| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-7页 |
| 第一章 绪论 | 第11-24页 |
| 1.1 元基因组技术 | 第11-15页 |
| 1.1.1 元基因组技术的概述 | 第11-12页 |
| 1.1.2 元基因组技术的应用 | 第12-13页 |
| 1.1.3 元基因组文库技术路线 | 第13-14页 |
| 1.1.4 元基因组文库的筛选 | 第14-15页 |
| 1.2 嗜碱微生物及碱性酶 | 第15-18页 |
| 1.2.1 嗜碱微生物 | 第15-16页 |
| 1.2.2 嗜碱酶及其在食品工业上的应用 | 第16-18页 |
| 1.3 卤代有机物及脱卤酶简介 | 第18-19页 |
| 1.3.1 卤代有机物概述 | 第18页 |
| 1.3.2 脱卤酶简介 | 第18-19页 |
| 1.4 2-卤代酸脱卤酶的研究进展 | 第19-23页 |
| 1.4.1 S-2-卤酸脱卤酶简介 | 第19-20页 |
| 1.4.2 R-2-卤酸脱卤酶 | 第20-21页 |
| 1.4.3 脱卤酶的应用 | 第21-22页 |
| 1.4.4 锰氧化黄氏菌8047的研究进展 | 第22-23页 |
| 1.5 本研究的意义和目的 | 第23-24页 |
| 第二章 沅江明星麻厂碱性池原核微生物多样性分析 | 第24-33页 |
| 2.1 实验材料 | 第24-25页 |
| 2.1.1 样品采集 | 第24页 |
| 2.1.2 菌株、质粒、培养基 | 第24-25页 |
| 2.1.3 主要试剂和仪器 | 第25页 |
| 2.2 实验方法 | 第25-27页 |
| 2.2.1 碱性池DNA提取和检测 | 第25页 |
| 2.2.2 CaCl_2法制备E.coli DH5α化转感受态细胞 | 第25页 |
| 2.2.3 16S rRNA基因文库的构建 | 第25-26页 |
| 2.2.4 聚类树的构建 | 第26-27页 |
| 2.3 实验结果 | 第27-28页 |
| 2.3.1 碱性处理池微生物元基因组DNA的提取与原核微生物16S rRNA基因扩增 | 第27-28页 |
| 2.3.2 16S rRNA基因克隆文库的构建及测序 | 第28页 |
| 2.4 基于16S rRNA基因序列的原核微生物多样性分析 | 第28-31页 |
| 2.5 小结 | 第31-33页 |
| 第三章 沅江麻厂碱性池微生物元基因组文库的构建及食品酶活性筛选 | 第33-41页 |
| 3.1 实验材料 | 第33-34页 |
| 3.1.1 培养基、质粒、菌株 | 第33页 |
| 3.1.2 实验试剂 | 第33-34页 |
| 3.1.3 主要仪器 | 第34页 |
| 3.2 实验方法 | 第34-38页 |
| 3.2.1 湖南沅江元基因组质粒文库的构建 | 第34-35页 |
| 3.2.2 质粒文库的鉴定和保存 | 第35-36页 |
| 3.2.3 热泉元基因组文库的活性筛选 | 第36-38页 |
| 3.3 实验结果 | 第38-39页 |
| 3.3.1 碱性池Fosmid文库的构建 | 第38页 |
| 3.3.2 Fosmid文库中食品水解酶的筛选 | 第38-39页 |
| 3.4 小结 | 第39-41页 |
| 第四章 锰氧化黄氏菌8047脱卤酶基因的克隆、表达和酶学性质分析 | 第41-54页 |
| 4.1 试验材料 | 第41-43页 |
| 4.1.1 菌种和质粒 | 第41页 |
| 4.1.2 实验材料及试剂 | 第41页 |
| 4.1.3 主要仪器 | 第41-42页 |
| 4.1.4 引物 | 第42页 |
| 4.1.5 常用培养基和溶液 | 第42-43页 |
| 4.2 表达载体构建 | 第43-46页 |
| 4.2.1 PCR扩增待插入片段 | 第43-44页 |
| 4.2.2 PCR产物纯化 | 第44页 |
| 4.2.3 质粒载体与目的片段的酶切、连接和转化 | 第44页 |
| 4.2.4 重组表达载体的验证 | 第44-45页 |
| 4.2.5 重组表达载体在大肠杆菌中的诱导表达 | 第45页 |
| 4.2.6 重组蛋白的分离纯化 | 第45页 |
| 4.2.7 酶活测定 | 第45-46页 |
| 4.2.8 酶学性质研究 | 第46页 |
| 4.3 结果与分析 | 第46-53页 |
| 4.3.1 锰氧化黄氏菌(Huangia manganoxydans)8047的脱卤酶基因信息 | 第46-47页 |
| 4.3.2 目的基因的扩增与表达载体的验证 | 第47页 |
| 4.3.3 重组表达载体的诱导表达 | 第47-48页 |
| 4.3.4 重组蛋白的分离纯化 | 第48页 |
| 4.3.5 酶学性质分析 | 第48-53页 |
| 4.4 小结 | 第53-54页 |
| 第五章 本文主要结论及创新点 | 第54-57页 |
| 5.1 主要结论 | 第54-55页 |
| 5.2 创新点与展望 | 第55-57页 |
| 5.2.1 本文的创新点有以下几个方面 | 第55-56页 |
| 5.2.2 根据本文研究有如下展望 | 第56-57页 |
| 参考文献 | 第57-65页 |
| 致谢 | 第65-66页 |
| 个人简介 | 第66页 |
