| 摘要 | 第5-7页 |
| ABSTRACT | 第7-8页 |
| 第一章 绪论 | 第12-23页 |
| 1.1 玉米赤霉烯酮 | 第12-16页 |
| 1.1.1 概述 | 第12-13页 |
| 1.1.2 玉米赤霉烯酮的分布及危害 | 第13页 |
| 1.1.3 玉米赤霉烯酮的毒理学作用 | 第13-14页 |
| 1.1.4 玉米赤霉烯酮的检测方法 | 第14-16页 |
| 1.2 ZEN的脱毒 | 第16-17页 |
| 1.2.1 ZEN的物理脱毒法 | 第16页 |
| 1.2.2 ZEN的化学脱毒法 | 第16页 |
| 1.2.3 ZEN生物脱毒法 | 第16-17页 |
| 1.3 毕赤酵母表达系统 | 第17-18页 |
| 1.3.1 毕赤酵母表达系统的优势 | 第17-18页 |
| 1.3.2 毕赤酵母的载体 | 第18页 |
| 1.4 蛋白质的分离纯化方法 | 第18-20页 |
| 1.4.1 根据分子大小不同进行分离纯化 | 第18页 |
| 1.4.2 根据溶解度不同进行分离纯化 | 第18-19页 |
| 1.4.3 根据电荷不同进行分离纯化 | 第19-20页 |
| 1.4.4 利用对配体的特异亲和力进行分离纯化 | 第20页 |
| 1.5 本研究的意义和主要内容 | 第20-23页 |
| 1.5.1 研究背景与意义 | 第20-21页 |
| 1.5.2 研究内容 | 第21-22页 |
| 1.5.4 技术路线 | 第22-23页 |
| 第二章 重组质粒pPIC9K-Prx-His的构建 | 第23-36页 |
| 2.1 引言 | 第23页 |
| 2.2 实验材料 | 第23-25页 |
| 2.2.1 主要仪器设备 | 第23页 |
| 2.2.2 质粒与菌株 | 第23-24页 |
| 2.2.3 主要试剂 | 第24页 |
| 2.2.4 培养基与溶液 | 第24-25页 |
| 2.3 实验方法 | 第25-31页 |
| 2.3.1 不动杆菌Acinetobactersp.SM04的活化 | 第25页 |
| 2.3.2 大肠杆菌EscherichiacoliDH5α的活化 | 第25-26页 |
| 2.3.3 载体质粒的提取 | 第26页 |
| 2.3.4 引物设计与合成 | 第26-27页 |
| 2.3.5 目的基因的提取与扩增 | 第27-28页 |
| 2.3.6 PCR产物的纯化回收试验 | 第28-29页 |
| 2.3.7 双酶切反应与割胶回收试验 | 第29页 |
| 2.3.8 载体与目的基因的连接反应 | 第29-30页 |
| 2.3.9 感受态大肠杆菌细胞的制备 | 第30页 |
| 2.3.10 化学法转化大肠杆菌 | 第30-31页 |
| 2.3.11 重组子的筛选与鉴定 | 第31页 |
| 2.4 实验结果与讨论 | 第31-35页 |
| 2.4.1 目的基因的提取 | 第31-33页 |
| 2.4.2 重组质粒的构建 | 第33-35页 |
| 2.5 本章小结 | 第35-36页 |
| 第三章 重组蛋白Prx-His在毕赤酵母中的分泌表达和His-tag对蛋白活性的影响 | 第36-54页 |
| 3.1 引言 | 第36页 |
| 3.2 实验材料 | 第36-39页 |
| 3.2.1 主要仪器设备 | 第36-37页 |
| 3.2.2 菌株 | 第37页 |
| 3.2.3 主要试剂 | 第37页 |
| 3.2.4 培养基与溶液 | 第37-39页 |
| 3.3 实验方法 | 第39-43页 |
| 3.3.1 毕赤酵母转化 | 第39-40页 |
| 3.3.2 重组蛋白Prx-His在毕赤酵母中的的诱导表达 | 第40-41页 |
| 3.3.3 重组蛋白Prx-His的SDS-PAGE的电泳分析 | 第41页 |
| 3.3.4 重组蛋白Prx-His的ZEN降解活性测定 | 第41-43页 |
| 3.4 结果与讨论 | 第43-52页 |
| 3.4.1 重组酵母转化子的菌落PCR鉴定 | 第43-46页 |
| 3.4.2 重组蛋白Prx-His的SDS-PAGE鉴定 | 第46-47页 |
| 3.4.3 重组蛋白Prx-His的降解活性检测 | 第47-52页 |
| 3.5 本章小结 | 第52-54页 |
| 第四章 重组蛋白Prx-His的纯化及降解ZEN产物结构分析 | 第54-72页 |
| 4.1 引言 | 第54页 |
| 4.2 实验材料 | 第54-55页 |
| 4.2.1 主要仪器设备 | 第54-55页 |
| 4.2.2 主要试剂 | 第55页 |
| 4.2.3 常用溶液的配制 | 第55页 |
| 4.3 实验方法 | 第55-59页 |
| 4.3.1 蛋白沉淀方法的选择 | 第55-56页 |
| 4.3.2 镍柱亲和层析法分离蛋白 | 第56页 |
| 4.3.3 纯化蛋白Prx-His的SDS-PAGE | 第56页 |
| 4.3.4 纯化蛋白Prx-His的ZEN降解活性测定 | 第56页 |
| 4.3.5 Prx-His降解ZEN产物制备萃取TLC | 第56-57页 |
| 4.3.6 半制备液相法制备Prx-His降解ZEN产物 | 第57-58页 |
| 4.3.7 MCF-7乳腺癌细胞增殖试验 | 第58-59页 |
| 4.4 结果与讨论 | 第59-71页 |
| 4.4.1 蛋白沉淀方法的选择 | 第59-61页 |
| 4.4.2 酶液的镍柱亲和层析纯化 | 第61页 |
| 4.4.3 重组蛋白Prx-His的SDS-PAGE电泳分析 | 第61-62页 |
| 4.4.4 重组蛋白Prx-His的ZEN降解能力分测定 | 第62-63页 |
| 4.4.5 纯化过程中蛋白量和过氧化物酶活力变化 | 第63页 |
| 4.4.6 重组蛋白Prx-His降解ZEN产物的制备 | 第63-67页 |
| 4.4.7 重组蛋白Prx-His酶液对ZEN降解产物结构预测 | 第67-68页 |
| 4.4.8 MCF-7乳腺癌细胞增殖试验 | 第68-69页 |
| 4.4.9 重组蛋白Prx-His酶液对ZEN及其衍生物的降解反应 | 第69-71页 |
| 4.5 本章小结 | 第71-72页 |
| 结论与展望 | 第72-74页 |
| 结论 | 第72-73页 |
| 本论文的创新之处 | 第73页 |
| 展望 | 第73-74页 |
| 参考文献 | 第74-81页 |
| 攻读硕士学位期间取得的研究成果 | 第81-82页 |
| 致谢 | 第82-83页 |
| 附件 | 第83页 |
