25-26页 |
| 1 副溶血弧菌噬菌体初步筛选 | 第26-34页 |
| 1.1 引言 | 第26页 |
| 1.2 材料 | 第26-27页 |
| 1.2.1 菌株 | 第26页 |
| 1.2.2 培养基 | 第26页 |
| 1.2.3 试剂 | 第26-27页 |
| 1.2.4 主要仪器 | 第27页 |
| 1.3 方法 | 第27-29页 |
| 1.3.1 噬菌体的增殖 | 第27页 |
| 1.3.2 噬菌体效价测定 | 第27-28页 |
| 1.3.3 噬菌体基因组提取 | 第28页 |
| 1.3.4 噬菌体核酸的酶切鉴定 | 第28页 |
| 1.3.5 噬菌体裂解谱的测定 | 第28-29页 |
| 1.4 实验结果 | 第29-32页 |
| 1.4.1 噬菌体增殖及效价测定 | 第29-30页 |
| 1.4.2 噬菌体核酸提取 | 第30页 |
| 1.4.3 噬菌体核酸酶切鉴定 | 第30-31页 |
| 1.4.4 噬菌体的裂解谱 | 第31-32页 |
| 1.5 讨论 | 第32-33页 |
| 1.6 小结 | 第33-34页 |
| 2 副溶血弧菌噬菌体VPp1内溶素基因预测与结构分析 | 第34-48页 |
| 2.1 引言 | 第34页 |
| 2.2 方法 | 第34-36页 |
| 2.2.1 副溶血弧菌噬菌体VPp1全基因组推定基因及其编码产物同源性分析 | 第34-35页 |
| 2.2.2 构建系统进化树 | 第35页 |
| 2.2.3 蛋白质功能预测 | 第35页 |
| 2.2.4 推定内溶素理化特征分析 | 第35页 |
| 2.2.5 内溶素编码氨基酸的信号肽序列预测 | 第35页 |
| 2.2.6 内溶素编码氨基酸的跨膜结构预测 | 第35页 |
| 2.2.7 内溶素编码氨基酸的结构域预测 | 第35-36页 |
| 2.2.8 内溶素编码氨基酸的二级结构预测 | 第36页 |
| 2.2.9 内溶素编码氨基酸序列的三级结构预测 | 第36页 |
| 2.3 实验结果 | 第36-45页 |
| 2.3.1 副溶血弧菌噬菌体VPp1全基因组推定基因及其编码产物同源性分析 | 第36-37页 |
| 2.3.2 构建系统进化树 | 第37-39页 |
| 2.3.3 蛋白质功能预测 | 第39-40页 |
| 2.3.4 推定内溶素理化特征分析 | 第40-41页 |
| 2.3.5 内溶素编码氨基酸的信号肽序列预测 | 第41-42页 |
| 2.3.6 内溶素编码氨基酸的跨膜结构预测 | 第42页 |
| 2.3.7 内溶素编码氨基酸的结构域预测 | 第42-43页 |
| 2.3.8 内溶素编码氨基酸的二级结构预测 | 第43-44页 |
| 2.3.9 内溶素编码氨基酸序列的三级结构预测 | 第44-45页 |
| 2.4 讨论 | 第45-46页 |
| 2.5 小结 | 第46-48页 |
| 3 副溶血弧菌噬菌体VPp1内溶素LysVPp1基因克隆、表达与纯化 | 第48-65页 |
| 3.1 引言 | 第48页 |
| 3.2 材料 | 第48-51页 |
| 3.2.1 质粒和菌株 | 第48-49页 |
| 3.2.2 试剂 | 第49页 |
| 3.2.3 试剂配置 | 第49-50页 |
| 3.2.4 主要仪器 | 第50-51页 |
| 3.3 方法 | 第51-56页 |
| 3.3.1 噬菌体内溶素基因的克隆表达 | 第51-54页 |
| 3.3.2 重组内溶素表达条件及表达方式 | 第54-55页 |
| 3.3.3 重组内溶素纯化 | 第55-56页 |
| 3.3.4 考马斯亮蓝G250法测定蛋白浓度 | 第56页 |
| 3.4 实验结果 | 第56-62页 |
| 3.4.1 内溶素基因的PCR扩增 | 第56页 |
| 3.4.2 阳性重组子的筛选及基因序列 | 第56-58页 |
| 3.4.3 重组大肠杆菌初步诱导表达 | 第58-59页 |
| 3.4.4 重组内溶素表达条件优化及表达形式确定 | 第59-61页 |
| 3.4.5 重组内溶素LysVPp1的纯化及浓度的测定 | 第61-62页 |
| 3.5 讨论 | 第62-63页 |
| 3.6 小结 | 第63-65页 |
| 4 重组内溶素LysVPp1体外抑菌活性鉴定 | 第65-76页 |
| 4.1 引言 | 第65页 |
| 4.2 材料 | 第65-66页 |
| 4.2.1 菌株 | 第65页 |
| 4.2.2 试剂 | 第65-66页 |
| 4.2.3 主要仪器 | 第66页 |
| 4.3 方法 | 第66-68页 |
| 4.3.1 扩散法定性检测重组内溶素LysVPp1酶活 | 第66-67页 |
| 4.3.2 浊度法定量检测重组内溶素LysVPp1酶活 | 第67页 |
| 4.3.3 去污剂对重组内溶素LysVPp1裂解作用的影响 | 第67页 |
| 4.3.4 重组内溶素LysVPp1最佳作用条件 | 第67-68页 |
| 4.4 结果 | 第68-73页 |
| 4.4.1 扩散法定性检测重组内溶素LysVPp1酶活 | 第68-69页 |
| 4.4.2 浊度法定量检测重组内溶素LysVPp1酶活 | 第69页 |
| 4.4.3 去污剂对重组内溶素LysVPp1裂解作用的影响 | 第69-70页 |
| 4.4.4 重组内溶素LysVPp1最佳作用条件 | 第70-73页 |
| 4.4.5 重组内溶素LysVPp1裂解谱的测定 | 第73页 |
| 4.5 讨论 | 第73-75页 |
| 4.6 小结 | 第75-76页 |
| 5 论文结论 | 第76-77页 |
| 6 论文创新点 | 第77页 |
| 7 下一步展望 | 第77-78页 |
| 参考文献 | 第78-86页 |
| 附录：符号说明 | 第86-87页 |
| 致谢 | 第87-88页 |
| 个人简历 | 第88页 |
| 发表的学术论文 | 第88页 |
