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清香大曲糖化酶的提取及宏蛋白质组学分析

摘要第1-5页
Abstract第5-10页
1 引言第10-20页
   ·汾酒大曲糖化酶的研究第10-14页
     ·糖化酶的结构组成及分类第10-11页
     ·糖化酶的特性第11-12页
       ·糖化酶的热稳定性和 pH 稳定性第11页
       ·糖化酶的底物特异性第11-12页
     ·双水相萃取技术第12-14页
       ·双水相体系萃取原理第12-13页
       ·影响双水相体系中物质分配的因素第13-14页
   ·汾酒大曲蛋白组学与宏蛋白质组学的研究第14-18页
     ·蛋白质组学的研究第14-17页
       ·蛋白质组学的研究领域第15页
       ·蛋白质组学的分离技术第15-16页
       ·蛋白组学的鉴定技术第16-17页
       ·生物信息学第17页
     ·宏蛋白质组学的研究第17-18页
   ·本研究的目的意义和主要内容第18-20页
2 材料与方法第20-29页
   ·材料第20-21页
     ·原材料第20-21页
     ·试剂第21页
     ·主要设备第21页
   ·实验方法第21-29页
     ·大曲蛋白样品的提取第21-22页
     ·糖化酶的萃取第22-24页
       ·糖化酶活力的测定第22页
       ·PEG/(NH_4)_2SO_4体系双节线图第22页
       ·双水相体系的制备第22页
       ·PEG 分子量及浓度对糖化酶分配行为的影响第22-23页
       ·其它因素对糖化酶分配行为的影响第23页
       ·Starch-PAGE 电泳分析大曲糖化酶活力第23-24页
     ·大曲宏蛋白组的研究第24-25页
       ·主要试剂的配制第24-25页
       ·蛋白样品的沉淀第25页
       ·蛋白溶解方法第25页
     ·蛋白定量(Bradford 法)第25-26页
       ·标准曲线绘制第25-26页
       ·样品浓度测定第26页
     ·双向电泳过程第26-28页
       ·等电聚焦电泳 IEF第26-27页
       ·SDS-PAGE 电泳第27-28页
       ·CBB G-250 染色第28页
       ·扫描及图形分析第28页
     ·蛋白质胶内酶解和质谱鉴定第28-29页
       ·主要试剂的配制第28-29页
       ·蛋白质胶内酶解第29页
       ·LC-MS/MS 检测及数据处理第29页
3 结果与分析第29-48页
   ·双水相萃取糖化酶效果第29-35页
     ·淀粉标准曲线的绘制第29-30页
     ·PEG/(NH_4)_2SO_4双水相体系相图第30-31页
     ·PEG 分子量对糖化酶的影响第31页
     ·不同浓度 PEG 对糖化酶萃取的影响第31-32页
     ·(NH_4)_2SO_4、pH、NaCl 浓度对糖化酶分配行为的影响第32-33页
     ·正交实验第33-34页
     ·Starch-PAGE 电泳分析双水相萃取前后糖化酶的活力第34-35页
   ·汾酒大曲宏蛋白组学的研究第35-48页
     ·蛋白质定量标准曲线的绘制第35页
     ·不同制备方法对双向电泳结果的影响第35-37页
     ·上样量对双向电泳的影响第37页
     ·蛋白的溶解第37-38页
     ·不同长度 IPG 胶条的比较第38页
     ·汾酒大曲宏蛋白组的质谱鉴定第38-45页
     ·汾酒大曲中蛋白质功能分析第45-46页
     ·汾酒大曲中功能菌分析第46-48页
4 讨论第48-50页
5 结论第50-52页
致谢第52-54页
参考文献第54-57页

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