| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 缩略语表 | 第11-12页 |
| 第一章 引言 | 第12-23页 |
| 1.1 葡萄果实中的香气物质及其来源 | 第12-13页 |
| 1.1.1 葡萄果实中的香气物质 | 第12页 |
| 1.1.2 香气物质的合成途径 | 第12-13页 |
| 1.2 避雨栽培对葡萄果实香气物质的影响 | 第13-14页 |
| 1.3 葡萄果实中的降异戊二烯及其生物合成 | 第14-17页 |
| 1.3.1 果实中的类胡萝卜素 | 第14-15页 |
| 1.3.2 果实中的降异戊二烯 | 第15-16页 |
| 1.3.3 降异戊二烯类化合物的生物合成 | 第16-17页 |
| 1.4 降异戊二烯代谢关键酶的研究进展 | 第17-19页 |
| 1.4.1 八氢番茄红素合成酶(PSY) | 第17-18页 |
| 1.4.2 类胡萝卜素裂解双加氧酶(CCD) | 第18-19页 |
| 1.5 影响降异戊二烯香气积累的因素 | 第19-21页 |
| 1.5.1 品种因素 | 第19-20页 |
| 1.5.2 环境因素 | 第20页 |
| 1.5.3 栽培管理 | 第20-21页 |
| 1.6 本研究目的和意义 | 第21页 |
| 1.7 技术路线图 | 第21-23页 |
| 第二章 避雨栽培对'赤霞珠'葡萄果实香气物质积累的影响 | 第23-50页 |
| 2.1 实验材料 | 第23-25页 |
| 2.1.1 实验设计 | 第23-24页 |
| 2.1.2 样品采集 | 第24-25页 |
| 2.1.3 试剂与标准品 | 第25页 |
| 2.2 实验方法 | 第25-30页 |
| 2.2.1 葡萄果实理化指标测定 | 第25页 |
| 2.2.2 澄清葡萄汁的获得 | 第25-26页 |
| 2.2.3 游离态香气物质分离提取 | 第26页 |
| 2.2.4 糖苷结合态香气物质提取 | 第26页 |
| 2.2.5 GC/MS分析 | 第26页 |
| 2.2.6 香气物质定性定量分析 | 第26-27页 |
| 2.2.7 葡萄果实总RNA的提取 | 第27-28页 |
| 2.2.8 cDNA第一条链的合成 | 第28页 |
| 2.2.9 实时荧光定量PCR方法 | 第28-29页 |
| 2.2.10 气象数据来源 | 第29页 |
| 2.2.11 数据分析 | 第29-30页 |
| 2.3 结果与讨论 | 第30-49页 |
| 2.3.1 避雨栽培对'赤霞珠'葡萄果实理化指标的影响 | 第30页 |
| 2.3.2 避雨栽培对香气物质总量的影响 | 第30-33页 |
| 2.3.3 避雨栽培对果实三大合成路径产生的香气物质总量的影响 | 第33-35页 |
| 2.3.4 避雨栽培对脂肪酸来源香气的影响 | 第35-39页 |
| 2.3.5 避雨栽培对氨基酸来源香气的影响 | 第39-42页 |
| 2.3.6 避雨栽培对异戊二烯来源香气的影响 | 第42-44页 |
| 2.3.7 降异戊二烯合成相关基因的表达 | 第44-47页 |
| 2.3.8 主成分分析 | 第47-48页 |
| 2.3.9 栽培方式和年份对葡萄果实香气代谢的影响 | 第48-49页 |
| 2.4 本章小结 | 第49-50页 |
| 第三章 不同芳香类型的葡萄果实降异戊二烯积累 及基因表达的差异 | 第50-76页 |
| 3.1 实验材料 | 第50-51页 |
| 3.1.1 植物材料 | 第50-51页 |
| 3.1.2 试剂与标准品 | 第51页 |
| 3.2 实验方法 | 第51-54页 |
| 3.2.1 葡萄果实理化指标测定 | 第51页 |
| 3.2.2 游离态和糖苷结合态香气物质的提取 | 第51页 |
| 3.2.3 GC/MS条件及定性定量分析 | 第51页 |
| 3.2.4 葡萄果实总RNA的提取及cDNA第一条链的合成 | 第51页 |
| 3.2.5 VvCCDs全长基因的克隆和扩增 | 第51-52页 |
| 3.2.6 目的片段的回收纯化 | 第52-53页 |
| 3.2.7 构建克隆载体pMD19-T及鉴定 | 第53页 |
| 3.2.8 重组质粒的提取及双酶切鉴定 | 第53-54页 |
| 3.2.9 实时荧光定量PCR方法 | 第54页 |
| 3.2.10 气象数据来源 | 第54页 |
| 3.2.11 数据分析 | 第54页 |
| 3.3 结果与讨论 | 第54-75页 |
| 3.3.1 不同芳香类型葡萄果实理化指标分析 | 第54-55页 |
| 3.3.2 两个年份两个产区'小白玫瑰'游离态和结合态降异戊二烯香气分析 | 第55-58页 |
| 3.3.3 两个年份'小红玫瑰'游离态和结合态降异戊二烯香气分析 | 第58-59页 |
| 3.3.4 两个年份'琼瑶浆'游离态和结合态降异戊二烯香气分析 | 第59-60页 |
| 3.3.5 '霞多丽'果实游离态和结合态降异戊二烯香气分析 | 第60-62页 |
| 3.3.6 不同品种降异戊二烯类香气物质PLS-DA分析 | 第62-63页 |
| 3.3.7 高台产区两个年份主要气候参数的比较 | 第63-64页 |
| 3.3.8 降异戊二烯合成相关基因转录水平表达 | 第64-67页 |
| 3.3.9 不同芳香类型葡萄果实VvCCD1、VvCCD4a和VvCCD4b单核苷酸多态性分析 | 第67-75页 |
| 3.4 本章小结 | 第75-76页 |
| 第四章 关键基因启动子的克隆及其对非生物因素的响应 | 第76-102页 |
| 4.1 实验材料 | 第76-79页 |
| 4.1.1 植物材料 | 第76-77页 |
| 4.1.2 载体与菌株 | 第77页 |
| 4.1.3 实验仪器 | 第77页 |
| 4.1.4 化学试剂和试剂盒 | 第77页 |
| 4.1.5 常用试剂配制 | 第77-79页 |
| 4.2 实验方法 | 第79-87页 |
| 4.2.1 葡萄果实基因组DNA的提取(试剂盒法) | 第79-80页 |
| 4.2.2 关键基因启动子克隆引物的设计 | 第80-81页 |
| 4.2.3 启动子扩增PCR | 第81页 |
| 4.2.4 启动子PCR产物的回收纯化 | 第81页 |
| 4.2.5 启动子克隆载体的构建 | 第81页 |
| 4.2.6 重组质粒的提取及鉴定 | 第81-82页 |
| 4.2.7 启动子序列的测定与分析 | 第82页 |
| 4.2.8 构建基因启动子的LUC荧光表达载体(烟草荧光素酶表达实验) | 第82页 |
| 4.2.9 构建基因启动子的GUS植物表达载体 | 第82页 |
| 4.2.10 农杆菌感受态细胞制备及农杆菌转化 | 第82-83页 |
| 4.2.11 转基因拟南芥的获得 | 第83-84页 |
| 4.2.12 拟南芥叶片基因组DNA的提取 | 第84页 |
| 4.2.13 农杆菌介导瞬时转化烟草叶片 | 第84页 |
| 4.2.14 启动子活性鉴定及遮光处理烟草叶片 | 第84-85页 |
| 4.2.15 光照、温度、黑暗和ABA处理拟南芥叶片 | 第85页 |
| 4.2.16 转化拟南芥叶片GUS活性检测 | 第85-87页 |
| 4.3 结果与讨论 | 第87-101页 |
| 4.3.1 基因启动子序列的克隆 | 第87-91页 |
| 4.3.2 基因启动子序列的顺式作用元件预测 | 第91-94页 |
| 4.3.3 根癌农杆菌转化及鉴定 | 第94页 |
| 4.3.4 启动子活性鉴定 | 第94-95页 |
| 4.3.5 遮光处理对启动子活性的影响 | 第95-96页 |
| 4.3.6 转基因拟南芥的获得 | 第96-97页 |
| 4.3.7 '赤霞珠'VvPSY, VvCCD1,VvCCD4a,VvCCD4b启动子对环境因素的响应 | 第97-101页 |
| 4.4 本章小结 | 第101-102页 |
| 第五章 全文总结及展望 | 第102-104页 |
| 5.1 全文总结 | 第102-103页 |
| 5.2 下一步设想 | 第103-104页 |
| 参考文献 | 第104-114页 |
| 附录 | 第114-122页 |
| 致谢 | 第122-123页 |
| 个人简介 | 第123页 |
