| 摘要 | 第5-6页 |
| 英文摘要 | 第6-7页 |
| 第一章 绪论 | 第11-25页 |
| 1.1 引言 | 第11页 |
| 1.2 酒中甲醇概述 | 第11-15页 |
| 1.2.1 甲醇的危害 | 第11-12页 |
| 1.2.2 酒中甲醇的标准 | 第12页 |
| 1.2.3 酒中甲醇的来源及消除方法 | 第12-15页 |
| 1.3 酒中甲醇的测定方法 | 第15-19页 |
| 1.3.1 高效液相色谱法 | 第15页 |
| 1.3.2 固定化酶-流动注射分析法 | 第15-16页 |
| 1.3.3 酶电极法 | 第16页 |
| 1.3.4 激光拉曼光谱法 | 第16页 |
| 1.3.5 Fourier变换红外光谱法 | 第16-17页 |
| 1.3.6 折射法 | 第17页 |
| 1.3.7 气相色谱法 | 第17-18页 |
| 1.3.8 顶空进样GC法 | 第18-19页 |
| 1.4 菌种的选育与基因工程的构建 | 第19-23页 |
| 1.4.1 自然选育 | 第19页 |
| 1.4.2 诱变选育 | 第19-20页 |
| 1.4.3 原生质体融合技术 | 第20页 |
| 1.4.4 基因工程改良菌种 | 第20-23页 |
| 1.5 选择Cre-Lox P基因系统敲除法的依据 | 第23-25页 |
| 第二章GCV2 缺失型酿酒酵母的构建 | 第25-45页 |
| 2.1 引言 | 第25页 |
| 2.2 实验材料 | 第25-28页 |
| 2.2.1 菌种与质粒 | 第25页 |
| 2.2.2 主要试剂 | 第25-26页 |
| 2.2.3 主要仪器设备 | 第26-27页 |
| 2.2.4 培养基及溶液的配制 | 第27-28页 |
| 2.3 实验方法 | 第28-34页 |
| 2.3.1 验证酿酒酵母细胞中是否含有甘氨酸裂解酶系 | 第28页 |
| 2.3.2 酵母基因的提取 | 第28-29页 |
| 2.3.3 酿酒酵母对抗生素G418 和Zeocin的耐受性实验 | 第29页 |
| 2.3.4 构建基因GCV2 敲除组件的PCR优化实验 | 第29页 |
| 2.3.5 GCV2 基因敲除组建的构建 | 第29页 |
| 2.3.6 质粒DNA的提取 | 第29-30页 |
| 2.3.7 醋酸锂法转化纯化后的敲除组件至酵母菌中 | 第30-31页 |
| 2.3.8 醋酸锂法将质粒pSH65 转化至筛选出的阳性菌中 | 第31页 |
| 2.3.9 麦芽汁的制备 | 第31-32页 |
| 2.3.10 改造菌S2 与原菌株的发酵实验 | 第32页 |
| 2.3.11 顶空气相法测定甲醇的含量 | 第32-34页 |
| 2.4 结果与讨论 | 第34-44页 |
| 2.4.1 酿酒酵母细胞中是否含有甘氨酸裂解酶系的验证结果 | 第34页 |
| 2.4.2 酿酒酵母对抗生素G418 和Zeocin的耐受性实验结果 | 第34-35页 |
| 2.4.3 构建基因GCV2 敲除组件的PCR优化实验结果 | 第35-36页 |
| 2.4.4 引物的设计 | 第36-37页 |
| 2.4.5 GCV2 基因敲除组建的构建结果 | 第37-38页 |
| 2.4.6 用醋酸锂法转化敲除组件至酵母菌中 | 第38-39页 |
| 2.4.7 影印平板法筛选出Kan抗性标记敲除的菌株 | 第39-40页 |
| 2.4.8 传代丢失质粒pSH65 及缺失GCV2 酵母菌株的获得 | 第40-41页 |
| 2.4.9 出发菌株与改造菌株S2 发酵甲醇的测定 | 第41-44页 |
| 2.5 本章小结 | 第44-45页 |
| 第三章GCV1 缺失型酿酒酵母的构建 | 第45-54页 |
| 3.1 引言 | 第45页 |
| 3.2 实验材料 | 第45-47页 |
| 3.2.1 菌种 | 第45页 |
| 3.2.2 主要试剂 | 第45-46页 |
| 3.2.3 主要培养基 | 第46页 |
| 3.2.4 主要仪器及设备 | 第46-47页 |
| 3.3 实验方法 | 第47-48页 |
| 3.3.1 敲除组件的构建与转化 | 第47页 |
| 3.3.2 阳性菌株的筛选与验证 | 第47页 |
| 3.3.3 阳性菌株的发酵实验 | 第47页 |
| 3.3.4 Kan抗性标记的去除 | 第47-48页 |
| 3.3.5 GCV1 缺失菌的获得与发酵实验 | 第48页 |
| 3.4 结果与讨论 | 第48-53页 |
| 3.4.1 敲除组件的构建与转化 | 第48-50页 |
| 3.4.2 阳性菌株的筛选与验证 | 第50-51页 |
| 3.4.3 阳性菌株的发酵实验 | 第51页 |
| 3.4.4 Kan抗性标记的去除 | 第51-52页 |
| 3.4.5 GCV1 缺失菌的获得与发酵实验 | 第52-53页 |
| 3.5 本章小结 | 第53-54页 |
| 第四章 工程菌S21 发酵工艺条件的优化 | 第54-63页 |
| 4.1 引言 | 第54页 |
| 4.2 实验材料 | 第54-55页 |
| 4.2.1 菌种 | 第54页 |
| 4.2.2 主要试剂 | 第54-55页 |
| 4.2.3 主要溶液 | 第55页 |
| 4.2.4 主要仪器及设备 | 第55页 |
| 4.3 实验方法 | 第55-56页 |
| 4.4 结果与讨论 | 第56-62页 |
| 4.4.1 最优发酵条件的实验验证 | 第62页 |
| 4.5 本章小结 | 第62-63页 |
| 结论与展望 | 第63-65页 |
| 参考文献 | 第65-70页 |
| 攻读硕士学位期间取得的研究成果 | 第70-71页 |
| 致谢 | 第71-72页 |
| 附件 | 第72页 |
