| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-11页 |
| 第一章 绪论 | 第11-30页 |
| ·乳果糖简介 | 第11-12页 |
| ·乳果糖的生理功能 | 第11页 |
| ·乳果糖的应用 | 第11-12页 |
| ·乳果糖生产技术发展现状 | 第12-16页 |
| ·化学方法生产乳果糖 | 第12-13页 |
| ·酶法生产乳果糖 | 第13-16页 |
| ·表面展示技术研究概况 | 第16-28页 |
| ·噬菌体展示技术 | 第17-18页 |
| ·细菌表面展示技术 | 第18-21页 |
| ·酵母表面展示技术 | 第21-24页 |
| ·芽孢表面展示技术 | 第24-28页 |
| ·立题背景与意义 | 第28-29页 |
| ·本论文的研究工作 | 第29-30页 |
| 第二章 基于 crust 层蛋白的枯草芽孢杆菌芽孢表面展示系统的构建 | 第30-46页 |
| ·引言 | 第30页 |
| ·实验材料 | 第30-32页 |
| ·菌株和质粒 | 第30-31页 |
| ·主要试剂 | 第31页 |
| ·培养基 | 第31-32页 |
| ·主要仪器和设备 | 第32页 |
| ·主要试剂配方 | 第32页 |
| ·实验方法 | 第32-40页 |
| ·枯草芽孢杆菌（B. subtilis 168）基因组的提取 | 第32-33页 |
| ·编码芽孢衣壳蛋白基因的克隆 | 第33-34页 |
| ·pJS700a 质粒的提取与验证 | 第34-35页 |
| ·基本质粒的构建 | 第35-36页 |
| ·重组子的筛选和鉴定 | 第36页 |
| ·芽孢表面展示 EGFP 和β-Gal 重组质粒的构建 | 第36-37页 |
| ·表面展示 EGFP 和β-Gal 重组质粒转化 B. subtilis 168 与转化子的鉴定 | 第37-38页 |
| ·重组芽孢的制备 | 第38-39页 |
| ·荧光强度分析 | 第39页 |
| ·荧光显微镜检测重组芽孢表面展示的β-Gal | 第39页 |
| ·标准曲线 | 第39页 |
| ·重组芽孢表面展示β-Gal 活力的测定 | 第39-40页 |
| ·结果与讨论 | 第40-45页 |
| ·芽孢衣壳蛋白基因的克隆 | 第40页 |
| ·重组质粒的构建 | 第40-41页 |
| ·枯草芽孢杆菌转化子的鉴定 | 第41-42页 |
| ·荧光光谱分析重组芽孢表面展示的 EGFP | 第42-43页 |
| ·荧光显微镜分析重组芽孢表面展示的β-Gal | 第43-44页 |
| ·重组芽孢表面展示的β-Gal 活力的测定 | 第44-45页 |
| ·本章小结 | 第45-46页 |
| 第三章 β-半乳糖苷酶芽孢表面展示系统的构建 | 第46-63页 |
| ·引言 | 第46页 |
| ·实验材料 | 第46-47页 |
| ·菌株和质粒 | 第46页 |
| ·主要试剂 | 第46-47页 |
| ·主要仪器 | 第47页 |
| ·培养基 | 第47页 |
| ·主要试剂 | 第47页 |
| ·实验方法 | 第47-53页 |
| ·芽孢衣壳蛋白基因 cotB、cotC 和 cotG 的扩增 | 第47-48页 |
| ·基本质粒的构建 | 第48页 |
| ·整合型表达质粒的构建 | 第48页 |
| ·游离型表达质粒 pEB03-cotX-bgaB 的构建 | 第48-50页 |
| ·转化子的筛选与鉴定 | 第50页 |
| ·重组质粒分别转化 B. subtilis 168 和 B. subtilis WB60040 | 第50页 |
| ·重组子的筛选与鉴定 | 第50-51页 |
| ·重组菌芽孢悬浮液的制备 | 第51页 |
| ·枯草芽孢杆菌芽孢衣壳蛋白的提取 | 第51页 |
| ·β-Gal 在枯草芽孢杆菌芽孢表面的表达情况分析及其展示的β-Gal 性质研究 | 第51-53页 |
| ·四种不同类型芽孢表面展示的β-Gal 活力的比较 | 第53页 |
| ·游离型表达重组菌的芽孢表面展示β-Gal 的酶活测定 | 第53页 |
| ·结果与讨论 | 第53-62页 |
| ·重组质粒的构建及融合基因的染色体整合 | 第53-55页 |
| ·Western blot 分析 | 第55-56页 |
| ·荧光显微镜观察 | 第56-57页 |
| ·流式细胞仪分析 | 第57页 |
| ·重组芽孢表面展示β-Gal 的酶学性质研究 | 第57-60页 |
| ·四种不同类型芽孢表面展示的β-Gal 活力的比较 | 第60页 |
| ·游离型表达的重组芽孢表面展示的β-Gal | 第60-62页 |
| ·本章小结 | 第62-63页 |
| 第四章 葡萄糖异构酶芽孢表面展示系统的构建及β-半乳糖苷酶—葡萄糖异构酶双酶体系的应用 | 第63-85页 |
| ·引言 | 第63页 |
| ·实验材料 | 第63-64页 |
| ·菌株和质粒 | 第63-64页 |
| ·主要试剂 | 第64页 |
| ·主要仪器 | 第64页 |
| ·培养基 | 第64页 |
| ·实验方法 | 第64-69页 |
| ·葡萄糖异构酶基因 xylA 的克隆、表达、纯化及重组酶性质研究 | 第64-68页 |
| ·单展示葡萄糖异构酶芽孢表面系统的构建 | 第68页 |
| ·共展示β-Gal 和葡萄糖异构酶芽孢表面系统的构建 | 第68页 |
| ·芽孢表面对重组葡萄糖异构酶吸附的研究 | 第68-69页 |
| ·共展示β-Gal 和葡萄糖异构酶的重组芽孢在乳果糖制备中的应用研究 | 第69页 |
| ·乳果糖含量的测定 | 第69页 |
| ·结果与讨论 | 第69-83页 |
| ·重组质粒 pET-28a-xylA 的构建 | 第69-70页 |
| ·重组菌株 E. coli BL21(DE3)/pET-28a-xylA 的构建 | 第70页 |
| ·重组菌株 E. coli BL21(DE3)/pET-28a-xylA 诱导表达条件的优化 | 第70-72页 |
| ·培养基的选择 | 第72-73页 |
| ·重组酶的分离纯化 | 第73-74页 |
| ·重组葡萄糖异构酶酶学性质研究 | 第74-76页 |
| ·葡萄糖异构酶芽孢表面展示系统的构建 | 第76-79页 |
| ·表面展示β-Gal 的重组芽孢对葡萄糖异构酶的吸附研究及其β-Gal—葡萄糖异构酶双酶系统在乳果糖制备中的应用 | 第79-83页 |
| ·本章小结 | 第83-85页 |
| 第五章 纤维二糖差向异构酶芽孢表面展示系统的构建及其在乳果糖制备中的应用 | 第85-96页 |
| ·引言 | 第85-86页 |
| ·实验材料 | 第86页 |
| ·菌株和质粒 | 第86页 |
| ·主要试剂 | 第86页 |
| ·主要仪器 | 第86页 |
| ·培养基 | 第86页 |
| ·引物 | 第86页 |
| ·实验方法 | 第86-88页 |
| ·表面展示载体 pEB03-cotX-Csce 的构建 | 第86-87页 |
| ·重组质粒 pEB03-cotX-Csce 的转化 B. subtilis WB600 及验证 | 第87页 |
| ·芽孢悬浮液的制备 | 第87页 |
| ·芽孢表面展示纤维二糖差向异构酶活力的测定 | 第87页 |
| ·HPLC 测定乳果糖 | 第87页 |
| ·芽孢表面展示纤维二糖差向异构酶性质研究 | 第87-88页 |
| ·重组芽孢转化乳糖的研究 | 第88页 |
| ·结果与讨论 | 第88-95页 |
| ·表面展示载体 pEB03-cotX-Csce 的构建 | 第88-90页 |
| ·重组质粒 pEB03-cotX-Csce 转入枯草芽孢杆菌及其转化子的验证 | 第90页 |
| ·表面展示融合蛋白 CotX-CsCE 的重组芽孢悬浮液的制备 | 第90页 |
| ·芽孢表面展示纤维二糖差向异构酶性质的研究 | 第90-93页 |
| ·芽孢表面展示的 CsCE 催化乳糖生产乳果糖 | 第93-95页 |
| ·本章小结 | 第95-96页 |
| 主要结论与展望 | 第96-98页 |
| 论文创新点 | 第98-99页 |
| 致谢 | 第99-100页 |
| 参考文献 | 第100-108页 |
| 附录 | 第108页 |
