| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-12页 |
| 缩略词表 | 第12-13页 |
| 第一章 前言 | 第13-25页 |
| ·亲和纯化技术的概述 | 第13页 |
| ·亲和纯化技术的研究进展 | 第13-23页 |
| ·亲和纯化标签 | 第13-18页 |
| ·标签去除技术 | 第18-23页 |
| ·立题背景及意义 | 第23页 |
| ·本论文主要研究内容 | 第23-25页 |
| 第二章 阴阳类弹性蛋白的性质研究及类弹性蛋白-SUMO 融合标签的应用研究 | 第25-39页 |
| ·前言 | 第25-26页 |
| ·材料与方法 | 第26-29页 |
| ·材料 | 第26-27页 |
| ·菌株、质粒与培养基 | 第27页 |
| ·类弹性蛋白的命名 | 第27页 |
| ·类弹性蛋白单体的基因设计，合成和低聚化 | 第27页 |
| ·ELPs 融合蛋白和 ELPs-SUMO 融合蛋白表达载体的构建 | 第27-28页 |
| ·ELPs, ELPs 融合蛋白和 ELPs-SUMO 融合蛋白的基因表达和纯化 | 第28页 |
| ·蛋白质的表征 | 第28-29页 |
| ·结果与讨论 | 第29-38页 |
| ·类弹性蛋白的表达与纯化 | 第29-30页 |
| ·培养基和培养温度对 ELP[KV7F-36]-EGFP 表达的影响 | 第30-31页 |
| ·ELP[KV7F-36, 54, 72]-EGFP 与 ELP[KV7F-36, 54, 72]-SUMO-EGFP 的表达与纯化 | 第31-34页 |
| ·超声波辅助分散热离心沉淀对 ELP[KV7F-36]-EGFP 和 EGFP-ELP[KV7F-36]纯化的影响 | 第34-35页 |
| ·ELP[KV7F-36, 54, 72]-Trx, Trx-ELP[KV7F-36, 54, 72]和 ELP[KV7F-36, 72]-SUMO-Trx 的表达与纯化 | 第35-36页 |
| ·ELPs-SUMO 融合标签纯化重组蛋白 | 第36-38页 |
| ·本章小结 | 第38-39页 |
| 第三章 蛋白 L2 吸附材料的筛选及蛋白 L2-SUMO 融合标签基本应用特性研究 | 第39-51页 |
| ·前言 | 第39-40页 |
| ·材料与方法 | 第40-42页 |
| ·材料 | 第40-41页 |
| ·菌株和质粒 | 第41-42页 |
| ·重组蛋白的表达与亲和吸附纯化 | 第42页 |
| ·蛋白质的表征 | 第42页 |
| ·结果与讨论 | 第42-49页 |
| ·不同的吸附材料对 L2(1-60, 203-273)纯化性能的影响 | 第42-44页 |
| ·吸附缓冲液中不同 NaCl 浓度和 pH 对 L2(1-60, 203-273)纯化性能的影响 | 第44-45页 |
| ·蛋白 L2 及其不同大小的缺失突变体对目的蛋白纯化的影响 | 第45页 |
| ·不同洗脱剂对硅藻土结合 L2(1-60，203-273)-SUMO-EGFP 洗脱研究 | 第45-47页 |
| ·亲和吸附介质的重复利用性能 | 第47页 |
| ·L2(1-60, 203-273)-Ulp1 的离子交换法纯化 | 第47-48页 |
| ·核糖体蛋白 L2 及其截短 L2-SUMO 融合标签在重组蛋白纯化上的应用研究 | 第48-49页 |
| ·本章小结 | 第49-51页 |
| 第四章 核糖体蛋白 L2 吸附结合域的确定及对吸附材料吸附特异性的研究 | 第51-62页 |
| ·前言 | 第51-52页 |
| ·材料与方法 | 第52-54页 |
| ·材料 | 第52页 |
| ·菌种和质粒 | 第52-53页 |
| ·LB 培养基乳糖诱导和 ZYM-5052 培养基自诱导培养 | 第53页 |
| ·温度对重组蛋白 L2 (1-60, 203-273)-SUMO-EGFP 和 L2(203-273)-SUMO-EGFP 可溶性表达的影响 | 第53页 |
| ·L2(1-60, 203-273)-SUMO-EGFP 和 L2(203-273)-SUMO-EGFP 的吸附研究 | 第53-54页 |
| ·重组蛋白的亲和吸附纯化 | 第54页 |
| ·蛋白质的表征 | 第54页 |
| ·结果与讨论 | 第54-60页 |
| ·不同培养基对重组蛋白表达水平的影响 | 第54-55页 |
| ·培养温度对重组蛋白可溶性表达的影响 | 第55-56页 |
| ·pH 对重组蛋白在吸附剂上吸附载量的影响 | 第56-57页 |
| ·重组蛋白在硅藻土上的吸附动力学研究 | 第57-58页 |
| ·吸附等温线 | 第58-59页 |
| ·EGFP 的亲和吸附纯化 | 第59-60页 |
| ·本章小结 | 第60-62页 |
| 第五章 核糖体蛋白 L2 吸附核心序列的确定及对不同吸附材料吸附特性的研究 | 第62-71页 |
| ·前言 | 第62-63页 |
| ·材料与方法 | 第63-64页 |
| ·材料 | 第63页 |
| ·菌株和质粒 | 第63页 |
| ·重组蛋白的表达 | 第63页 |
| ·吸附特性研究 | 第63-64页 |
| ·重组融合蛋白与目的蛋白的纯化 | 第64页 |
| ·蛋白质的表征 | 第64页 |
| ·结果与讨论 | 第64-70页 |
| ·碱性多肽纯化标签的选择 | 第64-65页 |
| ·pH 对 L2 (252-273)-SUMO-EGFP 在硅藻土和磁性纳米粒子上吸附的影响 | 第65-66页 |
| ·吸附动力学研究 | 第66-67页 |
| ·吸附等温线 | 第67-68页 |
| ·重组融合蛋白的纯化 | 第68-69页 |
| ·重组目的蛋白 EGFP 的纯化 | 第69-70页 |
| ·本章小结 | 第70-71页 |
| 第六章 L2(252-273)-SUMO 融合标签在重组过氧化氢酶纯化中的应用研究 | 第71-80页 |
| ·前言 | 第71-72页 |
| ·材料与方法 | 第72-74页 |
| ·材料 | 第72页 |
| ·菌株和质粒 | 第72页 |
| ·L2(252-273)-SUMO-KatA 的吸附研究 | 第72-73页 |
| ·重组过氧化氢酶的纯化 | 第73-74页 |
| ·重组过氧化氢酶的生化特性研究 | 第74页 |
| ·过氧化氢酶活性测定 | 第74页 |
| ·结果与讨论 | 第74-79页 |
| ·pH 对 L2 (252-273)-SUMO-KatA 的吸附特性的影响 | 第74-75页 |
| ·吸附动力学特性 | 第75-76页 |
| ·吸附等温线 | 第76页 |
| ·重组过氧化氢酶的纯化 | 第76-77页 |
| ·pH 和温度对过氧化氢酶的影响 | 第77-78页 |
| ·重组过氧化氢酶的 Km 和光谱特性 | 第78-79页 |
| ·本章小结 | 第79-80页 |
| 第七章 带聚赖氨酸标签 SUMO 蛋白酶的表达与纯化 | 第80-89页 |
| ·前言 | 第80页 |
| ·材料与方法 | 第80-82页 |
| ·材料 | 第80-81页 |
| ·菌株和质粒 | 第81页 |
| ·重组蛋白的表达与纯化 | 第81页 |
| ·Ulp1-K10 的吸附研究 | 第81-82页 |
| ·结果与讨论 | 第82-87页 |
| ·SUMO 蛋白酶表达宿主的选择 | 第82-83页 |
| ·纯化标签对 SUMO 蛋白酶酶切效率的影响 | 第83-84页 |
| ·Ulp1-K10 的表达与纯化 | 第84-85页 |
| ·吸附动力学特性 | 第85-86页 |
| ·吸附等温线 | 第86-87页 |
| ·本章小结 | 第87-89页 |
| 主要结论与展望 | 第89-92页 |
| 论文创新点 | 第92-93页 |
| 致谢 | 第93-94页 |
| 参考文献 | 第94-110页 |
| 作者在攻读博士学位期间发表的论文 | 第110页 |
