| 摘要 | 第1-4页 |
| ABSTRACT | 第4-6页 |
| 目录 | 第6-9页 |
| 第一章 文献综述 | 第9-22页 |
| ·葡萄球菌肠毒素及其功能 | 第9-13页 |
| ·葡萄球菌肠毒素多样性 | 第9-10页 |
| ·葡萄球菌肠毒素致病性 | 第10-12页 |
| ·葡萄球菌肠毒素超抗原活性 | 第12-13页 |
| ·基因工程抗体技术 | 第13-19页 |
| ·基因工程抗体分类 | 第14-17页 |
| ·基因工程抗体表达系统 | 第17-18页 |
| ·基因工程抗体的体外亲和力成熟 | 第18-19页 |
| ·临床应用及产业化 | 第19页 |
| ·葡萄球菌肠毒素基因工程抗体研究现状 | 第19-20页 |
| ·理论研究进展 | 第20页 |
| ·应用前景 | 第20页 |
| ·本课题研究目的及意义 | 第20-22页 |
| 第二章 葡萄球菌肠毒素抗体可变区基因的克隆及分析 | 第22-34页 |
| ·实验材料 | 第22-24页 |
| ·杂交瘤细胞株 | 第22页 |
| ·载体与宿主菌 | 第22页 |
| ·主要试剂 | 第22-24页 |
| ·细胞培养基及其配置 | 第22-23页 |
| ·细菌培养基及其配置 | 第23页 |
| ·质粒小量提取用试剂 | 第23-24页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳用液 | 第24页 |
| ·主要仪器设备 | 第24页 |
| ·实验方法 | 第24-27页 |
| ·Anti-SEs 单抗杂交瘤细胞的传代培养 | 第24页 |
| ·总 RNA 提取及 cDNA 合成 | 第24-25页 |
| ·轻重链可变区基因引物设计 | 第25页 |
| ·可变区基因片段的 PCR 扩增 | 第25-26页 |
| ·PCR 产物的纯化回收 | 第26页 |
| ·目的基因的克隆与测序 | 第26-27页 |
| ·VL/VH基因的生物信息学分析 | 第27页 |
| ·结果与分析 | 第27-31页 |
| ·细胞总 RNA 提取 | 第27-28页 |
| ·VL/VH基因的 PCR 扩增 | 第28页 |
| ·阳性重组子的鉴定 | 第28-29页 |
| ·VL/ VH胚系同源性分析 | 第29-31页 |
| ·讨论 | 第31-33页 |
| ·超抗原抗体可变区基因及氨基酸序列的特殊性 | 第31-32页 |
| ·Anti-SEs 抗体可变区基因胚系同源性 | 第32页 |
| ·抗体可变区编码基因的克隆 | 第32-33页 |
| ·小结 | 第33-34页 |
| 第三章 重构葡萄球菌肠毒素基因工程抗体的制备及鉴定 | 第34-50页 |
| ·实验材料 | 第34-37页 |
| ·载体与细胞株 | 第34-35页 |
| ·主要试剂 | 第35页 |
| ·细胞裂解液及其配制 | 第35页 |
| ·酶标抗体制备相关溶液 | 第35-36页 |
| ·ELISA 相关溶液 | 第36页 |
| ·细胞间接免疫荧光及流式细胞术用液 | 第36-37页 |
| ·主要仪器 | 第37页 |
| ·实验方法 | 第37-42页 |
| ·真核表达载体的构建 | 第37-39页 |
| ·细胞转染 | 第39-40页 |
| ·阳性克隆筛选及单克隆 | 第40页 |
| ·稳定表达细胞系的建立 | 第40-41页 |
| ·表达抗体功能活性的鉴定 | 第41-42页 |
| ·结果与分析 | 第42-47页 |
| ·VH基因的扩增及 ivs-IRES-VL序列的拼接 | 第42页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第42-43页 |
| ·细胞转染及阳性克隆筛选 | 第43-44页 |
| ·稳定表达细胞系的建立 | 第44-45页 |
| ·重构抗体的鉴定及特性分析 | 第45-47页 |
| ·讨论 | 第47-49页 |
| ·小分子抗体制备技术的创新 | 第47-48页 |
| ·基因工程抗体的真核表达优势 | 第48-49页 |
| ·Anti-SEs 基因工程重构抗体的应用潜力 | 第49页 |
| ·小结 | 第49-50页 |
| 第四章 结论 | 第50-51页 |
| 参考文献 | 第51-56页 |
| 发表论文和参加科研情况说明 | 第56-57页 |
| 附录一 主要生化试剂 | 第57-58页 |
| 附录二 主要仪器 | 第58-59页 |
| 附录三 真核表达载体构建示意图 | 第59-60页 |
| 附录四 真核表达载体质粒图谱 | 第60-62页 |
| 附录五 轻链可变区基因 Genbank 序列 | 第62-64页 |
| 附录六 重链可变区基因 Genbank 序列 | 第64-66页 |
| 致谢 | 第66页 |