酿酒酵母JJJ1基因敲除提高乙酸耐性和纤维乙醇发性能
| 致谢 | 第8-9页 |
| 摘要 | 第9-11页 |
| Abstract | 第11-12页 |
| 文献综述 | 第13-29页 |
| 1 酿酒酵母乙酸毒性的分子机制 | 第13-14页 |
| 2 酿酒酵母乙酸耐性机制 | 第14-21页 |
| 2.1 细胞膜有关基因与乙酸耐性 | 第14-17页 |
| 2.2 细胞壁有关基因与乙酸耐性 | 第17页 |
| 2.3 氨基酸和能量代谢有关基因与乙酸耐性 | 第17-18页 |
| 2.4 金属离子代谢有关基因与乙酸耐性 | 第18-19页 |
| 2.5 核糖体有关基因与乙酸耐性 | 第19-20页 |
| 2.6 转录因子有关基因与乙酸耐性 | 第20-21页 |
| 3 总结和展望 | 第21-23页 |
| 参考文献 | 第23-29页 |
| 前言 | 第29-31页 |
| 材料与方法 | 第31-48页 |
| 1 菌株与质粒 | 第31-32页 |
| 1.1 菌株 | 第31页 |
| 1.2 质粒 | 第31-32页 |
| 2 培养基的配制 | 第32-33页 |
| 2.1 YPD培养基 | 第32页 |
| 2.2 YPAD培养基 | 第32页 |
| 2.3 YNB培养基 | 第32-33页 |
| 2.4 LB培养基 | 第33页 |
| 2.5 YPG培养基 | 第33页 |
| 2.6 发酵培养基 | 第33页 |
| 3 主要试剂及溶液 | 第33-34页 |
| 4 主要仪器 | 第34-35页 |
| 5 实验方法 | 第35-48页 |
| 5.1 基因操作 | 第35-41页 |
| 5.1.1 大肠杆菌质粒提取 | 第35-36页 |
| 5.1.2 酵母基因组DNA提取 | 第36-37页 |
| 5.1.3 聚合酶链反应 | 第37-38页 |
| 5.1.4 醋酸锂转化法 | 第38-39页 |
| 5.1.5 抗性标记去除 | 第39页 |
| 5.1.6 质粒及PCR产物酶切 | 第39-40页 |
| 5.1.7 DNA与质粒的连接 | 第40页 |
| 5.1.8 大肠杆菌感受态细胞的制备和转化 | 第40-41页 |
| 5.2 发酵性能测试 | 第41页 |
| 5.3 菌株耐受性测试 | 第41页 |
| 5.4 胞内乙酸含量的测定 | 第41-42页 |
| 5.5 生理生化测定 | 第42-44页 |
| 5.5.1 细胞内海藻糖的测定 | 第42-43页 |
| 5.5.2 脂肪酸含量测定 | 第43页 |
| 5.5.3 麦角固醇含量测定 | 第43-44页 |
| 5.6 细胞抗氧化检测 | 第44-46页 |
| 5.6.1 酵母细胞蛋白提取 | 第44页 |
| 5.6.2 BCA法测定蛋白浓度 | 第44-45页 |
| 5.6.3 超氧化物歧化酶活性测试 | 第45-46页 |
| 5.6.4 过氧化氢酶活性测试 | 第46页 |
| 5.7 RNA测序(RNA-Seq) | 第46-48页 |
| 结果与讨论 | 第48-62页 |
| 1 JJJ1在酵母菌株中的表型效应 | 第48-50页 |
| 1.1 多种抑制物耐性比较 | 第48页 |
| 1.2 发酵性能比较 | 第48-50页 |
| 2 JJJ1突变株生理生化分析 | 第50-57页 |
| 2.1 酿酒酵母胞内乙酸和细胞膜组成 | 第50-54页 |
| 2.2 酿酒酵母胞内海藻糖含量 | 第54-56页 |
| 2.3 BY4741和BYΔJJJ1酶活比较 | 第56-57页 |
| 3 JJJ1的表达调控和功能研究 | 第57-62页 |
| 3.1 菌株BYΔJJJ1下调基因 | 第57-59页 |
| 3.1.1 碳水化合物代谢相关基因 | 第57-59页 |
| 3.1.2 细胞膜相关基因 | 第59页 |
| 3.2 菌株BYΔJJJ1上调基因 | 第59-62页 |
| 3.2.1 细胞壁相关基因 | 第59-60页 |
| 3.2.2 核糖体相关基因 | 第60-62页 |
| 全文总结 | 第62页 |
| 创新点 | 第62-63页 |
| 展望 | 第63-64页 |
| 参考文献 | 第64-68页 |
| 在读期间发表论文及申报专利 | 第68页 |
